香蕉彎孢霉葉斑病菌生物學特性及對殺菌劑的敏感性

摘要 香蕉彎孢霉葉斑病菌[Curuularia lunata(wakker)Boed]適合生長的培養基有PSA、PDA和OMA；菌落生長、產孢和孢子萌發最適宜的溫度為25～30℃，pH要求不嚴格為5～9；在碳源和氮源中，蔗糖、葡萄糖、尿素、磷酸氫二氨和硝酸鈉有利于病菌生長和產孢；分生孢子萌發對濕度有嚴格的要求，RH≥80％以上分生孢子萌發，隨濕度增加萌發率增高；光照對菌絲體無顯著影響，光暗交替有利于孢子的形成；孢子致死溫度為55℃(10 min)。藥物敏感性測定結果表明，6％戊唑醇微乳劑、25％丙環唑乳油、25％咪鮮胺水乳劑、25％戊唑醇乳油和25％苯醚甲環唑乳油對香蕉彎孢霉葉斑病菌菌絲生長均有較好的抑制效果，其中25％咪鮮胺水乳劑和25％苯醚甲環唑乳油的抑菌效果最好。

關鍵詞 香蕉；香蕉彎孢霉葉斑病菌；生物學特性；殺菌劑敏感性

中圖分類號 S436.67

香蕉彎孢霉葉斑病(Curuularia leaf speckle)是近年來我國香蕉生產上發生的一種常見病害，由新月彎孢[Curvularia lunata(Wakker)Boed]引起，病斑呈灰色大長塊狀，邊緣褐色。作者于2004～2006年通過對海口、儋州、樂東、東方、三亞、五指山、瓊中、屯昌、昌江、澄邁、臨高、文昌、瓊海、白沙等市縣香蕉病害的調查，發現該病在各海南香蕉產區分布廣泛且常與香蕉灰紋病混生，危害性很大并有蔓延加重的趨勢。

目前，國內對香蕉彎孢霉葉斑病菌的生物學特性、流行規律和防治等方面的研究尚未見報道，而在生產上對其發病條件與防治方法只是簡單地等同于灰紋病，并沒有開展深入的研究而進行有效防治。鑒于本病的嚴重性，本試驗對病原菌的生物學特性及其藥物敏感性等方面進行了初步研究，以便為病害的發生、流行和防治提供必要的理論依據。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 供試菌株

供試菌株3株，均分離自香蕉并經過形態學鑒定，各菌株資料見表1。

1．1．2 供試培養基及化學藥劑

PDA、PSA、PCA、OMA、查氏瓊脂培養基、香蕉葉煎汁培養基(香蕉葉300 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉18 g，水1 000 mL)、香蕉果煎汁培養基(香蕉果300 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉18 g，水1 000 mL)、PDA+香蕉葉煎汁培養基(PDA和香蕉葉煎汁培養基等量混合)、PSA+香蕉葉煎汁培養基等9種培養基。供試化學藥劑見表2。

1．2 方法

為了試驗的一致性，均采用在pH＝5.5的PDA培養基平板上28℃培養5 d的菌種，用直徑0.5 cm的打孔器統一打菌塊，培養皿直徑為9 cm，每皿15 mL培養基，每處理3次重復，結果取平均值，測量菌落直徑采用十字交叉法。

1．2．1 培養基對菌絲生長的影響

選用1．1．2所列舉的培養基，將供試菌株分別接種在直徑為9 cm平板中央，在28℃恒溫箱連續培養3 d后，觀察菌落形態和測量菌落直徑，每處理重復3次。

1．2．2 溫度對菌絲生長、產孢和孢子萌發的影響

將病原菌接種在PDA培養基上，于15、20、25、28、30、35、38℃和40℃培養箱培養3d后，測量菌落直徑；7d后，將產生的分生孢子用20mL滅菌水洗下，以Neubauer血球計數板法在顯微鏡下檢查分生孢子數(下同)。

