高效液相色譜法測定六味地黃顆粒中馬錢苷含量

摘 要 目的：建立測定六味地黃顆粒有效成分含量的方法。方法：采用HPLC對六味地黃顆粒中馬錢苷的含量進行測定。結果：馬錢苷在0.0808～0.4040μg具有良好的線性關系，平均回收率為99.96%，RSD=1.72%(n=5)。結論：該方法靈敏、重現性好，適用于六味地黃顆粒中馬錢苷的含量測定。

關鍵詞 六味地黃顆粒 馬錢苷 高效液相色譜法[HT]

儀器與試劑

美國Waters 600 Controler高效液相色譜儀；ReliaSil-C18柱；德國Sartorius BP211D(1/10萬)電子天平；馬錢苷由中國藥品生物制品檢定所提供；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純。

方法與結果

色譜條件：色譜柱：ReliaSil-C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%H₃PO₄(5：40：20：585)；流速：1.2ml/分；檢測波長：236nm；柱溫：40℃。

對照品溶液的制備：精密稱取馬錢苷對照品0.0202mg，加入50%甲醇制成202μg/ml的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取本品裝量差異項下的本品內容物，研細，取0.6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，稱定重量，加熱回餾1小時，防冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液10ml，置中性氧化鋁柱(100～200目，5g，內徑1cm，干法裝柱)上，用40%甲醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加50%甲醇適量溶解，并轉移至10ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

陰性對照品溶液的制備：取缺山茱萸的樣品2.0g，同法操作，即得。

線性關系考察：精密吸取馬錢苷對照品溶液(20.2μg/ml)2、4、6、8、10μl分別注入液相色譜儀，依法測定。根據對照品的峰面積積分值對馬錢苷的進樣量繪制標準曲線，得回歸方程：y=6668.15x+1315461.4，r=0.9999。結果表明：馬錢苷在0.0808～0.4040μg之間呈良好的線性關系，由于標準曲線經過原點，故采用外標一點法。

方法學考察：①精密度實驗^[1]：分別吸取10μl的對照品溶液，重復進樣5次，測得其峰面積的RSD為1.23%。②穩定性試驗：精密吸取對照品溶液10μl，于0、2、4、24、36小時分別依法測定，結果峰面積的RSD為0.58%，馬錢苷在36小時內測定結果穩定。③重現性實驗：精密稱取同一批樣品5份，按供試品溶液的制備和測試方法測定，結果供試品含量的RSD為1.03%。④回收率實驗：精密稱取已知樣品含量(2.61492mg/g)樣品5份，分別加入一定量馬錢苷，測定，并根據樣品含量及馬錢苷對照品加入量，計算回收率。結果平均回收率為99.96%，RSD為1.72%(n=5)。

樣品測定：依法測定050801、050802、050803三批樣品，馬錢苷含量分別為0.71mg/g、0.76mg/g、0.69mg/g，均值為0.72。

結論：經過多次實驗，現本品中馬錢苷含量暫定為≥0.54mg/g。

討 論

六味地黃顆粒是滋補腎陰的傳統處方，山茱萸是方中臣藥，含有熊果酸、齊墩果酸，馬錢苷、蘋果酸、沒食子酸等 ^[2]?！吨袊幍洹凡捎帽訏呙璺y定山茱萸藥材、六味地黃顆粒中熊果酸的含量，操作時間長，步驟繁瑣，顯色誤差大，穩定性和重復性相對較差；HPLC法則簡便易行，準確靈敏，重復性好。熊果酸的色譜條件沒有馬錢苷的色譜條件穩定，故選用馬錢苷進行含量測定^[3]。

流動相考察：參照《中華人民共和國藥典》2005年版(一部)山茱萸含量測定項下測定馬錢苷的流動相及相關文獻，通過實驗摸索，流動相選用四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%H₃PO₄(5：40：20：585)馬錢苷具有較好的峰型和相對合理的保留時間和分離度，故選用四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%H₃PO₄(5：40：20：585)為馬錢苷分析的流動相。

樣品檢測波長：取馬錢苷對照品，加甲醇制成20.2μg/ml溶液，作為對照品溶液，進行紫外檢測。結果選定測定波長λmax=236nm。且溶劑陰性無干擾。

本實驗建立的高效液相色譜法，測定加樣回收率高，是一種快速、簡便、較準確的方法。

參考文獻

1 李玉紅， 陳燕， 易進海.HPLC測定馬錢苷的含量.華西藥學雜志，2002，17(4)：295.

2 馬國營.中藥山茱萸的高效液相色譜指紋圖譜及其聚類分析.西安交通大學學報，2006，2.

3 晏桂敏，林燕飛.山茱萸中馬錢苷含量測定的樣品處理方法改進.中國藥業，2005：10.