結直腸癌中ｃ－ｅｒｂＢ－２和Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表達與臨床病理關系

結直腸癌中c-erbB-2和E-cadherin蛋白表達與臨床病理關系

谷化平 周翠玲 解放軍第251醫院病理科 河北北方學院第一附屬醫院普外科

摘要：為了探討c-erbB-2和E-cadhefin(E-cad)蛋白表達與結直腸癌浸潤轉移的關系及相關性，應用免疫組織化學技術，檢測90例結直腸癌中c-erbB-2和E-cad蛋白表達，結果表明：90例結直腸癌中c-erbB，2和E-cad蛋白陽性表達率分別為52.2％(47/90)和46.7％(42/90)，c-erbB-2高表達及E-cad低表達與結直腸癌Dukes分期、漿膜浸潤和淋巴結轉移均呈正相關(P<0.05)，結直腸癌中c-erbB-2表達與E-cad表達呈負相關(P<0.05)，c-erbB-2和E-cad表達與結直腸癌浸潤轉移密切相關，聯合檢測其蛋白表達可作為判斷結直腸癌預后的客觀指標。

關鍵詞：結直腸癌；c-erbB-2基因；E，cadhefin蛋白；免疫組織化學

中圖分類號：R735.3

文獻標識碼：A

文章編號：1007-7847(2007)02-0158-03

結直腸癌的形成和轉移的發生是一個復雜的生物學過程，受多種基因或多因子共同調控作用的結果，我們采用免疫組織化學方法檢測結直腸癌組織中c-erbB-2和E—cadherin(E-cad)蛋白表達狀況，旨在探討這兩種蛋白表達與結直腸癌浸潤轉移的相關及其臨床意義，為預測結直腸癌浸潤轉移提供客觀參考指標。

1材料和方法

1.1標本來源

取我院普外科2000年2月-2006年8月確診為結直腸癌90例，其中男54例，女36例，年齡31～81歲，平均62.9±7.89歲，取同期患者結直腸腺瘤和遠癌切緣處正常結直腸黏膜組織(距癌灶>4cm)各20例作為對照觀察，標本均經10％福爾馬林液固定，石蠟包埋，4μm厚連續切片。

1.2試劑

鼠抗人c-erbB-2、E-cad單克隆抗體和LSAB試劑盒購自邁新生物技術公司(均為即用型)。

1.3方法

1.3.1免疫組織化學染色

采用微波-鏈霉菌素-生物素(microwave-labelledstrept-avidin biotin，MW-LSAB)免疫組織化學法和微波一金屬鹽抗原修復技術，即將切片常規脫蠟水化后，放入枸櫞酸緩沖液(10mmol/L，pH6.0)內，用微波儀170W輻射5min，冷卻后水洗，其他操作流程同常規LSAB法，所不同者為三步抗原孵育和正常血清封閉用微波儀130W分別輻射5min，保溫2min即可。

1.3.2對照設計

實驗用已知c-erbB-2和E-cad陽性乳腺癌組織作陽性對照，用磷酸鹽緩沖液代替c-erbB-2和E-cad單克隆抗體作為陰性對照，H₂O₂-DAB顯色。

1.4結果判斷

c-erbB-2和E-cad在細胞質呈棕黃色染色者為陽性(+)，凡無著色者為陰性(一)。

1.5統計學處理

采用X²檢驗，P<0.05為差異有顯著性意義。

2結果

2.1 c-erbB-2和E-cad蛋白在結直腸良、惡性病變中的表達

免疫組織化學染色顯示，c-erbB-2和E-cad蛋白陽性產物呈棕黃色或棕褐色，定位于細胞質(圖1、2)，90例結直腸癌、20例結直腸腺瘤和20例正常結直腸黏膜中，c-erbB-2表達陽性率分別為52.2％(47／90)、20.0％(2／20)和0％(0／20)，c-erbB-2陽性表達率在結直腸癌中顯著高于結直腸腺瘤和正常結直腸黏膜組織(X²=14.60，X²=11.97，P<0.05)，90例結直腸癌、20例結直腸腺瘤和20例正常結直腸黏膜中，E-cad表達陽性率分別為46.7％(42/90)、100％(20/20)和100％(20/20)，E-cad陽性表達率在結直腸癌中顯著低于結直腸腺瘤和正常結直腸黏膜組織(X=11.95，X²=12.12，P<0.05)。

