云南西雙版納地區橡膠炭疽病病原鑒定

張春霞　何明霞　李加智　蔡志英　王進強

摘要：對來自西雙版納11個橡膠炭疽病菌菌株進行了鑒定。結果表明，引起西雙版納橡膠炭疽病的病原有2種，分別為：膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)和尖孢炭疽菌(C.acutatum)。2個種的區別主要在于分生孢子的形態，菌落正反面的顏色，菌落的生長速度及對農藥的敏感性等。

關鍵詞：橡膠；炭疽病；鑒定

中圖分類號：S 763．13；S 431．191

橡膠樹炭疽病是橡膠樹上的一種重要病害，可以危害苗圃小苗、大田幼樹直至成齡開割膠樹，侵染嫩葉、葉柄、嫩梢和果實等部位，引起嫩葉脫落、嫩梢回枯和果實腐爛，甚至形成僵果懸掛在樹上。嚴重時會引起膠樹的重復落葉和嫩梢回枯，推遲開割時間。本病于1906年在斯里蘭卡首次發現，目前在亞非橡膠種植國家廣泛發生，其中馬來西亞、斯里蘭卡、印度、泰國、中國和西非等國家發病較嚴重。

兩雙版納是一個典型的山地種植橡膠地區，種植面積在全省最大，與我國海南在氣候類型上有著明顯的不同，且炭疽病近年來在西雙版納膠園呈越來越嚴重的危害趨勢。在勐滿農場、花卉園及部分民營膠園嫩葉或老葉上發生了一種與傳統炭疽病明顯不同的現象，受害葉片上凸成圓錐狀，嚴重時可看到整個葉片布滿上凸的小點，后期形成穿孔，造成大量膠樹落葉和部分病株減產或停割。在已開割膠樹老葉上如此嚴重發生炭疽病，實為罕見。因而，目前有必要對云南省植膠墾區危害橡膠樹的炭疽病菌的種類進行研究，掌握西雙版納膠園橡膠炭疽菌種群分布，確定致病優勢種，以便為研究大田橡膠炭疽病病害流行規律、大田病害防治提供理論支撐和科學依據。

1材料和方法

1．1供試材料

橡膠炭疽病葉、病枝采自西雙版納勐養橡膠分公司，黎明橡膠分公司(勐滿)，勐臘橡膠分公司，云南省熱作所江南試驗隊，花卉園等地。

1．2病原菌的分離和純化

采集到的病害標本按組織分離法進行分離培養。并用柯赫氏法則進行確定。單孢分離采用瓊膠平板表面單孢子挑取法，獲得的純菌種保存待用。

1．3病原菌的鑒定

1．3．1培養性狀及附著胞的觀察

將各菌株分別接種于PDA平板中央，置于(25±1)℃光照培養箱中培養。逐天觀察、記錄菌落形狀、顏色、孢子產生情況。分生孢子附著胞采用PDA平板上產生的新鮮分生孢子懸浮于自來水中，25℃培養24～48 h獲得。同時觀察孢子和附著胞的形狀，每個菌株測量50個分生孢子并計算其平均大小。

1．3．2菌落生長速度的測定

在各菌株長滿PDA菌落的平板上，選生長旺盛的邊緣部位用直徑為5 mm的打孔器打取新鮮菌絲塊，挑入PDA平板中央，使菌株菌絲面貼于基質表面，分別置于(25±1)℃光照培養箱中培養，每個菌株設3個重復。第3天開始測量菌落直徑，以后每天測量。

1．3．3對農藥的敏感性測定

供試菌株為膠孢炭疽和尖孢炭疽；供試藥劑為SDS Biotech K.K.制造廠生產的75％百菌清可濕性粉劑，日本曹達株式會社產的70％甲基托布津。將供試農藥加入PDA培養基中，配置成含農藥濃度為0.1、1、10、100mg／L和1 000 mg／L的PDA培養基，用直徑為5 mm的打孔器取HH4(尖孢炭疽菌)和HH3(膠孢炭疽菌)的PDA平板培養物菌塊接種于含上述兩種藥劑的PDA平板中央，每處理重復3次，對照接種不含藥劑的PDA平板七。置于(25±1)℃培養箱中培養7 d后，測量菌落直徑，用統計軟件DPS分析各菌株對農藥的敏感性。

