５種珍稀食藥用真菌活性提取物對(duì)果蠅壽命影響的研究

摘 要：探討了松茸、櫟金錢菌、蜂窩菌、云芝、杏鮑菇活性提取物對(duì)果蠅壽命的影響，分別用這5種食藥用真菌活性提取物各以5、20g／L的劑量加入培養(yǎng)基中培養(yǎng)果蠅，觀察其對(duì)果蠅壽命的影響。結(jié)果表明，松茸、櫟金錢菌、蜂窩菌、云芝、杏鮑菇的活性提取物能顯著延長(zhǎng)果蠅的平均壽命和半數(shù)死亡時(shí)間，其平均壽命延長(zhǎng)率分別達(dá)23.96％、53．22％、23．09％、32．58％、20％。這提示松茸、櫟金錢菌、蜂窩菌、云芝、杏鮑菇都具有良好的延壽效果。

關(guān)鍵詞：松茸；櫟金錢菌；蜂窩菌；云芝；杏鮑菇；果蠅；壽命

中圖分類號(hào)：R285

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007-7847(2006)02-0166-06

我國(guó)60歲及以上老年人口每年以5％左右的速度增長(zhǎng)，因此，延長(zhǎng)老年人的壽命并且使之保持良好的健康狀況就顯得非常重要。各種延緩衰老的藥物、保健食品的研究迅速發(fā)展，并取得了重要的進(jìn)展。然而關(guān)于食藥用真菌延緩衰老研究的報(bào)道不多，采用果蠅生存測(cè)驗(yàn)來研究食藥用真菌延緩衰老的更為罕見。而關(guān)于松茸、蜂窩菌、櫟金錢菌活性提取物延緩衰老作用的研究尚未見報(bào)道。松茸(Tricholoma matsutake)學(xué)名松口蘑，菌肉肥厚，具有香氣，味道鮮美，具有強(qiáng)身、益腸胃、理氣、化痰、抑制癌細(xì)胞增殖等功能。蜂窩菌(Hexagonia tenuis)，微苦帶澀，宜腸、健胃、治胃氣痛。櫟金錢菌(Collybiadryophila)別名櫟小皮傘，可食。云芝(Coriolusversicolor)有抗癌、降脂、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化、增強(qiáng)免疫功能和改善學(xué)習(xí)記憶等作用。杏鮑菇(Pleurotuseryngii)有降血壓、降血脂、改善腸胃功能和美容的作用。本實(shí)驗(yàn)研究松茸、蜂窩菌、櫟金錢菌、云芝和杏鮑菇五種珍稀食藥用真菌的活性提取物對(duì)果蠅壽命的影響，確定其延壽功效，為食藥用真菌延壽研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為開發(fā)新的延壽保健食品和藥品提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料

1) 野生型純種黑腹果蠅 (Drosophilamelanogaster)，由華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院提供。2)松茸、蜂窩菌、櫟金錢菌、云芝和杏鮑菇的活性提取物，由廣東粵微食用菌技術(shù)有限公司提供。3)基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方：超細(xì)玉米粉100g，紅糖135g，瓊脂15g，苯甲酸1．5g (溶解于30mL95％的乙醇)，干酵母10g，蒸餾水740mL。

1．2 方法

1．2．1 待測(cè)食藥用真菌活性成份的提取

松茸、蜂窩菌、櫟金錢菌、云芝和杏鮑菇的子實(shí)體各取2kg，依次分別用14L純水、無水乙醇和石油醚浸泡24h，定性濾紙抽濾2次，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀60℃濃縮后置60℃干燥箱干燥至流浸膏狀。然后混勻這3種溶劑所提取的活性成份備用。

