牦牛大腸埃希氏菌疫苗保存１２個月抗體效價測定

摘要：用牦牛大腸埃希氏菌滅活疫苗對實驗動物家兔進行疫苗穩定性(保存期)測定。4批牦牛大腸埃希氏菌病滅活疫苗，批號分別為200401、200501、200502、200503，將這4批疫苗4qC保存3、6、9、12個月后，分別接種試驗兔，每批接種5只。初次接種疫苗0.5ml/只，14d再次接種疫苗1.0mL/只。每次設對照組5只，注射肉湯。其劑量和方法與試驗兔相同。疫苗接種前和再次接種疫苗后21d分別在試驗和對照家兔耳靜脈采血。用微量凝集試驗進行抗體效價檢測。通過抗體檢測表明，疫苗保存了3、6、9、12個月后接種兔，采血測免疫抗體效價為2.709－3.612。同時對照組全部死亡。證明這些疫苗存放12個月能有效保護家兔免受大腸桿菌攻擊。

關鍵詞：牦牛；大腸埃希氏菌滅活疫苗；穩定性；抗體效價

中圖分類號：S823.8+5 文獻標識碼：A 文章編號：1007－273X(2008)02－0007－03

大腸桿菌病是引起西藏各種牛生產性能下降的一種傳染病，2005年7月至2007年1月，我們選用在西藏自治區分離的牦牛大腸桿菌病原株(9903，中國獸藥監察所鑒定)，精心研制出符合當地特征的牦牛大腸埃希氏菌病滅活疫苗4批；批號200401、200501、200502、200503；批量3600mL/批，并對保存了3、6、9、12個月的每批疫苗對家兔進行抗體效價測定，觀察本疫苗保存3、6、9、12個月后對家兔的免疫效力。

1 材料和方法

(1)疫苗：牦牛大腸埃希氏菌病滅活疫苗4批，批號200401、200501、200502、200503。疫苗保存3、6、9、12個月進行抗體效價測定試驗。

(2)試驗動物：選105－120日齡、體重1.70－2.60kg的兔40只。

(3)陽性血清：大腸埃希氏菌陽性血清。由中國獸醫藥品監察所細菌制品檢測室提供。

(4)抗原：牦牛大腸埃希氏菌甲醛滅活抗原，批號200502；批量300ml/批。

(5)被檢兔血清：4批疫苗在4℃保存3、6、9、12個月分別接種兔5只，從兔耳靜脈采血分離血清。

(6)陰性血清：每次5只對照兔從耳靜脈采血分離血清。

(7)器材：“V”型96孔微量凝集板、移液器、吸頭、微量振蕩器、0.5％石炭酸生理鹽水等。

(8)具體方法：將4批疫苗4℃保存3、6、9、12個月分別接種試驗兔，每批接種5只。初次接種疫苗0.5mL/只，14d再次接種疫苗1.0mL/只。每次設5只對照兔，注射肉湯，其劑量和方法與試驗兔相同。疫苗接種前和再次接種疫苗后21d分別在試驗和對照兔耳靜脈采血，用微量凝集試驗檢測抗體效價，觀察疫苗保存期抗體消長情況。

(9)抗體效價測定0－51：將試驗兔血清分別在“V”型96孔微量凝集板中進行。從A排開始加入稀釋液0.5％石炭酸生理鹽水，每孔加入50uL；然后在A排第1孔中加入被檢牦牛血清50uL，混合后，從第1孔吸50uL，加入到第2孔，依次作1：2、1：4、1：8、1：16、1：32……倍比稀釋，然后各孔加入批號200502的甲醛滅活抗原501，LL。血清對照：大腸埃希氏菌陽性和陰性血清同試驗兔血清的作法。抗原對照：50uL甲醛滅活抗原+50uL 0.5％石炭酸生理鹽水。將試驗與對照均置37℃溫箱作用2－4h，放置室溫過夜判定結果。

(10)具體步驟：4批疫苗→分別保存3、6、9、12個月→分別接種兔→初次免疫接種疫苗0.5mL→14d再次免疫接種疫苗1.0mL→再次接種后2ld→采血測抗體效價→觀察疫苗保存期抗體消長情況。

2 試驗結果

(1)200401疫苗在4℃保存3、6、9、12個月分別接種兔5只。并設對照組5只。通過試驗證明200401疫苗抗體效價在家兔最高為3.311，最低到2.709。通過家兔攻毒保護試驗，抗體效價為2.709以上的兔攻毒保護。同時發現200401疫苗在3、6、9個月抗體效價最好。隨保存期時間的延長，出現逐漸遞減的趨勢。

(2)200501疫苗在4℃保存保存3、6、9、12個月分別接種兔5只，并設對照組5只，通過試驗證明200501疫苗抗體效價在家兔最高為3.612，最低到2，709。通過家兔攻毒保護試驗，抗體效價為2.709以上的兔攻毒保護。同時發現200501疫苗在3個月時抗體效價最好，隨保存時間的延長，出現逐漸遞減的趨勢。發現第5組兔的抗體效價沒有出現遞減的情況。

(3)200502疫苗在4℃保存保存3、6、9、12個月分別接種兔5只，并設對照組5只，通過試驗證明200502疫苗抗體效價在家兔最高為3.612。最低到2.709。通過家兔攻毒保護試驗，抗體效價為2.709以上的兔攻毒保護。同時發現200502疫苗在3、6個月抗體效價最好，隨保存時間的延長，出現逐漸遞減的趨勢。

(4)200503疫苗在4℃保存3、6、9、12個月分別接種兔5只，并設對照組5只，通過試驗證明200503疫苗抗體效價在家兔最高為3.311，最低到2.709。通過家兔攻毒保護試驗，抗體效價為2.709以上的兔攻毒保護。同時發現200503疫苗在3、6、9個月抗體效價最好。隨保存時間的延長，出現逐漸遞減的趨勢。發現第4組家兔的抗體效價沒有出現遞減的情況。

3 分析與討論

(1)牦牛大腸埃希氏菌滅活疫苗主要用來免疫牦牛，來抵抗大腸埃希氏菌病對牦牛的攻擊，我們用4批牦牛大腸埃希氏菌病滅活疫苗。保存3、6、9、12個月后，分別接種家兔，觀察對家兔的免疫效力，通過試驗證明大腸桿菌陽性血清效價在家兔最高為3.612，最低到2.709。通過家兔攻毒保護試驗，抗體效價為2.709以上的兔攻毒保護，表明對試驗家兔也有一定的免疫效果。

(2)通過試驗發現4批疫苗在3、6個月抗體效價最好，隨保存時間的延長，出現逐漸遞減的趨勢。

(3)不同的家兔由于個體體質及體重的差異，出現抗體效價的一定差異性。