復(fù)方丹參注射液中原兒茶醛的含量測定

摘 要 目的：建立薄層層析-紫外分光光法測定復(fù)方丹參注射液中原兒茶醛的含量，控制復(fù)方丹參注射液的質(zhì)量。方法：以原兒茶醛為對(duì)照品，展開劑為苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶5∶0.8)分離得原兒茶醛，采用紫外分光光度法，檢測波長281nm原兒茶醛在0.55～4.95μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)關(guān)系良好，r=0.9998，加樣回收率為97.5%～102.5%，RSD為1.6%。結(jié)果：3個(gè)廠家的3個(gè)樣品中原兒茶醛的含量差異無顯著性(P>0.05)。結(jié)論：對(duì)復(fù)方丹參注射液的質(zhì)量應(yīng)作進(jìn)一步調(diào)查。

關(guān)鍵詞 復(fù)方丹參注射液 質(zhì)量考核 原兒茶醛含量測定 薄層層析-紫外分光光度法

材料與儀器

材料：苯、乙酸乙酯、甲酸，均為分析純。對(duì)照品：原兒茶醛。薄層層析硅膠G，化學(xué)純。水為蒸餾水。復(fù)方丹參注射液(2ml/支)。

儀器：752紫外可見分光光度計(jì)，微量點(diǎn)樣器(5μl)，分析天平。

薄層層析條件的考察：①對(duì)照品溶液的制備：精密稱取原兒茶醛對(duì)照品1.1mg，置10ml容量瓶中，加水溶解稀釋至刻度，搖勻即得濃度為0.11mg/ml。②展開條件的選擇：薄層板為0.3%CMC-Na的硅膠G板，105℃活化0.5小時(shí)，置干燥器中備用。精密吸取復(fù)方丹參注射液10μl點(diǎn)于硅膠G-CMCNa薄層板上，另取原兒茶醛對(duì)照品溶液點(diǎn)于復(fù)方丹參注射液斑點(diǎn)的一側(cè)。以苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶5∶0.8)為展開劑，展開約15cm。取出，晾干，濃氨水顯色。在此條件下原兒茶醛分離完全。

含量測定方法的建立：①對(duì)照品溶液的制備：按上述方法制備得濃度0.11mg/ml。②供試品溶液的制備：精密吸取3個(gè)廠家復(fù)方丹參注射液各20μl，點(diǎn)于同一硅膠G-CMCNa(0.3%)薄層板上，另取對(duì)照品溶液10μl點(diǎn)于供試品斑點(diǎn)一側(cè)作為對(duì)照。以苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶5∶0.8)為展開劑，展開約15cm，取出，晾干。在紫外燈(365nm)下觀察，定位。刮取與對(duì)照品斑點(diǎn)相應(yīng)位置上的供試品各斑點(diǎn)，分別各精密加入5ml水溶解，過濾，即得各原兒茶醛供試品溶液。③檢測條件的選擇：文獻(xiàn)記錄原兒茶醛在281nm處吸光度最大。精密量取對(duì)照品溶液1ml置10ml的容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。以蒸餾水為空白對(duì)照，在281nm左右測定吸光度，結(jié)果281nm處吸光度為最大。④標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取對(duì)照品溶液5ml置10ml的容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml對(duì)照品溶液，置10ml的容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。使?jié)舛确謩e為0.55、1.65、2.75、3.85、4.95μg/ml。

以蒸餾水為空白對(duì)照，在281nm波長處測吸光度，以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，濃度(C)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸分析，回歸方程為：A=2.6×10^-3+0.1015C，r=0.9998(n=5)。