1．2．2 培養(yǎng)基的配制

參照鐘耀廣的方法配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基，培養(yǎng)管采用75mm×15mm的指管，每管用注射器注射培養(yǎng)基1．5 mL，以棉花塞封口，培養(yǎng)管斜放以使培養(yǎng)基形成約40°斜面。試驗(yàn)組培養(yǎng)基采用基礎(chǔ)培養(yǎng)基在水浴鍋60℃恒溫下分別按5、20g／L的濃度加入各食藥用真菌活性提取物配制而成．新鮮配制的培養(yǎng)基在25℃培養(yǎng)箱中放置24h，如無菌生長(zhǎng)即可將果蠅引入。

1．2．3 果蠅生存試驗(yàn)

取成熟野生型黑腹果蠅于裝有基礎(chǔ)培養(yǎng)基的50mL三角錐瓶?jī)?nèi)交配產(chǎn)卵，在形成蛹時(shí)去掉親本蠅，收取10h內(nèi)羽化的果蠅，用乙醚將其麻醉后，即分雌雄，挑取體型大小相近的果蠅隨機(jī)分組。每種待測(cè)食藥用真菌活性提取物設(shè)兩個(gè)劑量組，分別用含樣品濃度5、20g／L的培養(yǎng)基培養(yǎng)，空白對(duì)照組用基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)。每組共用160只果蠅，雌雄各半，各4支管，每管20只果蠅。給藥組的果蠅在基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)到第12d后。轉(zhuǎn)到含不同濃度樣品的培養(yǎng)基培養(yǎng)直至其全部死亡。實(shí)驗(yàn)在(25±1)℃，相對(duì)濕度50％～70％的培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行。每4d更換新鮮配制的培養(yǎng)基1次。每天定時(shí)統(tǒng)計(jì)果蠅死亡數(shù)直至果蠅全部死亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后計(jì)算每組的平均壽命、半數(shù)死亡時(shí)間和最高壽命(每組最后死亡的10只果蠅的平均存活天數(shù)為該組的最高壽命)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSSl0．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用LSD法(最小顯著性差異法)作方差分析。

2 結(jié)果與分析

2．1 松茸活性提取物對(duì)果蠅壽命的影響

從表1可知，20g／L的松茸活性提取物能提高雌、雄果蠅的平均壽命(P<0．01)，雌、雄果蠅的平均壽命延長(zhǎng)率分別達(dá)18．72％和23．95％，并使雌、雄果蠅的半數(shù)死亡時(shí)間延長(zhǎng)了36．5％和48．96％，使雄性果蠅的最高壽命延長(zhǎng)了22．08％(P<0．01)，但對(duì)雌性果蠅的最高壽命的影響不明顯。5g／L的松茸活性提取物也能提高果蠅的平均壽命和半數(shù)死亡時(shí)間，雌、雄果蠅的平均壽命延長(zhǎng)率分別為5．69％和16．50％。這表明，果蠅的平均壽命、半數(shù)死亡時(shí)間都隨松茸活性提取物劑量的增加而延長(zhǎng)，并且同一劑量的松茸活性提取物對(duì)雄性果蠅的延壽效果比對(duì)雌性果蠅的好。

2．2 櫟金錢菌活性提取物對(duì)果蠅壽命的影響

從表2可知，20g／L的櫟金錢菌活性提取物在雌、雄果蠅平均壽命、半數(shù)死亡時(shí)間和最高壽命3個(gè)指標(biāo)上都具極顯著差異性(P<0．01)，雌、雄果蠅平均壽命延長(zhǎng)率分別達(dá)22．92％和53．22％，半數(shù)死亡時(shí)間分別延長(zhǎng)了36．37％和101．18％，最高壽命分別延長(zhǎng)了16．69％和31．90％．5 g／L的櫟金錢菌活性提取物也能提高果蠅的平均壽命、半數(shù)死亡時(shí)間和最高壽命，雌、雄果蠅平均壽命延長(zhǎng)率分別為7．02％和17．32％，果蠅的平均壽命、半數(shù)死亡時(shí)間和最高壽命都隨櫟金錢菌活性提取物劑量的增加而延長(zhǎng)。櫟金錢菌活性提取物對(duì)雄性果蠅的延壽效果優(yōu)于對(duì)雌性果蠅的。

