實用飼料補充蛋氨酸、賴氨酸對異育銀鯽和草魚血漿中游離氨基酸含量的影響

摘要：本研究利用1個短期氨基酸吸收實驗，通過對異育銀鯽幼魚和草魚幼魚投喂含晶體賴氨酸/蛋氨酸以及含微囊賴氨酸/蛋氨酸的飼料，在最后一次投喂后0.5h， 1h， 1.5h， 2.5h， 3h， 6h和9h分別取血樣，通過測其血漿中游離賴氨酸和蛋氨酸的含量，晶體氨基酸和微囊氨基酸均可提高試驗鯽魚和草魚血漿中的游離氨基酸濃度；相對而言，添加微囊氨基酸的效果優于添加晶體氨基酸。

關鍵詞：異育銀鯽；草魚；蛋氨酸；賴氨酸；血漿游離氨基酸

魚類對蛋白質的需求量實際是對必需氨基酸和非必需氨基酸混合比例數量的需要。魚類攝取這樣的飼料，吸收到體內的氨基酸才能有效地被合成新的蛋白質。生產實踐證明，飼料中無論缺乏哪一種必需氨基酸，都會影響飼料的價值。在實際生產中，往往有大量的蛋白源其所含必需氨基酸比例與魚類的需求相差較大，因此，研究者們試圖通過添加外源單體氨基酸的方式來使飼料中氨基酸達到魚類的需求。但是，許多研究資料表明，不同的魚類對單體氨基酸的利用能力不同。虹鱒、銀大馬哈魚、鰻鱺和羅非魚等能很好地吸收利用晶體氨基酸（荻野珍吉，1980），而鯉（Aoe et al.，1970; Nose et al.， 1974）和溝鯰（Wilson et al.， 1977）對飼料中晶體氨基酸的利用能力較差，必須將飼料調至中性后才能吸收利用。

草魚和異育銀鯽（以下簡稱鯽魚）均為我國的主要養殖品種，因其具有生長快，抗病力強，肉質鮮美、細嫩等特點，得到生產者和消費者的普遍歡迎。本研究通過對草魚和異育銀鯽幼魚投喂添加不同劑型的單體賴氨酸和蛋氨酸飼料，檢測其攝食后血液中游離氨基酸的含量，旨在了解其對飼料中單體氨基酸的吸收利用情況。

1材料與方法

1.1試驗魚及飼養管理

試驗草魚為當年培育，取自西南大學榮昌校區試驗漁場，平均體重（20.3±0.5）g；試驗鯽魚取自榮昌梅石壩漁場，平均體重（7.5±0.5）g。試驗魚放養在室內玻璃鋼水族箱（100cm× 60cm×50cm）中，草魚和鯽魚各設3個處理組；組1為普通日糧組，組2為晶體氨基酸添加組，組3為微囊氨基酸添加組，每組設3個重復，每缸放30尾魚；水源為曝氣自來水。試驗魚適應環境5d后，開始投喂試驗飼料，日投飼率為體重的3%～5%，每天于9：00和17：00投喂兩次。每天早上清除箱內糞便，并換水1/3，飼養時間為10d。試驗期間水溫為25±1℃，pH為7.5±0.5，溶氧> 6mg/L，氨氮<0.2mg/L，余氯<0.1mg/L。

1.2試驗飼料

鯽魚試驗飼料中組2和組3的粗蛋白含量是一致的，組1略高，各組的蛋氨酸和賴氨酸含量均相等；草魚試驗飼料的粗蛋白一致，但組2和組3的蛋氨酸和賴氨酸含量實測值高于組1。晶體蛋氨酸（標識含量99%）和賴氨酸（標識含量98.5%）為市售某公司產品；微囊蛋氨酸和微囊賴氨酸，含量均為40%左右，由佛山協力同創飼料有限公司提供。具體配方組成和營養成分分析見表1和表2。

鯽魚和草魚日糧配制時，均用6mol/L的NaOH溶液調至中性（Nose et al.，1974），制成粒徑為2.5～3mm的顆粒，60℃烘干后冰箱中-4℃保存備用。

