芽胞桿菌和光合細菌對異育銀鯽魚種消化酶的影響

摘要：將均重為18.0g的600尾異育銀鯽魚種（Allogygenetic crucian carp）隨機分成10組，每組設2個重復，分別在其養殖水體中添加不同濃度（5×108、5×109、5×1010cfu/m3）的光合細菌、芽胞桿菌或1：1的光合細菌芽胞桿菌混合菌，飼養40d后，測定異育銀鯽腸道和肝胰臟的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性。結果表明，綜合考慮芽胞桿菌和光合細菌對異育銀鯽腸道和肝胰臟蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶三者的影響，在本試驗濃度范圍內，濃度為5×109cfu/m3的芽孢桿菌效果最好。

關鍵詞：異育銀鯽；芽孢桿菌；光合細菌；消化酶

隨著水產養殖業的迅速發展，集約式工業化養殖規模日益擴大，與此同時，大量的工業廢水和農業污水排放，使天然水域受到污染，養殖生態環境日益惡化。各種疾病頻繁暴發，成了制約養殖業發展的重要因素，對魚病的防治和控制顯得越來越重要。目前人們多采用廣譜抗生素控制病害的發生，這些過度使用的抗生素藥物不僅使病菌的耐藥性增強，而且還干擾了養殖環境中有益生物群的生長繁殖，引起微生態平衡失調，產生二次污染和內源性感染。鑒于此，近年來人們開始嘗試在養殖水體中使用微生態制劑來改善養殖生態環境。采用微生態制劑增強水產養殖對象的免疫力與抵抗力，改善水質，減少漁業病害的發生，正逐漸成為控制漁業疾病、保證養殖效益的關鍵措施，因而在水產養殖水體或餌料中添加微生態制劑成為國內外學者研究的熱點，但是微生態制劑的作用機理還有待進一步研究。對于微生態制劑對魚體消化酶的影響，有關學者已做了一些研究，但是報道不多，而且主要集中在飼料中添加微生態制劑對魚體消化酶的影響，有關水體中添加微生態制劑對魚體消化酶的影響未見報道。芽胞桿菌和光合細菌作為水質改良劑作用較明顯，本文通過在異育銀鯽養殖水體中添加不同濃度的光合細菌和芽胞桿菌，測定試驗魚消化系統蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性，研究作為水質改良劑的光合細菌和芽胞桿菌對魚體的消化能力的影響，為水質改良劑的應用提供更全面的理論依據。

1材料

1.1實驗魚

異育銀鯽，體長7～10cm，體重18～22g，07年3月購于鹽都樓王養殖場。

1.2微生態制劑

光合細菌（Photosynthetic bactria簡稱PSB），莢膜紅假單胞菌（Rthodopseudcmonas capsulate），液體狀，活菌量為5×108CFU/mL；地衣芽抱桿菌（Bacillus lichenifirmis)，粉末狀，活菌量為2×109CFU/g。2種有益菌均由中國水產科學研究院南海水產研究所自行分離、篩選的菌株培養研制而成。

2方法

2.1試驗方案

參照微生態制劑產品說明書和文獻設定試驗芽胞桿菌和光合細菌的濃度。分別設定芽胞桿菌、光合細菌和芽胞桿菌與光合細菌1：1的混合制劑三大組，每種微生態制劑均設定三個濃度，分別為5×108、5×109和5×1010 cfu/m3，設一對照組，總共分為10組，每組設一平行，具體見表1。

2.2飼養管理

將從養殖場購買的異育銀鯽用食鹽水消毒后，在室內暫養18d，隨機分為20組。水族箱規格為70×40×45cm，注水量為80L。按照表1添加微生態制劑。實驗期間每天投喂大豐明天開發有限公司的異育銀鯽魚種餌料2～3次。根據水溫和魚體攝食情況調整投喂次數和投餌量，每天投飼量為魚體重的2%～4%，投餌后1h吸取殘餌和糞便。每周換水一次，換水的同時添加微生態制劑。實驗期間充氧。飼養49d后，每組隨機取6條實驗魚，解剖取出腸道和肝胰臟，測定其蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性。

2.3蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的測定

蛋白酶的測定采用福林-酚試劑法，蛋白酶單位（U）定義為1g食糜組織在30℃、PH為7.0的條件下，每分鐘水解酪蛋白產生1μg酪氨酸的酶量為1個蛋白酶活力單位。

淀粉酶的測定采用碘-淀粉比色法，淀粉酶活性單位（U）定義為1g食糜組織在30℃，PH為7.0的條件下，每分鐘水解1mg的淀粉為1個淀粉酶活力單位。

脂肪酶的測定采用聚乙烯醇橄欖油乳化液水解法，脂肪酶活性單位（U）定義為在30℃，PH為7.0的條件下，每分鐘水解脂肪產生1μg脂肪酸的酶量定為一個脂肪酶活力單位。

