雙波長分光光度法測定夢駝鈴片中褪黑素含量

摘 要 報道夢駝鈴片中褪黑素含量測定的雙波長分光光度法，以278nm為測定波長，300.4nm為參比波長，平均加樣回收率為99.96%，RSD=0.68%（n=5）。

關鍵詞 雙波長分光光度法 褪黑素

褪黑素具有改善睡眠，調節人體內分泌平衡之功效。本文根據夢駝鈴片的處方特點，采用雙波長分光光度法測定其中褪黑素的含量，操作簡便快捷，結果準確可靠。

儀器與試劑

HP8453型紫外分光光度計，褪黑素對照品（由德國進口），維生素B6（含量99.99%），冰醋酸為分析純，夢駝鈴片由本院藥房提供。

實驗方法及方法學考察

溶液的配制：①褪黑素對照品的配制：精密稱取褪黑素對照品1.0mg 于50ml量瓶中，加2mol/L冰醋酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻。②維生素B6的配制：按處方中與褪黑素的比例精密稱取維生素B₆適量于50ml量瓶中，加2mol/L冰醋酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻。③輔料溶液的配制：按處方精密稱取缺褪黑素和維生素B₆的輔料約0.1g于50ml量瓶中，加2mol/L冰醋酸溶液適量振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻后過濾。④樣品溶液的配制：取夢駝鈴片20片，研勻，精密稱取0.1g于50ml量瓶中，加2mol/L冰醋酸溶液適量，振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾。

紫外吸收光譜的繪制及測定波長的選擇：將各溶液分別在200～400nm波長處掃描，以2mol/L冰醋酸溶液為空白，褪黑素在278nm處有最大吸收。維生素B6在278nm、300.4nm 處為等吸收波長，輔料溶液在278nm、300.4nm 處為一直線，幾乎無吸收，不影響測定，經用褪黑素對照液和維生素B₆溶液精選確定278nm為測定波長，300.4nm為參比波長，以OA=A₂₇₈-A₃₀₀為定量信息測定褪黑素的含量，光譜圖見圖1。

線性關系：精密稱取褪黑素對照品10mg于50ml量瓶中，加2mol/L冰醋酸溶液稀釋至刻度，搖勻，分別在278nm、300.4nm處測定吸收度，計算△A值，求回歸方程：△A=6.303C-0.7721，γ=1.0000，n=5。結果表明：褪黑素在0.008～0.04mg/ml范圍內濃度與吸收度差呈良好線性關系。

穩定性實驗：取樣品溶液，每隔半小時于278nm、300.4nm處測吸收值，計算△A值，連續測定6小時，結果△A值保持穩定，RSD=0.61%。

重復性實驗：取同一批夢駝鈴片分別制成5份樣品溶液，依“樣品測定”項下方法分別測定褪黑素的含量，結果RSD=0.81%。

加樣回收實驗：精密稱取已知褪黑素含量的夢駝鈴片細粉50mg共5份，分別精密加入褪黑素對照品0.4～0.6mg，制成樣品溶液，依“樣品測定”項下方法處理，測定，結果平均加樣回收率為99.96%，RSD=0.68%。

樣品測定

取褪黑素對照液與樣品溶液分別在278nm、300.4nm處測定吸收度，以2mol/L冰醋酸溶液為空白，計算△A值及褪黑素含量，結果見表1。

小結

采用雙波長分光光度法測定夢駝鈴片中褪黑素的含量，結果線性關系、穩定性、重復性均良好，為該品種的含量測定提供了又一個可靠的方法。