1.3試驗取樣及分析處理

1.3.1血漿氨基酸濃度測定

連續對鯽魚、草魚投飼規定日糧7d后停止投喂，在其后的0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、6h、9h和12h取樣，尾靜脈取血，用1%的肝素鈉溶液作抗凝劑，每缸每次取3尾魚抗凝血。血樣置1.5mL離心管中3000 r/min離心15min后，取出上清液即獲得血漿。血漿用8%的磺基水楊酸去蛋白后，測定血漿中游離Lys和Met。

測定氨基酸含量采用柱前OPA衍生化RP-HPLC法測定，以4-氨基丁酸為內標，檢測限為0.5ppm。色譜條件：大連C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：A液：甲醇-0.05mol/L醋酸鈉緩沖液（pH = 9.5）（85：15）；梯度程序：0min，0% B；1min，30% B；12min，30% B；22min，40% B；23min，45% B；27min，45% B；35min，73% B；55min，100% B；流速: 1.2ml/min；柱溫: 25℃。在本色譜條件下，各氨基酸均得到了有效、滿意的分離。

1.3.2氨基酸劑型的溶失率測定

各組鯽魚和草魚試驗飼料分別取10g，置于100mL水中10min，期間每隔2min攪動一次，取10mL水溶液測定賴氨酸等含量，每個樣重復測定3次。

2試驗結果

2.1鯽魚血漿中游離蛋氨酸濃度變化趨勢

從圖1中可以看出，雖然各組日糧的蛋氨酸水平接近一致，但日糧中添加晶體蛋氨酸（組2）和微囊蛋氨酸（組3）后，其血漿峰濃度均高于未添加組（組1）。與此同時，組2在停飼后1h血漿中蛋氨酸即達峰濃度，而組3和組1則是在停飼后1.5h同時達到峰濃度。

2.2鯽魚血漿中游離賴氨酸濃度變化趨勢

圖2表明，雖然各組日糧賴氨酸水平接近一致，但鯽魚血漿中賴氨酸的峰濃度卻并不一致，而是從組1至組3逐漸增高。組1、組2和組3的達峰時間分別是2.5h，2h和3h。

2.3草魚血漿中游離蛋氨酸濃度變化趨勢

本試驗各組日糧的蛋白含量基本設計為一致，但卻未能保證蛋氨酸含量一致，組1濃度最低，因此各組中組1的達峰濃度最低，但其達峰時間也最晚，為停飼后第2h，組3的達峰時間為停飼后第1.5h，組2的達峰時間為停飼后第1h，圖3。

2.4草魚血漿中游離賴氨酸濃度變化趨勢

本試驗各組日糧間的粗蛋白含量及賴氨酸含量都基本一致，因此草魚各組試驗停飼后其血漿中的峰濃度均接近一致，達峰時間是組3和組1一致（停飼后2h），組2達峰時間加快（停飼后1.5h）。

2.5溶出率測定結果

表3所列為在本試驗條件下制作的飼料浸入水中不同時間測定其脫離出飼料進入水體中的游離賴氨酸含量。結果表明：1）無論鯽魚日糧還是草魚日糧，以晶體賴氨酸形式添加的日糧均比以微囊賴氨酸形式添加的日糧在水中形成更多的溶失率；2）隨著浸入水中的時間延長，不同形式的賴氨酸在水中的溶失率均逐步增加；3）較高的pH值會導致飼料中的賴氨酸出現更高的溶失率。

3試驗初步結論

1）無論補充晶體氨基酸還是微囊氨基酸，均能有效的提高試驗鯽魚和草魚血漿中的游離氨基酸濃度；

2）微囊氨基酸的添加量為晶體氨基酸的50%，但血漿氨基酸濃度卻比較接近，表明在飼料制粒過程中微囊氨基酸的損失，以及在水體中的散失要小于晶體氨基酸；

3）晶體氨基酸在兩種魚的血漿中達峰時間均早于微囊氨基酸的達峰時間，但微囊氨基酸與飼料中的蛋白氨基酸達峰時間更接近一致；

4）飼料中晶體氨基酸的溶失率高于微囊氨基酸；在弱堿性水體中，兩種劑型的氨基酸的溶失率均有一定幅度增加。