2結果與分析

2．1病原菌的分離

從感病的橡膠葉片或枝條上共獲得11個菌株，分別編號為HH1、HH2、HH3、HH4、MYl、MY2、MY3、MY4、MM1、JN1、ML1。

2．2病原菌的鑒定結果

2．2．1培養性狀的觀察

各菌株在PDA上的培養性狀見表1。可以看出，采白花卉園和勐滿的HH4、MM1菌落正反面顏色均為橘黃色，和其他菌落明顯不同。其孢子形狀也和其他差別很大，為紡錘形或梭形。其余9個菌株的孢子均為圓柱形。

2．2．2孢子及附著胞大小

在顯微鏡下測量其大小，拍攝顯微形態圖，結果見表1及圖1、2。可以看出，各個菌株的孢子大小差別不大。除了HH4、MM1外，孢子都產生附著胞。

2．2．3生長速度

菌株的生長速率直接與生產實踐緊密相關，本次共測定了11個菌株在PDA平板上的生長速率，HH4、MM1的菌落直徑顯著低于其他菌株，生長緩慢，培養4 d儀38.1、37.5 mm。

2．2．4對農藥的敏感性

從農藥試驗測出：百菌清和甲基托布津對尖孢炭疽菌HH4的EC₅₀均比膠孢炭疽菌HH3的高(表3)。尖孢炭疽菌HH4和膠孢炭疽菌HH3對甲基托布津的敏感性差異顯著，HH4有較強的耐藥性。此結論與C.K.Jaysinghe報道的結果相一致。DPS分析結果顯示供試農藥問的抑菌差異也顯著，甲基托布津的抑菌效果高于百菌清(表4)。

3結論與討論

根據相關參考資料，對從感病橡膠葉片或枝條分離到的11個菌株進行了鑒定。結果表明：引起西雙版納橡膠炭疽的病原優勢種為膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、其次為尖孢炭疽菌(C.acutatum)。兩個種的主要區別在于分生孢子形態、菌絲生長速率、菌落顏色以及對農藥的敏感性。與C.K.Jayasinghe的描述相同。

從本次研究可以看出，兩個種有明顯的不同。外觀癥狀橡膠葉片有上凸小點的為尖孢炭疽菌，有典型炭疽癥狀的為傳統的膠孢炭疽菌。培養性狀顯示：尖孢炭疽菌的菌落顏色鮮艷，為橘黃色，到培養后期，產生典型的紡錘形分生孢子；而膠孢炭疽菌產生圓柱形，兩端圓的分生孢子，菌落顏色偏灰色。從菌絲生長速率來看，生長緩慢的為尖孢炭疽菌，生長較快的為膠孢炭疽菌。對農藥的敏感性結果表明，膠孢炭疽菌較尖孢炭疽菌敏感。但經DPS統計軟件分析，HH4和HH3對百菌清的敏感差異不明顯。鑒于此現象，兩小種對農藥的敏感性有必要做更深的研究，增加供試農藥的種類。膠孢炭疽菌和尖孢炭疽菌對農藥的敏感性是否會因林間用藥而發生變化，都值得進一步的探索。

在西雙版納，橡膠炭疽病是目前橡膠生產上僅次于橡膠白粉病的又一重要病害，以前膠孢炭疽菌為此病害的唯一病原，這次在西雙版納植膠區發現的尖孢炭疽菌是首次報道。尖孢炭疽菌原來被描述作為果實采后的一種病害，最近發現在橡膠生產上也引起了嚴重損失。可能是由于生物多樣性的破壞，一些弱寄生的菌上升為強寄生菌，造成了橡膠生產上的危害。從大田病害發展及室內農藥毒力測定結果來看，隨著橡膠產業的不斷發展及環境條件的逐漸變化，尖孢炭疽菌引起的病害有逐漸加重的趨勢，這為生產上防治病害帶來了更大的困難，本文僅對橡膠炭疽病進行了初步的鑒定，今后有必要開展其生物學特性及大田病害防治技術研究方面的工作，為生產上有效防治病害提供技術支撐。