黃芪與三七有效成分配伍對動脈粥樣硬化大鼠模型ＴＩＭＰ－１表達的影響

摘要：目的利用高脂飼料誘發動脈粥樣硬化(AS)大鼠模型，觀察益氣活血代表中藥黃芪、三七有效成分黃芪槲皮素(Que)和三七總皂甙(tPNs)抗AS的作用，探討二者單獨使用及不同比例組方對AS大鼠模型血清基質金屬蛋白酶特異性抑制物(TIMP－1)表達的影響。方法將64只雄性健康wistar大鼠隨機分為正常組和造模組，正常組10只喂養普通飼料，造模組54只喂養高脂飼料。造模成功后，造模組大鼠停喂高脂飼料改為普通飼料喂養，剩余48只造模組大鼠再隨機分為6組，用不同藥物干預灌胃30 d后，取各組大鼠血清用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測血清TIMP－1的表達。結果Que、tPNS單用以及2:1組方、3:1組方皆可增加TIMP－1表達，以3:1組方為最優組。結論Que、tPNS單用及2:1、3:1組方皆可增加TIMP－1表達，聯合用藥比單獨應用抗AS效果好，并在一定范圍內隨著益氣藥物劑量增加，抗AS作用增強。這可能是益氣活血法抗AS作用機制之一。

關鍵詞：動脈粥樣硬化；槲皮素；三七總皂甙；基質金屬蛋白酶抑制物

中圖分類號：R543.5 R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1672—1349(2007)04—0326—03

動脈粥樣硬化(AS)是嚴重危害人類健康的因素之一，其形成涉及許多方面，目前大量研究已證實基質金屬蛋白酶 (MBPs)及其特異性抑制物(TIMPs)在AS的發生發展過程中起著十分重要的作用。本實驗通過建立大鼠AS模型，來研究黃芪槲皮素(Que)和三七總皂甙(tPNS)單用及2:1、3:1組方對大鼠血清TIMP－1表達的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 雄性Wistar大鼠64只(由山西醫科大學實驗動物中心提供，二級)，體重(180±20)g。各組動物單籠飼養，自由飲水。

1.2 實驗用藥品、試劑 槲皮素粉劑中西安華琦科技有限公司提供；三七總皂甙粉劑由云南玉溪市維和制藥有限公司提供；川芎嗪片劑由預新國際龍源藥業有限公司提供；大鼠TIMP－1定量ELISA試劑盒購內上海森雄科技實業有限公司；其余試劑均為國產分析純。

1.3 主要儀器 Novapath TM全自動酶標儀(日本BIO－RAD公司生產)，醫用低溫冰箱(青島海爾公司生產)，高速低溫離心機(德國Eppendorf公司生產)，均由山西醫科大學實驗中心提供。

1.4 動物模型制作及分組

1.4.1 AS模型的建立 健康雄性Wistar大鼠64只，適應性飼養1周后，按體重編號，完全隨機分組，正常組l0只，造模組54只，均自由進食、進水。正常組喂養普通飼料，造模組喂養AS飼料(蛋黃粉10％、豬油5％、豬膽鹽0.5％、基礎飼料84.5％)，均喂養3個月。3個門后隨機處死2只正常組大鼠，6只造模組大鼠，以觀察造模是否成功。

1.4.2 實驗分組及藥物干預 造模成功后，AS飼料組大鼠均停喂AS飼料，改為普通飼料喂養，剩余48只大鼠，再隨機分為6組，每組8只。槲皮素治療組：槲皮素100 mg/(kg·d)；三七總皂甙治療組：二七總皂甙I00 mg/(kg·d)；槲皮素、三七總皂甙2:1組(2:1組)：槲皮素100 mg/(kg·d)、三七總皂甙50 mg/(kg·d)；槲皮素、三七總皂甙3：1組(3:l組)：槲皮素150 mg/(kg·d)、三七總皂甙50 mg/(kg·d)；川芎嗪對照組：川芎嗪200 mg/(kg·d)；正常組：純凈水4 mL/d；模型組：純凈水4 mL/d。各組均灌胃30d。

1.5 標本采集與檢測各組大鼠于藥物干預30 d后，禁食、禁水12 h，從腹主動脈取血每只2 mL，注入試管中，2 000 r／min離心15 min，分離出血清，分別做好標記，一40℃冷凍，用于檢測血清TIMP－l的表達。血清HMP－1的檢測采用ELISA法，嚴格按照說明進行檢測。