2．3 蜂窩菌活性提取物對(duì)果蠅壽命的影響

從表3可知，5g／L的蜂窩菌活性提取物能延長(zhǎng)果蠅的平均壽命(P﹤O．01)、半數(shù)死亡時(shí)間(雄果蠅P﹤O．05，雌果蠅P﹤O．01)和最高壽命，雌、雄果蠅平均壽命延長(zhǎng)率分別達(dá)23．09％和16．41％，半數(shù)死亡時(shí)間分別延長(zhǎng)了39．67％和19．03％。20g／L的蜂窩菌也能延長(zhǎng)雌性果蠅的平均壽命(P﹤O．05)和半數(shù)死亡時(shí)間(P﹤O．01)，而對(duì)于雄性果蠅的延壽效果不甚明顯。低劑量蜂窩菌活性提取物的延壽效果比高劑量的好。蜂窩菌活性提取物對(duì)雌性果蠅的延壽效果優(yōu)于對(duì)雄性果蠅的。

2．4 云芝活性提取物對(duì)果蠅壽命的影響

從表4可知，5g／L和20g／L的云芝活性提取物都能延長(zhǎng)雄性果蠅的平均壽命、半數(shù)死亡時(shí)間(P

2．5 杏鮑菇活性提取物對(duì)果蠅壽命的影響

從表5可知，5g／L的杏鮑菇活性提取物能延長(zhǎng)雌雄果蠅的平均壽命和半數(shù)死亡時(shí)間，平均壽命延長(zhǎng)率分別為11．67％和12．62％．20 g／L的杏鮑菇活性提取物也能延長(zhǎng)雌性果蠅的平均壽命和半數(shù)死亡時(shí)間(P﹤O．01)，平均壽命延長(zhǎng)率達(dá)20％。杏鮑菇活性提取物對(duì)雌性果蠅的延壽效果優(yōu)于對(duì)雄性果蠅。

2．6 松茸、櫟金錢菌、蜂窩菌、云芝、杏鮑菇的活性提取物對(duì)果蠅壽命的影響

從圖1可知，在本實(shí)驗(yàn)所研究的幾種食藥用真菌中，櫟金錢菌活性提取物的延壽效果最好，雌、雄果蠅平均壽命延長(zhǎng)率分別達(dá)22．92％和53．22％，其次是云芝，雌、雄果蠅平均壽命延長(zhǎng)率分別達(dá)23．84％和32．58％。這5種食藥用真菌的延壽效果具有性別差異性。櫟金錢菌、松茸、云芝的活性提取物對(duì)雄性果蠅的延壽效果優(yōu)于對(duì)雌性果蠅的；但蜂窩菌和杏鮑菇活性提取物的延壽效果則雌性果蠅優(yōu)于雄性果蠅。此外，這5種食藥用真菌活性提取物最佳劑量組的雌性果蠅平均壽命延長(zhǎng)率趨于恒定，在20％上下波動(dòng)。

3 討論

衰老通常是指隨著年齡推進(jìn)而伴隨生殖力的減弱和死亡率增加的漸進(jìn)性功能喪失，是生命過程中的正常生理現(xiàn)象。延緩衰老主要是提高生命效率，改善機(jī)體體質(zhì)并能在遺傳特性所決定的限度內(nèi)有效延長(zhǎng)機(jī)體壽命。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，松茸、櫟金錢菌、蜂窩菌、云芝、杏鮑菇的活性提取物能顯著地延長(zhǎng)果蠅的壽命，具有良好的延壽效果。

