ＰＨＬＣＸ　Ｎｆｌａｇ３／小窩蛋白－１重組質粒的構建及融合基因在２９３Ｔ細胞中的表達

杞少華　彭芳芳　張百芳　沈　晗　吳少波　武棟成

摘要：構建重組真核表達質粒PHLCX Nflag3／小窩蛋白-1，并在293T細胞中表達。用PCR的方法擴增cDNA文庫中的人小窩蛋白-1基因，連接在真核表達載體PHLCX Nflag3的短肽標簽flag的下游，用限制性酶切和測序的方法鑒定；將重組質粒以脂質體法轉染293T細胞，Western blotting法檢測蛋白質的表達。結果顯示，雙酶切出現兩個片段，分別與空載體和人小窩蛋白-1的cDNA分子質量大小相符，測序結果符合人小窩蛋白-1的cDNA序列；Western blotting顯示構建的新載體能夠在293T細胞中表達小窩蛋白-1／flag融合蛋白，表明已成功構建了能在293T細胞中高效表達小窩蛋白-1／falg融合蛋白的真核表達載體PLHCX Nflag3／小窩蛋白-1。

關鍵詞：小窩蛋白-1；基因表達；293T細胞

中圖分類號：Q782

文獻標識碼：A

文章編號：1007—7847(2005)04—0331—05