雛鴨黃曲霉毒素中毒自然病例的病理學診斷

摘要：對湖北省隨州、新州和襄樊養鴨場的發病雛鴨進行了流行病學調查，病理學觀察，血清GLU、ALT、AST、TP檢測，鴨胚、雛鴨接種試驗和飼料黃曲霉毒素B1檢測等一系列實驗室檢查。結果顯示：死亡雛鴨肝臟腫大，表面有白色網格狀花紋。組織病理學觀察，肝細胞嚴重水泡變性和脂肪變性，肝細胞索之間有膽小管顯著增生。發病雛鴨血清生化指標GLU為5.89±1.71mmol/L，TP含量為8.74±1.88g/L，ALT和AST活性分別為168.19±8685U/L和101.08±57.58U/L；鴨胚及雛鴨接種試驗均未出現死亡；飼料中黃曲霉毒素B1含量分別為6，7p，g/kg至8.31ug/kg。檢查結果表明：3地鴨場雛鴨均為黃曲霉毒素中毒。

關鍵詞：雛鴨；黃曲霉毒素中毒；病理學診斷

中圖分類號：S834；S856.9 文獻標識碼：B 文章編號：1007－273X(2008)02－0026－02

黃曲霉毒素是一組由黃曲霉、寄生曲霉等霉菌產生的結構極相似的代謝產物，是危害最嚴重、污染最普遍、理化性質最穩定的一類霉菌毒素。已發現的黃曲霉毒素及其衍生物約有20余種，在所有黃曲霉毒素中，B1的毒性最強，而且B1已經被國際癌癥研究機構確定為I類致癌物。自然界中的黃曲霉通常寄生在玉米、小麥、大麥、燕麥、稻米、花生、魚粉及其制品、花生餅，這些物質在貯藏過程中易感染黃曲霉而產生黃曲霉毒素。黃曲霉毒素中毒是家禽吃了由黃曲霉菌污染的飼料而發生的一種以肝臟損傷為主要特征的蓄積性中毒疾病。家禽中以雛鴨最為敏感，中毒后可造成大批死亡。

筆者就2006年幾例雛鴨黃曲霉毒素中毒病例進行了病理學診斷，現將情況報道如下。

1 材料與方法

1．1 材料

湖北省隨州市某種鴨場8日齡、14日齡患病雛種鴨；武漢市新州區某鴨場8－14日齡患病肉雛鴨；湖北省襄樊某鴨場19日齡肉鴨。

10日齡鴨胚10個：1日齡健康櫻桃谷肉鴨10羽。均購于武漢市春江種鴨場。

葡萄糖(GLU)試劑盒，總蛋白(TP)試劑盒，丙氨酸氨基轉移酶(ALT/GPT)試劑盒，天門冬氨酸氨基轉移酶(AST/GOT)試劑盒均購自中生北控生物科技股份有限公司。

1．2 方法

1．2．1 發病情況調查 對該鴨場飼養雛鴨的發病日齡、發病率和死亡率、發病雛鴨的臨床癥狀等情況進行了解。

1．2．2 樣品的采集與處理對發病雛鴨進行心臟采血。待自然凝固后，3000r/min離心10min，分離血清，4℃保存，以備血清生化指標的測定，所有血清樣品均在采集后24h內測定。待采血結束后經頸靜脈放血致死，剖檢，觀察發病雛鴨的大體病變，采取肝臟組織于10％中性福爾馬林溶液中固定。

1．2．3 血清生化指標測定用半自動生化分析儀測定血清中血糖(GLU)、總蛋白(TP)含量、天冬氨酸氨基轉移酶(ALT)、丙氨酸氨基轉移酶(AST)的變化。血清葡萄糖為葡萄糖氧化酶法；總蛋白為雙縮脲法；天冬氨酸氨基轉移酶、丙氨酸氨基轉移酶均為連續監測法。

1．2．4 肝臟組織病理學觀察取固定完全的雛鴨肝臟組織。經常規石蠟包埋、切片、H．E染色，光鏡下觀察病理組織學變化。

1．2．5 鴨胚、雛鴨接種試驗取病死鴨肝臟，研磨，1：5稀釋，加青、鏈霉素各1000IU/mL，反復凍融3次，3000r/min離心30min取上清液，接種10日齡鴨胚10個，0.2mL/胚，另外用滅菌生理鹽水對照接種2個鴨胚。接種1日齡雛鴨10羽，0.3mL/羽。

