超工頻交變衰減磁場與組織處理

摘 要 方法：采用超工頻交變衰減磁場(UFAWMF)對組織固定脫水透明浸蠟等處理過程進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)觀察。結(jié)果：UFAWMF 組組織脫水指數(shù)(0.44831±0.04696)與常規(guī)組組織脫水指數(shù)(0.45327±0.05266)間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。而且，從外觀上看，UFAWMF組組織外形變化不明顯且有一定的柔韌性，而常規(guī)組有較明顯的收縮且質(zhì)地較硬。UFAWMF組制片及染色效果滿意。明顯優(yōu)于常規(guī)組。結(jié)論：UFAWMF可以用于組織處理。

關(guān)鍵詞 超工頻交變衰減磁場 組織處理

材料與方法

標(biāo)本來源與處理過程：取尸體心臟、肝臟、脾臟和腎臟組織各40塊，每塊約20mm×20mm×3mm，按臟器隨機(jī)分為兩組，即UFAWMF組和常規(guī)組，每組80塊組織。UFAWMF組的組織處理缸置于JDM-1型退磁機(jī)(北方磁力公司，220W)中，而常規(guī)組采用《醫(yī)療護(hù)理操作常規(guī)》的處理方法。UFAWMF組的組織處理程序與時(shí)間分別為：10%福爾馬林10分鐘、85%乙醇5分鐘、90%乙醇10分鐘、95%乙醇10分鐘、100%乙醇Ⅰ5分鐘、100%乙醇Ⅱ10分鐘、二甲苯10分鐘、二甲苯蠟5分鐘、石蠟Ⅰ5分鐘、石蠟Ⅱ10分鐘，總用時(shí)80分鐘；常規(guī)組組織處理程序與時(shí)間分別為：10%福爾馬林240分鐘、85%乙醇90分鐘、90%乙醇90分鐘、95%乙醇90分鐘、100%乙醇Ⅰ90分鐘、100%乙醇Ⅱ90分鐘、二甲苯30分鐘、二甲苯蠟30分鐘、石蠟Ⅰ60分鐘、石蠟Ⅱ120分鐘，總用時(shí)930分鐘。

各組標(biāo)本經(jīng)福爾馬林固定后，用吸紙吸干組織表面水分，按組分類編號并用分析天平(精度0.0001g)稱重、記錄后用等大鏡頭紙包裹進(jìn)入各自的流程。完成100%乙醇Ⅱ脫水后，各組按編號隨機(jī)抽取每種組織10塊，分別用分析天平稱重后記錄，余標(biāo)本繼續(xù)進(jìn)行透明浸蠟和包埋制片。操作時(shí)分別記錄每缸結(jié)束溫度。切片分別進(jìn)行HE、AgNOR、PATH染色。

實(shí)驗(yàn)室條件：實(shí)驗(yàn)室室溫18℃，相對濕度83.9%，液體初始溫度為18℃。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：將稱取的質(zhì)量換算求得組織脫水指數(shù)。組織脫水指數(shù)=組織脫水前后質(zhì)量差/組織脫水前質(zhì)量。然后，所得數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)，作組間差異性檢驗(yàn)。

結(jié) 果

組織處理過程中液體的溫度變化：UFAWMF組，10%福爾馬林34℃、85%乙醇40℃、90%乙醇45℃、95%乙醇49℃、100%乙醇Ⅰ55℃、100%乙醇Ⅱ58℃、二甲苯60℃、二甲苯蠟無變化、石蠟Ⅰ65℃、石蠟Ⅱ65℃；常規(guī)組，10%福爾馬林18℃、85%乙醇18.5℃、90%乙醇18.5℃、95%乙醇19℃、100%乙醇Ⅰ19℃、100%乙醇Ⅱ19℃、二甲苯19℃、二甲苯蠟65℃、石蠟Ⅰ65℃、石蠟Ⅱ65℃。

