胍丁胺對體外培養脊髓神經元的影響及在谷氨酸誘導損傷條件下的作用

摘要：研究胍丁胺(agmatine，AC)對培養脊髓神經元的作用及谷氨酸(glutamate，Glu)損傷后的影響，探討其對神經元的毒性作用及其可能的機理，采用原代細胞培養法，分離培養胚胎大鼠脊髓神經元，3d后加入不同濃度的AG(0.5～80mg/L)繼續培養12、24、36h，接著采用四甲基氮唑藍法和中性紅法分別測定胍丁胺對細胞存活率以及毒性的影響，在加入AG的同時給予2mmol/L Glu對細胞進行損傷，建立體外的損傷模型，然后進行細胞形態學觀察、NeuN免疫細胞化學染色、四甲基氮唑藍法測定細胞存活率、Hoetchst33342和PI染色檢測細胞凋亡和壞死率，同時對神經元中丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量的變化檢測，最后對各組進行比較和統計分析，結果發現，AG作用濃度低于40mg/L對正常培養的脊髓神經元的存活沒有明顯的影響，而80mg/L的AG對神經元生長有毒副作用，在給予Glu損傷后，細胞生長狀態較差，細胞出現退化，而且細胞存活率顯著下降。細胞壞死和凋亡率顯著增高(P<0.05或0.01)，而同時給予AG干預(AG-Glu組)，細胞生長較正常培養的細胞生長狀態略差，但明顯優于Glu組，而且細胞凋亡和壞死率降低，細胞存活率增高，MDA含量減少(P<0.05)，結果提示AG作為一種新發現的神經遞質或調質，在正常生理情況下對神經元的生長沒有毒副作用，而在Glu誘導損傷條件下，能夠抑制Glu誘導的損傷，其發生機制可能與AG通過拮抗N—甲基—M—天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate，NMDA)受體，阻斷或抑制Glu的氧化毒性的級鏈反應有關。

關鍵詞：胍丁胺；脊髓神經元；谷氨酸；凋亡；細胞培養

中圖分類號：R322.81；R329 文獻標識碼：A 文章編號：1007-7847(2008)04-0351-08