1．2．6 飼料檢測 采集發病雛鴨使用的飼料樣品送華中農業大學飼料檢測站檢測黃曲霉毒素B1含量。

2 結果

2．1 發病情況調查結果和I臨床癥狀

湖北省隨州某種鴨場共有種雛鴨1萬余套，自3日齡開始發病。自發病到送檢的1周時間內，該批種鴨發病1000只，死亡50只，病死率5％。武漢市新州區某肉鴨場有肉鴨2000只，9日齡開始發病，發病5d，發病600只，死亡60只，病死率10％。湖北省襄樊某肉鴨場有肉鴨3000只，9日齡開始發病，至19日齡，發病1400只，死亡1260只，病死率90％。

病鴨表現為食欲減退，生長緩慢、嗜睡呆立，衰弱，步態不穩、跛行，少數病鴨腳和腿由于皮下出血而呈淡紫色。病雛鴨死前常有抽搐，死亡后呈角弓反張現象。

2．2 剖檢病變

主要病變在肝臟，發現肝臟明顯腫大，表面粗糙，肝質地較硬，肝表面有白色網格狀花紋，膽囊充盈。脾臟明顯腫大。外觀呈網格狀花紋。十二指腸黏膜充血、出血，腎臟腫脹充血。肝實質細胞排列紊亂，腫脹變圓。細胞質內有圓形空泡，發生嚴重的脂肪變性，肝細胞壞死；匯管區和肝小葉內膽管上皮細胞呈條索狀或團塊狀增生，增生的膽管上皮細胞向肝小葉內伸展。

2．3 鴨胚、雛鴨接種實驗

10個鴨胚在37℃恒溫箱內培養均正常孵化出殼；

10羽雛鴨接種24h、48h、72h后均無死亡，生長亦未受到抑制。體重增重正常。

2．4 血清生化檢驗

雛鴨血清生化指標測定結果見表1。

2．5 飼料檢驗

經檢測飼料中黃曲霉毒素B1含量分別為6.7ug/kg、6.4ug/kg和8.3ug/kg。

3 討論

上述鴨場發病雛鴨的主要病變都發生在肝臟，表現為質地較硬，表面粗糙，組織病理學變化為肝細胞脂肪變性，肝組織間質有明顯的膽管上皮細胞增生，可以診斷發病雛鴨是黃曲霉毒素中毒。鴨胚及雛鴨的接種實驗結果說明該鴨場此次暴發的疾病不是由細菌或病毒所引起的。

臨床上常用血清丙氨酸氨基轉移酶和天冬氨酸氨基轉移酶的活性來鑒別診斷肝病的性質和程度。當肝臟發生炎癥、壞死、中毒等損害時，轉氨酶就會由肝細胞釋放到血中，引起血中轉氨酶升高。本實驗測定了發病雛鴨血清中丙氨酸氨基轉移酶和天冬氨酸氨基轉移酶的濃度。與正常比較，血清中轉氨酶升高，表明肝臟受損。

黃曲霉毒素是一組次級真菌代謝產物，在我國飼料檢測中以B1計，目前飼料衛生標準僅對黃曲霉毒素B1的安全限量有規定。標準規定肉用仔鴨前期、雛鴨配合飼料及濃縮飼料≤10ug/kg，肉用仔鴨后期、生長鴨、產蛋鴨配合飼料及濃縮飼料≤15ug/kg。

發病鴨場飼料黃曲霉毒素B1檢測結果均符合國家規定標準，但有研究表明，飼料中含黃曲霉毒素1ug/kg即可引起中毒。動物因種類、性別、年齡、營養狀況不同對黃曲霉毒素B1的敏感性不同，最敏感的動物為雛鴨。因此，在實際生產中，對飼料黃曲霉毒素檢測的結果只能作為通常情況下的參考值。而不是絕對的量度標準。

目前對黃曲霉毒素引起的中毒無有效的治療方法，重在預防，防止飼料霉變，提高飼料質量意識，切實加強飼料原料及其產品的質量監督和管理是關鍵。