2.4數據處理

試驗數據用SAS單因子方差分析（One-way ANOVY）進行HSD法多重比較，p>0.05表示差異不顯著，p<0.05表示差異顯著。

2結果

2.1光合細菌和芽胞桿菌對異育銀鯽腸和肝胰臟蛋白酶的影響

注：表中所標字母相同者表示差異不顯著（p>0.05），不相同者差異顯著（p<0.05）

試驗結果顯示（表1），添加5×109 cfu/m3的芽孢桿菌可以顯著（p<0.05）提高異育銀鯽腸蛋白酶的活性。光合細菌和兩種菌的混合制劑不能提高異育銀鯽腸蛋白酶的活性。在本實驗中芽孢桿菌對異育銀鯽蛋白酶活性影響的最佳投放量為5×108cfu/m3。

2.2光合細菌和芽胞桿菌對異育銀鯽腸和肝胰臟淀粉酶的影響

表3 光合細菌和芽孢桿菌對異育銀鯽腸和肝胰臟淀粉酶活性的影響

試驗結果表明（表2），試驗組魚體腸淀粉酶活性均高于空白組。其中，Y2、G2、YG2組效果顯著（P<0.05）。Y2組腸和肝胰臟的淀粉酶活性均最高。

2.3光合細菌和芽胞桿菌對異育銀鯽腸和肝胰臟脂肪酶的影響

試驗結果顯示（表3），水體中投放芽胞桿菌或光合細菌對異育銀鯽魚體腸道和肝胰臟脂肪酶作用不顯著（p﹥0.05），但是芽孢桿菌和混合細菌對異育銀鯽魚體腸道和肝胰臟脂肪酶活性具有一定的促進作用。

3討論

綜合本試驗結果，發現從使異育銀鯽魚種消化酶活性提高的角度考慮，芽胞桿菌效果優于光合細菌，而且其最適添加量為5×109 cfu/m3。芽胞桿菌使魚體腸道消化酶活性提高的報道較多。潘康成等給鯉魚投喂芽孢桿菌，鯉魚腸道蛋白酶和淀粉酶活性比對照組分別提高了20.54%和61.95%（P<0.05），黃永春等在建鯉飼料中添加6%有效微生態制劑（EM），建鯉腸道和肝胰臟蛋白酶活性比對照組分別提高了17.70%和5.78%。這些研究結果均有力的說明，芽孢桿菌等微生態制劑的適量添加能提高養殖動物腸道、肝胰臟消化酶活性，這是微生態制劑促進養殖動物生長的重要因素之一。Sogarrd等報道，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌具有較強的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性；酵母菌和霉菌均能產生多種酶類如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶等，可提高蛋白質和能量利用率。國內許多研究者也認為微生態制劑具有消化酶活性。然而本實驗結果表明芽胞桿菌的作用效果并不是隨著其添加量的增加而增加的，芽胞桿菌的具體作用機理和最佳使用方法還有待進一步研究。

參考文獻

1.陳兵，何世山，朱鳳香，等.納豆芽孢桿菌劑對AA雞生產性能和十二指腸消化酶的影響[J].浙江農業學報，2003，15(5):289-292.

2.張曉梅，蔡榮，陳可毅，等.飼喂不同類型微生態制劑對雛雞消化酶活性的影響[J].飼料研究，1999(7):4-6．

3.王夢亮，郭小青，粱生康，等.光合細菌(PSB)對鯉魚腸道菌群及腸消化功能的影響[J].中國微生態學雜志，1999，11(3):146-147．

4.葉元土，張勇，張宇，等.酶制劑EA-II和生物制劑BA-I對鯉腸道、肝胰臟的蛋白酶和淀粉酶活性的影響[J].大連水產學院學報，1993，8(1):79-82.

5.潘康成，何明清，劉克琳.微生物添加劑對鯉魚生長和消化酶活性的影響研究[J].飼料工業，1997，18(9):41-42．

6.王子彥. 飼料中添加微生物制劑對鯉魚消化酶活性影響的研究[J]．四川農業大學學報，1994，12(增刊):662-663．

7.Sogarrd DH， Denmark TS．Microbialsfor feed beyond lacticacid bacteria[J]．Feed Inter，1990，11(4):32-37．

8.于東祥，柳學周，雷麒麟.甲殼胺制劑對真鯛幼魚的促生長作用研究[J].海洋水產研究，2000，21(3):62-66．

9.韓慶，夏維福，羅玉雙，等.酶制劑對斑節對蝦生長性能的影響[J].水產學雜志， 2002，15(1):84-86.

10.司亞東，金有坤，周洪琪，等.鯉魚白肌RNA/DNA值與其生長的關系[J].上海水產大學學報，1992，12:159-167．

11.瞿建宏，黃厚榕，吳偉．光合細菌(PSB)在西伯利亞鱘魚飼料中的作用及其對主要消化酶活性的影響[J].糧食與飼料工業，2003，(11):27-29.

12.丁雷，岳永生，李貴杰，等.芽孢菌對養魚水質影響的研究[J].淡水漁業，1999，29(10): 7-10．

13.劉小剛，周洪淇，華雪銘，等.微生態制劑對異育銀鯽消化酶活性的影響[J].水產學報，2002，26(5):448-452．