采用載玻片懸滴法測定對分生孢子萌發的影響，溫度設置為10、15、20、25、30、35℃和40℃，1 2 h內每隔2 h鏡檢萌發情況，計算萌發率。

1．2．3 pH對菌絲生長、產孢和孢子萌發的影響

將滅菌后的PDA培養基分別調至pH為3、4、5、6、7、8、9、10和11，接種病原菌，28℃培養3 d后測量菌落直徑；7 d后測產孢量，每處理重復3次。

分別用pH為3、4、5、6、7、8、9、10的水溶液配制成1×10⁷個/mL的分生孢子懸浮液，用載玻片懸滴法，25℃培養，在12 h觀察萌發情況，計算萌發率。

1．2．4 碳、氮源對菌絲生長的影響

按照固體Czapek培養基的配制方法，其中碳源物質分別用蔗糖30 g/L、乳糖31.58 g/L、葡萄糖34.72 g/L、甘露醇31_93 g/L、檸檬酸鈉50.85 g/L，使碳的濃度為12.63 g/L，以不加糖為對照；氮源物質分別用硝酸鈉2 g/L、尿素0.71 g/L、磷酸氫二氨1.55 g/L，以不加氮源為對照。培養基pH為5.5，接種后于28℃下培養3 d后測量其菌落直徑。

1．2．5 光照對菌絲生長的影響

在PDA培養基上接種病菌后，分別置于完全黑暗、連續光照、光暗交替(12 h光照，12 h黑暗)3種不同光照條件下進行培養，每處理3個重復。培養溫度為28℃，2 d后測量菌落直徑。

1．2．6 濕度對分生孢子萌發的影響

分生孢子液在載玻片上陰干后，置于RH75％、80％、85％、90％、95％、98％、100％及水滴8個等級濕度的保濕器內，28℃下培養。12 h后檢查孢子萌發率。每次鏡檢300個分生孢子，重復3次。

1．2．7 孢子的致死溫度測定

將孢子懸浮液分別倒入45個試管中，每試管2 mL，每處理3個試管，分別放入40、45、50、55、60℃的恒溫水浴鍋，處理10 min后，立即用冷水降溫，后放入28℃的恒溫箱中，3 d后觀察分生孢子萌發狀況。

1．2．8 菌絲生長對殺菌劑敏感性測定

采用生長速率法測定菌絲生長情況。將供試藥劑稀釋成不同濃度梯度制成PDA含藥培養基，病菌培養96 h后檢查各處理菌的生長情況，十字交叉法量菌落直徑，最后計算抑制生長率，求出毒力回歸方程，計算EC₅₀。

2 結果與分析

2．1 培養基對菌絲生長的影響

試驗結果表明(表3)：PSA、PDA、PDA+香蕉葉煎汁培養基和PSA+香蕉葉煎汁培養基對菌落生長大小影響不顯著，但是對菌落形態影響顯著。最適菌落生長的是PSA和PDA，均表現為菌落厚而致密，茸狀，墨綠色；其次是OMA；再次為PDA+香蕉葉煎汁培養基和PSA+香蕉葉煎汁培養基，表現為菌落較以上稀薄，呈白綠色；不適合菌落生長的為PCA、查氏瓊脂培養基、香蕉葉煎汁培養基、香蕉果煎汁培養基，表現為菌落稀薄，灰褐色或灰白色，無明顯氣生菌絲。

2．2 溫度對菌絲生長、產孢和孢子萌發的影響

從圖1可知：溫度對菌絲生長影響很大，該菌在15～38℃時，菌絲均可生長，以25～30℃生長最快，溫度高于40℃不生長，說明該菌適宜相對中溫偏高的環境。從圖2可以看出，在25～30℃最有利于病菌產孢；當溫度高于30℃時，隨著溫度升高產孢量急劇減少。由圖3可知：分生孢子在10～40℃均能萌發，最適溫度為25～30℃。

2．3 pH對菌落生長、產孢和孢子萌發的影響

試驗結果表明：該病菌在pH3～11范圍內均能生長和產孢，適合菌落生長和產孢的pH為5～9，以pH為7最適合病菌菌落生長和產孢，當pH高于9時，其產孢量急劇下降(圖4，圖5)。分生孢子在pH3～10均可萌發，pH7～9時，分生孢子萌發率超過50％，在pH7～8時萌發率最高，即在中性偏堿條件下，分生孢子萌發較好(圖6)。由此可見，該病菌生長、產孢和孢子萌發對pH要求不嚴格。

2．4 碳、氮源對菌絲生長的影響

試驗結果表明：碳源除檸檬酸外，對菌落大小無顯著影響(表4)，但對菌落形態影響顯著。最適碳源為蔗糖和葡萄糖，表現為較以不含碳源的培養基菌落厚而致密，灰白色；其次是乳糖，菌落較以蔗糖和葡萄糖為碳源稍薄些；不適合做碳源的是甘露醇和檸檬酸，表現為菌落稀薄，透明，白綠色或無色。最適氮源為尿素、磷酸氫二氨、硝酸鈉，表現為菌落厚而致密，灰白色或雪白色。