在果蠅生存測(cè)驗(yàn)的幾個(gè)指標(biāo)中，平均壽命是最重要的指標(biāo)，是綜合藥效的反映；而半數(shù)死亡時(shí)間則偏向于反映藥物對(duì)體弱果蠅的延壽效果；最高壽命偏向于反映藥物對(duì)強(qiáng)壯的果蠅的延壽效果及果蠅對(duì)某藥物過多攝取的耐受力。本實(shí)驗(yàn)所測(cè)的這5種食藥用真菌活性提取物對(duì)延長(zhǎng)半數(shù)死亡時(shí)間都有比較好的效果，其延長(zhǎng)率普遍比同組的平均壽命延長(zhǎng)率高，而對(duì)最高壽命的延長(zhǎng)效果則不甚明顯。這表明所測(cè)食藥用真菌活性提取物能很好地增強(qiáng)體弱果蠅的體質(zhì)，從而延長(zhǎng)其壽命，但長(zhǎng)期過量攝取會(huì)減弱延壽效果甚至可能出現(xiàn)積蓄中毒的現(xiàn)象。在本實(shí)驗(yàn)中，蜂窩菌就出現(xiàn)劑量太大反而延壽效果減弱的現(xiàn)象。

機(jī)體的衰老是一個(gè)全身性、漸進(jìn)性的復(fù)雜過程，且導(dǎo)致衰老的因子眾多，因而采用綜合性的延壽藥物搭配可能會(huì)收到更好的效果。許愛霞的研究表明，何首烏多糖和枸杞多糖對(duì)D－半乳糖致衰老模型小鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、SOD(Superoxidedimutase，超氧化物歧化酶)和GSH-Px(Glutathione Peroxidase，谷胱甘肽過氧化物酶)的升高和對(duì)腦LF (Lipofusin，脂褐素)及腎MDA(Malondialdehyde，丙二醛)的降低都有顯著協(xié)同作用，從而具有協(xié)同延壽作用。同時(shí)，藥物的配伍也可以減緩藥物的副作用，如半夏配伍生姜可減緩半夏的辛烈、刺激咽喉致聲音嘶啞等副反應(yīng)。延壽藥物的交替使用也可能可以減弱機(jī)體對(duì)藥物的適應(yīng)從而強(qiáng)化延壽效果，減低副作用。松茸、櫟金錢菌、蜂窩菌、云芝、杏鮑菇的活性提取物是否存在配伍效應(yīng)，這有待進(jìn)一步的研究。

藥物的作用具有性別差異性。白晨等人的研究表明，靈芝-松茸共酵多糖的同一劑量對(duì)小鼠的抑瘤作用普遍雄性好于雌性。本實(shí)驗(yàn)所測(cè)的櫟金錢菌、松茸、云芝的活性提取物的同一劑量對(duì)果蠅的延壽效果也是普遍雄性好于雌性。

田光輝等人的研究表明，松茸活性提取物有免疫增強(qiáng)作用，可明顯提高連續(xù)注射CY(Cyclophosphamide，環(huán)磷酰胺)和可的松造成免疫功能低下小鼠的免疫功能，使之保持正常。云芝多糖則能提高小鼠機(jī)體各組織的硒谷胱甘肽過氧化物酶的活性，提高機(jī)體防御活性氧損傷能力；對(duì)CY所致小鼠白細(xì)胞減少有明顯回升作用，提高小鼠脾細(xì)胞IL-2(Interleukin-2，白細(xì)胞介素－2)、干擾素C的水平。杏鮑菇多糖具有明顯的抗自由基氧化的功能，可阻止細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化，提高小鼠GSH-Px活性。Ernesto Bonilla用褪黑素增強(qiáng)果蠅抗氧化能力，延長(zhǎng)果蠅的壽命。我們實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，松茸、云芝、杏鮑菇、櫟金錢菌和蜂窩菌活性提取物都能顯著延長(zhǎng)果蠅壽命，具有良好的延壽效果，其延壽機(jī)制也可能與抗氧化損傷和調(diào)節(jié)免疫功能有關(guān)。