結(jié)果表明，原兒茶醛在濃度0.55～4.95μg/ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取復(fù)方丹參注射液20μl，點(diǎn)于硅膠G-CMCNa(0.3%)薄層板上，另取對(duì)照品溶液10μl點(diǎn)于供試品斑點(diǎn)一側(cè)作為對(duì)照。以苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶5∶0.8)為展開劑，展開約1cm，取出，晾干。在紫外燈(365nm)下觀察，定位。刮取與對(duì)照品斑點(diǎn)相應(yīng)位置上的供試品斑點(diǎn)，精密加入5ml水溶解，過濾，即得原兒茶醛供試品溶液。

刮取同一薄層板上與供試品斑點(diǎn)等面積的空白硅膠G-CMCNa(0.3%)，精密加入5ml水溶解，過濾，取濾液作為空白對(duì)照。

取供試品溶液和對(duì)照品溶液分別在281nm波長處測吸光度，隔30分鐘測定1次，連續(xù)測定3小時(shí)，結(jié)果在3小時(shí)內(nèi)吸收度穩(wěn)定。

精密度試驗(yàn)：取同一供試液連續(xù)測定6次，結(jié)果表明精密度良好。

含量測定：分別精密吸取3個(gè)廠家的丹參注射液各20μl，點(diǎn)于硅膠G-CMCNa(0.3%)薄層板上，另取對(duì)照品溶液10μl點(diǎn)于供試品斑點(diǎn)一側(cè)作為對(duì)照。以苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶5∶0.8)為展開劑，展開約15cm，取出，晾干。在紫外燈(365nm)下觀察，定位。刮取與對(duì)照品斑點(diǎn)相應(yīng)位置上的各供試品斑點(diǎn)，各精密加入5ml水溶解，過濾，即得原兒茶醛供試品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。

刮取同一薄層板上與供試品斑點(diǎn)等面積的空白硅膠G-CMCNa(0.3%)，精密加入5ml水溶解，過濾，取濾液作為空白對(duì)照。

取樣品在281nm波長處測吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算供試品中原兒茶醛的含量。測定結(jié)果見表1。

加樣回收率試驗(yàn)：精密取含量測定后供試注射液溶液5ml，置于10ml量瓶中，分別加入對(duì)照品1.0、1.5、2.1mg，加水至刻度，搖勻，按“含量測定”項(xiàng)下操作，測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

結(jié) 果

點(diǎn)樣斑點(diǎn)直徑應(yīng)控制在2～3mm，有較好的分離效果。原兒茶醛為丹參水溶性酚酸類成分，在展開劑中加入少量甲酸，抑制酸的解離。原兒茶醛在0.55～4.95μg/ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9998。平均含量為0.174mg/ml，加樣回收率為97.3%～102.3%，RSD為1.61%。

結(jié) 論

復(fù)方丹參注射液的主藥丹參的有效成分為酯溶性的二帖醌類和水溶性的酚酸類^[1]，均具有心血管方面的作用，且水溶性成分原兒茶醛較二帖醌類更能顯著增加冠脈血流量和對(duì)抗ADP所致的血小板聚集。為保證藥品質(zhì)量，本文參考有關(guān)文獻(xiàn)^[2，3]，建立了薄層層析-紫外分光光度法分離測定了榆林市上市的3個(gè)廠家的復(fù)方丹參注射液中的原兒茶醛的含量。

本資料研究結(jié)果，榆林市上市的復(fù)方丹參注射液中原兒茶醛的含量無顯著性差異(P>0.05)，有待于做進(jìn)一步調(diào)查。

參考文獻(xiàn)

1 劉燕，謝培德，王寶琴.丹參及其制劑質(zhì)量的評(píng)價(jià)方法.中國中藥雜志，1990，15(3)：31-34.

2 蔡梅，季一兵，駱雪芳，等.高效液相色譜法測定香丹注射液中丹參素和原兒茶醛的含量.海峽藥學(xué)，2004，16(3)：54-55.

3 王振魯，于立佐.薄層-紫外分光光度法測定復(fù)方丹參膏中原兒茶醛的含量.山東醫(yī)藥工業(yè)，1999，18(6)：7-8.