2．5 光照對菌絲生長的影響

測試結果(圖7)表明，12 h光暗交替較連續光照和連續黑暗更有利于菌絲生長。

2．6 濕度對分生孢子萌發的影響

由圖8可知，不同濕度對分生孢子萌發有明顯的影響。相對濕度高于80％才能萌發，并隨濕度增加，萌發率亦增加，在相對濕度100％和水滴下萌發率達到約95％。說明萌發需要高濕條件，水滴和相對濕度大、保持時間長更利于萌發。在RH80％～95％時，雖能萌發，但芽管較短，需要時間長。當RH95％以上，萌發速度快，產生芽管長，有菌絲狀分支。

2．7 孢子的致死溫度測定

試驗結果表明：分生孢子的致死溫度為55℃，10 min，經過50℃的處理仍有11％的萌發率，55℃及以上處理未見孢子萌發。

2．8 菌絲生長對殺菌劑敏感性測定

各供試藥劑毒力回歸式、斜率、EC₅₀和相關系數(R)結果見表5。供試藥劑按照EC₅₀基本上可以歸為2類：25％丙環唑乳油和25％咪鮮胺水乳劑，EC₅₀分別為0.3061 ug/mL和0.450 2ug/mL，是供試藥劑中EC₅₀非常小的，說明這兩種藥劑抑菌效果好；6％戊唑醇微乳劑、25％戊唑醇乳油和25％苯醚甲環唑乳油，EC₅₀在0.796 3～1.247ug/mL之間，說明這3種藥劑抑菌效果較好。總體來看，5種供試藥劑的EC₅₀均較小，說明這些藥劑對香蕉彎孢霉葉斑病菌均有很好的抑菌效果。回歸方程的斜率與殺菌劑對病菌的敏感性成正比。按回歸方程的斜率，供試藥劑可以分為3類：6％戊唑醇微乳劑斜率值K為2.5627，是供試藥劑中斜率最大的，說明香蕉彎孢霉葉斑病菌對這種藥劑的敏感性最高。25％咪鮮胺水乳劑、25％戊唑醇乳油和25％苯醚甲環唑乳油，斜率值在0.989 3～1.455之間，說明香蕉彎孢霉葉斑病菌對這2種藥劑的敏感性較高。25％丙環唑乳油斜率值K為0.7371，是供試藥劑中斜率最小的，說明香蕉彎孢霉葉斑病菌對這種藥劑的敏感性較低。

3 討論

研究認為：①病原菌在不同培養基上菌絲生長，以PSA和PDA為好。②菌絲生長對溫度的要求相對比較嚴格，最適溫在25～30℃，亦利于產孢和分生孢子萌發。分生孢子萌發要求濕度較高，通常在RH80％以上才能萌發。RH≥98％或有水滴萌發最好，萌發率可達約95％。由此可見，香蕉彎孢霉葉斑病菌適宜于中溫偏高和高濕環境，與在田間調查時病害發生發展溫濕度一致。③不同的碳源和氮源對病原菌的生長影響較大，在有碳氮源與無碳氮源條件下菌落形態差異顯著，碳源以蔗糖和葡萄糖為好，但病原菌對氮源的選擇不很嚴格。④菌絲生長對pH適應的范圍較寬，pH5～9均生長很好。分生孢子在pH5～9的酸堿環境中也均能萌發。光照對菌絲生長無顯著促進作用。⑤分生孢子的致死溫度為55℃(10 min)。⑥不同殺菌劑藥物敏感性測定中EC₅₀越小、斜率越大說明病原菌對藥劑的反應靈敏度越高，即隨著濃度的增加，抑菌率明顯增大。在試驗供試藥劑中，EC5。低的藥劑其毒力回歸方程斜率值往往也較小。綜合考慮供試藥劑的EC₅₀和斜率發現，25％咪鮮胺水乳劑和25％苯醚甲環唑乳油對香蕉彎孢霉葉斑病菌的抑菌效果好且敏感性高。室內的藥物敏感性測定結果僅僅說明該殺菌劑在離體條件下對香蕉彎孢霉葉斑病菌的直接活性，田間的防治效果受到的影響因素很多，有待于試驗進一步證實。