組織脫水程度：UFAWMF組脫水指數(shù)為0.44831±0.04696(X[TX-]±S)，常規(guī)組脫水指數(shù)為0.45327±0.05266，組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。從外觀上看，UFAWMF組組織外形變化不明顯且有一定的柔韌性，而常規(guī)組有較明顯的收縮且質(zhì)地較硬。

制片及染色效果：UFAWMF組和常規(guī)組皆可制出2～5μm的平整的薄片。從染色方面看，UFAWMF組和常規(guī)組常規(guī)及特殊染色效果相同。免疫組化5-羥色胺的陽性細(xì)胞數(shù)及陽性程度明顯優(yōu)于常規(guī)組。

工作效率：UFAWMF組把組織處理用時(shí)從常規(guī)組的930分鐘縮短到目前的80分鐘，提高工作效率11.6倍之多。

討 論

UFAWMF以往主要用于鋼鐵、煤炭、石油等工業(yè)。近年來由我們率先用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，早期用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)今已用于臨床治療。

為拓寬UFAWMF的應(yīng)用領(lǐng)域，我們將其用于組織的脫水固定透明浸蠟，結(jié)果表明UFAWMF對組織的處理過程有明顯的加速作用。其機(jī)理可能是：①與UFAWMF所產(chǎn)生的電磁振蕩有關(guān)。陳氏等報(bào)道，機(jī)械振蕩有利于組織的固定脫水。近年也有高頻電磁振蕩(如微波)加速組織固定脫水透明浸蠟的報(bào)道。而UFAWMF具有兩種頻率的電磁振蕩，一個(gè)是交變磁場頻率(700Hz)，另一個(gè)是最高磁場強(qiáng)度的衰減變化頻率(50Hz)，因此出現(xiàn)了振蕩間歇，從而進(jìn)一步提高了組織固定脫水透明浸蠟的效果。②電磁振蕩產(chǎn)生的熱量也是加速組織處理過程的影響因素。眾所周知，提高溫度可加快組織處理過程，但達(dá)不到滿意效果，且單純加溫可使組織變脆、變硬或收縮變形，從而加大了制片和閱片難度。本研究中UFAWMF組較室溫提高了16～47℃，提高了脫水等組織處理過程的效率。③電磁振蕩能夠影響液體的疏水性、氫鍵和范德華力，從而也加速了組織的處理過程。④電磁振蕩能增強(qiáng)膜的通透性及提高極性分子對組織的穿透能力，基于異性相吸的原則，使溶劑和組織內(nèi)部分子間快速交換，從而達(dá)到組織快速固定脫水透明浸蠟的目的。

UFAWMF處理組織的切片質(zhì)量及染色效果與常規(guī)組相同。我們認(rèn)為原因是UFAWMF在短時(shí)間內(nèi)使組織完成了固定脫水透明浸蠟過程，保持了組織的外形和柔韌性，避免了常規(guī)加溫處理或常規(guī)長時(shí)間處理造成的組織強(qiáng)烈收縮、變硬、變脆和變形以及減少了某些特殊成分的破壞。另外，微波固定的標(biāo)本較小無法滿足日常活檢的需要，即使微波處理較大組織的脫水透明浸蠟過程用時(shí)65分鐘，但標(biāo)本固定需4～6小時(shí)，所以總的組織處理時(shí)間仍長于UFAWMF法(約3.8倍)。另外，福爾馬林長期固定標(biāo)本抗原易被封閉，而UFAWMF法固定時(shí)間短，減少了組織抗原封閉，5-羥色胺的免疫組化染色也證明了這一點(diǎn)。

總之，UFAWMF法處理組織效果能夠達(dá)到了日常活檢要求，與常規(guī)方法比可提高工作效率11.6倍之多，而且也可減少藥品的揮發(fā)和用電量(或工作人員的勞動(dòng)強(qiáng)度)，同時(shí)也減少了二甲苯等揮發(fā)性有機(jī)溶劑對工作人員身體的影響。