北芪精口服液制備工藝的研究

材料與方法

藥材來源：膜夾黃芪，購于內(nèi)蒙古。

試藥與試劑：黃芪甲苷對照品。

儀器與設(shè)備：ShimadzuLC-6A高效液相色譜儀，C-R4A數(shù)據(jù)處理機，DU-70分光光度計(Beckman公司)。

處方：北芪精口服液處方是由單味藥黃芪構(gòu)成，其中添加煉蜜(椴樹蜜)、純化水、乙醇、香精、檸檬酸鈉、山梨酸鈉等輔料制成。

提取工藝試驗設(shè)計：根據(jù)黃芪甲苷的理化性質(zhì)及中藥材傳統(tǒng)的提取經(jīng)驗，確定考察因素為藥材浸泡時間(A)，加水量(B)，煎煮時間(C)和煎煮次數(shù)(D)，每個因素確定了3個水平。

藥材的提取：用天平取凈黃芪飲片50g，置于加蓋的鋁鍋中，按正交實驗表設(shè)計的方法，浸泡A小時，B倍量的水，煎煮C小時，煎煮前D次進行試驗。水煎液過濾，濾液濃縮至適宜體積后，用95%乙醇醇沉3次，第1次使濾液含醇量達到45%，放置48小時，取上清液，過濾，濾液回收乙醇；第2次使濾液含醇量達到60%，放置24小時，取上清液，過濾，濾液回收乙醇；第3次濾液使含醇量達到75%放置24小時，取上清液，過濾、濾液回收乙醇，濃縮，定容于500ml容量瓶子，備用。(根據(jù)試驗所設(shè)計的浸泡時間，煎煮時間、煎煮用水量及煎煮次數(shù)，按此方法每項分別進行3次試驗，結(jié)果取平均值。)

黃芪甲苷含量測定：根據(jù)文獻報道黃芪苷的測定方法，有比色法^[1]薄層層析±紫外分光光度法、薄層掃描法、高效液相色譜法(HPLC)^[2]、反相高效液相色譜法。筆者采用高效液相色譜法(HPLC)測定黃芪甲苷的含量^[2]。

供試品溶液的制備：用移液管精密量取藥液20ml，置分液漏斗中，加入氫氧化鈉1g，振搖使之溶解，用正丁醇提取3次，每次量為20ml，合并正丁醇層，正丁醇液水浴蒸干，用甲醇溶解，并轉(zhuǎn)入5ml溶量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

對照品溶液的制備：用分析天平精密稱取黃芪對照品5.0mg，用甲醇溶解，制成每1.0000mg/ml的溶液。

色譜條件與進樣分析：Shimpack CLC-ODS色譜柱(150mm×6mm，5μm，id)；流動相為乙腈-水(35：65)，流速1ml/分；柱溫35℃；檢驗波長203nm，靈敏度0.08AUFS。精密吸取對照品溶液20μl及供試品溶液10μl或20μl，注入高效液相色譜儀，以外標(biāo)法計算含量。在上述色譜條件下，濾液中黃芪甲苷與其他成分分離較好，陰性對照品無干擾。

線性關(guān)系的考察：用分析天平精密稱取黃芪對照品，取2.080mg、4.161mg、8.322mg、12.48mg、16.64mg，置于10ml容量瓶中，用甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，配制成0.208、0.416、0.832、1.248、1.664mg/ml的5種濃度的溶液。分別精密吸取20μl注入高效液相色譜儀，每種濃度進樣3次，以峰面積(A)對進樣量(C)進行線性回歸，得回歸方程：A=-542.9+6857.2C，r=0.9998。在進樣量4.16～33.28mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

回歸率的測定：用分析天平精密稱取9份已測定濃度為1.002mg/ml的黃芪甲苷溶液，加入一定量的水使總體積為20ml。分別加入黃芪甲苷對照品1mg，按上述方法制成供試品溶液，測定，計算，得平均回收率為98.14%，RSD=1.80%(n=9)。