2.2 c-erbB-2和E-cad蛋白表達與結直腸癌臨床病理指標的關系

c-erbB-2和E-cad蛋白表達均與結直腸癌腫瘤大小和病理組織學分級無關，c-erbB-2高表達及E-cad蛋白低表達與大腸癌Dukes分期、漿膜浸潤和淋巴結轉移呈正相關(P<0.05)，見表1。

2.3 c-erbB-2和E-cad蛋白表達之間的相互關系

在結直腸癌c-erbB-2陽性表達的47例中E-cad陽性表達為18例(34.6％)，c-erbB-2陰性表達的43例中E-cad陽性表達為24例(63.2％)，差異有顯著性(X²=8.60，P<0.05)，c-erbB-2表達與E-cad表達之間呈負相關。

3討論

癌基因c-erbB-2(又稱12eu、HER-2基因)定位于第17號染色體q²¹上，編碼相對分子質量為185 kD的酪氨酸激酶蛋白，即P185蛋白，c-erbB-2結構與表皮生長因子受體(EGTR)蛋白的氨基酸排列順序具有高度的同源性，它可能與未知配體結合后，通過增加蛋白激酶的活性，促進細胞的分裂、增殖和轉化，在人類腫瘤中，c-erbB-2的分子改變是正?；虍a物的過表達，c-erbB-2基因擴增或過表達與腫瘤的發生發展過程密切相關，提示死亡危險性增大，是癌癥進展和轉移的標志，表明臨床預后較差的，E-cad是一種單鏈跨膜糖蛋白，作為鈣離子依賴性黏附分子家族中的一員，主要參與介導特定組織或器官同種細胞間的黏附，并在許多上皮組織形成和功能維持中起著關鍵作用，是上皮細胞分化成熟的標志，當E-cad的功能障礙或缺失會使正常細胞的黏附缺失，影響細胞的分化和黏著，腫瘤細胞間的相互黏附力下降，就可脫離原發灶而發生侵襲和轉移，本研究采用免疫組化方法，聯合檢測了c-erbB-2和E-cad蛋白在結直腸癌、結直腸瘤和正常結直腸黏膜組織中的表達，結果顯示，c-erbB-2蛋白表達陽性率在結直腸癌中均顯著高于結直腸腺瘤和正常結直腸黏膜組織(P<0.05)，E-cad蛋白表達陽性率在結直腸癌中顯著低于結直腸腺瘤和正常結直腸黏膜組織(P<0.05)，隨著結直腸癌Dukes分期增高、漿膜浸潤和淋巴結轉移，c-erbB-2蛋白表達陽性率顯著增高(P<0.05)，E-cad蛋白表達陽性率則顯著減低(P<0.05)，提示c-erbB-2蛋白高表達及E-cad蛋白低表達均在大腸上皮細胞的惡性轉化、侵襲轉移的生物學行為過程中起到重要促進作用，因此，在臨床病理活檢中，檢測其基因蛋白表達有助于深入了解腫瘤的發生發展，并可為診斷、預后判斷和臨床治療提供重要依據。

惡性腫瘤的發生發展、浸潤與轉移是一個復雜的生物學過程，受多種基因的調控，有關結直腸癌中c-erbB-2和E-cad蛋白表達的相關性研究報道少見，本研究結果顯示，在結直腸癌中c-erbB-2蛋白表達與E-cad蛋白表達之間呈負相關，提示在結直腸癌的發生發展、臨床進展和轉移的病理過程中，c-erbB-2和E-cad可能發揮著協同效應，共同參與了結直腸癌的演化過程，其具體機理有待進一步探討。