1.6 統計學處理計量資料以均數±標準差

表示，使用SPSS 11.5統計軟件進行統計分析，采用方差分析和SNK－q檢驗。

2 結 果

2.1 藥物治療后各組大鼠血清TIMP－1表達量比較與模型組相比，各干預藥物及川芎嗪對照組均可增加AS大鼠血清TIMP－1的表達，3:1組血清TIMP－l表達量高于川芎嗪組及各藥物干預組(P＜0.05或P＜0.01)；槲皮素治療組和三七總皂甙組對增加AS大鼠血清TIMP－1表達量無統計學意義(P＞0.05)，故不能認為槲皮素和三七總皂甙對促進AS大鼠血清TIMP－1表達量不同；可認為槲皮素、三七總皂甙、3:1組方、2:1組方與川芎嗪均可增加AS大鼠血清TIMP－1的表達，3:1組血清TIMP－1的表達最高，效果優于其他干預藥物及川芎嗪對照組，3:1組為最優組。詳見表1。

3 討 論

動脈粥樣硬化是嚴重危害人類健康的因素之一，其形成涉及許多方面，目前大量研究已證實MMPs及其TIMPs在AS的發生發展過程中起著十分重要的作用。

TIMPs是新近發現的一個低分子量蛋白質家族^[1]，是MMPs的天然性、生理性、內源性抑制劑，它通過對MMPs的抑制，在AS病理過程中發揮重要作用。MMPs通過降解細胞外基質(ECM)以及影響ECM重建^[2]，導致血管中層平滑肌細胞(VSMC)侵襲和遷移至內膜，VSMC增殖及其從動脈中膜向內膜遷移是AS斑塊形成的重要原因之一，而TIMPs則可抑制這一過程，這與AS斑塊形成病理過程密切相關。

AS屬于中醫學“胸痹”“中風”“眩暈”等范疇，為本虛標實之證，氣虛血瘀證是AS辨證臨床常見證型之一，因此，益氣活血是治療AS的中心環節。而通過益氣活血法達到標本兼治的作用正是治療本病之關鍵。黃芪為補氣良藥，三七為祛瘀佳藥，槲皮素是益氣代表藥黃芪的有效成分，三七總皂甙是活血止血藥三七的主要成分，二藥有效成分合理配伍能明顯改善AS病人的臨床癥狀^[3，4]。槲皮素是益氣代表中藥黃芪所含黃酮類物質的一種，是黃芪的有效成分之一。槲皮素有保護心肌，減輕心肌缺血再灌注損傷作用，能夠抑制脂質過氧化物(LPO)，減少LPO含量，增加超氧化物歧化酶(SOD)的活性，保護內皮細胞^[5，6]。通過抑制炎癥反應，抑制SMC增殖和泡沫細胞形成而抗AS。三七總皂甙是三七的主要成分，可抑制血小板(PLT)聚集，增加心和腦血流量，有抗氧自由基，減輕缺血再灌注損傷，糾正細胞流變性異常，促進血液循環，顯著抑制血栓形成^[7]，可提高纖溶酶原激活物的活性^[8]，起到抗栓抗凝的作用。川芎嗪^[9]是明確的可抗AS的藥物，有清除氧自由基，保護內皮細胞，抗PLT聚集抗栓，降低血黏度而改善微循環，增強纖溶系統活性，增加心腦血流量，改善心肌細胞代謝^[10]，保護損傷的內皮細胞等作用。

本實驗表明：正常組TIMP－1表達最少，且少于AS模型組(P＜0.01)，這可能與正常組MMP－9表達很少有關。AS模型組TIMP－1表達很少，明顯少于藥物干預組(P＜0.05或P＜0.01)。這與Galis等^[11]的研究相一致。黃芪槲皮素、三七總皂甙單味用藥和二者2:1、3:1組方以及川芎嗪均能增加AS模型大鼠血清TIMP－l的表達，從而發揮抗AS的作用。二者有效成分配伍有協同作用，治療效果更佳，尤以3:1組療效最佳，并優于對照組。這就提示：黃芪槲皮素、三七總皂甙單味用藥和二者2:1、3:1組方均對AS有治療作用，并在一定劑量范圍內，隨著益氣藥物劑量的增加，其治療作用相應增強。

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作者簡介：張永波(1981—)，男，現為山西醫科大學第二臨床醫學院碩士研究生(郵編：030001)；李麗，工作于山西醫科大學第二醫院。

(本文編輯 郭懷印)

注：“本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內容請以PDF格式閱讀原文”