提取結(jié)果分析：經(jīng)過試驗得出加水量的多少對提取效果的影響小，而且加4倍量的水會增加生產(chǎn)成本，因此考慮加2倍量的水，比較經(jīng)濟。但經(jīng)過綜合恒量得出最佳的提取工藝應(yīng)為，加水浸泡4小時，每次加入藥材3倍量的水，每次煎煮45分鐘，煎煮3次。從最佳提取條件所提取的結(jié)果看，黃芪甲苷的含量約為0.18%，高于藥典所規(guī)定的0.04%。所以此提取工藝具有較強的科學(xué)性，為今后的工藝改革提供了有利的依據(jù)。

對黃芪多糖含量的考察：一是為了證明上述試驗的有效性，二是為今后提高北芪精口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。試驗^[3]采用分光光度法。

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：用分析天平精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.1000g，加蒸餾水溶解，定容于100ml容量瓶中，搖勻。移取10.0ml，以蒸餾水定容于100ml容量瓶搖勻，得到0.1mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液。

苯酚溶液配制：分別吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml于25ml比色管中，加蒸餾水至刻度，混勻。并移取該溶液2.0ml于比色管中，加入苯酚溶液1.0ml，搖勻，迅速加入濃H₂SO₄5.0ml，搖勻，放置5分鐘，置沸水浴中加熱15分鐘，迅速冷卻至室溫。另以2.0ml蒸餾水作空白對照。在490nm波長處測定吸光度，線性回歸方程C=447A-5505，r=0.9954，并繪出回歸曲線(C：mg/ml)，即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。

黃芪多糖(APS)的測定：取凈黃芪飲片50g3份，按上述最佳提取工藝提取，按原醇沉工藝醇沉，藥液濃縮，105℃干燥，精密稱取樣品0.0500g置于100ml容量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，得樣品溶液。準(zhǔn)確移取5.0ml于50ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用。測定時移取0.5ml，按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的方法測定吸光度值(每份樣品測定3次，取平均值)，并從回歸曲線上查出多糖的對應(yīng)含量(mg/ml)，計算出樣品中多糖的含量(mg/ml)。試驗結(jié)果：試驗編號1～9相對應(yīng)的多糖含量分別為10.05、11.31、10.92、10.11、10.94、11.22、10.17、10.11、9.95，平均值10.53。

穩(wěn)定性實驗：取上述樣品溶液每0.5小時測定1次吸光度值，2小時內(nèi)測定值不變。

回收率實驗：準(zhǔn)確移取溶液1.0ml(共取9份)，置于10ml比色管中，分別加入10mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0ml，加水稀釋至刻度，按樣品測定方法，測定共吸光度值。計算回收率為101.2%；RSD=1.5%(n=9)。從試驗結(jié)果看，黃芪多糖含量測定的試驗比較穩(wěn)定，藥液中黃芪多糖的含量大約為10.53mg/ml。

討 論

在北芪精口服液生產(chǎn)中，影響因素較多，本試驗中對其中4項進行了研究，得出最佳提取方法。由于利用正交實驗表安排試驗時，試驗結(jié)果的差異可能是由各因素及其正交作用引起的，也可能是由試驗的其他隨機波動引起的，所以本試驗結(jié)果有待于進一步方差分析。還有待于在生產(chǎn)實際中進一步驗證。試驗時還對正丁醇提取次數(shù)進行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：用正丁醇提取2次以上，測得的黃芪甲苷含量基本不變。用最佳提取方法所制備藥液中，黃芪甲苷含量約為18mg/ml，黃芪多糖含量約為10.53mg/ml。

參考文獻

1 俞家華，曹正中，張勤.膜夾黃芪中黃芪甲苷的含量測定.中藥通報，1986，11(9)：38-39.

2 歡欣，郝桂明，趙春杰，等，反相高效液相色譜法測定黃芪的含量.中國藥學(xué)雜志，2003，38(3)：212.

3 趙文，任永鳳，樊建航.伊利黃芪成分的比較及多糖含量的測定.中草藥，2001，32(2)：122-124.