虎杖苷對燙傷大鼠胃腸黏膜的保護作用

摘 要：目的：探討虎杖苷（PD）對燙傷大鼠胃腸粘膜的保護作用及與抗縮血管物質的關系。方法：88只Wister大鼠隨機分為正常對照組、燙傷對照組和燙傷治療組，應用放射免疫法及分光光度法分別測定不同組別及燙傷后不同時間血漿NPY與DAO含量。結果：PD可使燙傷大鼠應激性胃腸黏膜損傷過程中升高的血漿NPY與DAO含量降低。結論：虎杖苷對燙傷大鼠胃腸粘膜屏障具有保護作用，其作用機制可能與PD的抗縮血管物質有關。

關鍵詞：虎杖苷；胃腸粘膜損傷；NPY；DAO

中圖分類號：R285.6文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2008）07-023-02

虎杖苷（Polydatin，PD）是從蓼科蓼屬-虎杖的干燥根莖中提取的第四種單體，故又名虎杖結晶4號，也可稱為白藜蘆醇苷。中國傳統醫學認為虎杖能治療燒傷，現代藥理證明虎杖苷有多種生物活性［1］，但對燒傷所致的胃腸黏膜應激性損傷的影響未見報道。神經肽Y（N europeptide Y，NPY）主要分布于中樞神經系統和周圍神經系統中，胃腸道也有NPY神經分布。NPY具有廣泛的生理功能，作為一種血管收縮物質，可調節器官血流量［2，3］。燒傷、創傷患者早期會發生胃腸道血液供應減少，即使得到了及時充足的液體補充，也不能及時糾正胃腸道缺血，也就是胃腸道發生隱性休克。大鼠燙傷后血漿NPY升高，而這可能是造成腸道隱性休克的因素之一［4］。二胺氧化酶（Diamine oxidase，DAO）絕大部分存在于小腸粘膜上皮細胞中，在燒傷、創傷等病理條件下，腸粘膜受損，血漿中DAO顯著增高，是反映小腸粘膜較為理想的指標［5］。嚴重燒傷造成腸粘膜缺血損傷，通透性增加，腸道細菌及內毒素移位，最終導致全身炎癥反應綜合癥和多臟器功能障礙綜合癥，死亡率提高，目前尚無實用的臨床特效治療方法。因此，保護腸粘膜，從源頭上防止腸道細菌移位引發的感染及毒血癥，從而減輕全身炎癥反應，減少死亡率，具有重要的臨床意義及現實意義。本研究通過觀察虎杖苷對燙傷大鼠血漿NPY與DAO的影響，從而探討虎杖苷對燙傷大鼠腸道屏障的保護作用。

1 材料與方法

1.1 動物分組及模型制作

健康成年Wister大鼠88只，雌雄不拘，體重225~250g，隨機分成正常對照組8只、燙傷對照組40只(3h、6h、12h、24h、72h各8只)、燙傷治療組40只(3h、6h、12h、24h、72h各8只)。用10%的Na2S溶液分別將上述88只大鼠背部行脫毛處理，脫毛面積40%，洗凈。正常對照組8只脫毛不燙傷。燙傷對照組和燙傷治療組24h后，用1%的戊巴比妥鈉（4mg/100g）腹腔麻醉，蒸汽燙傷完成致傷過程，造成背部8cm×4.5cmⅢ度燙傷，腹腔注射等滲鹽水復蘇抗休克，分籠喂養，自主進食。傷后3h、6h、12h、24h、72h采血測定NPY與DAO。

1.2 藥品

PD由西安冠宇生物技術有限公司生產，虎杖苷含量為99.12%，臨用前用生理鹽水配制。

1.3 給藥方法

燙傷對照組創面用20%磺胺嘧啶銀糊劑敷貼；燙傷治療組燙傷后立即灌入虎杖苷，創面也用虎杖苷敷貼。

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1.4 樣品的采集和制樣方法

NPY測定：采用北京解放軍總醫院東亞免疫研究所提供的試劑盒，取全血2.0mL，注入含10%EDTA-Na230ul的試管中，4℃2500g離心10min，分離血漿，-20℃保存，標本收齊后統一檢測，測定采用非平衡法，具體操作按說明書執行，用SN-697全自動雙探頭放射免疫計數器計數。

血漿DAO測定：取全血2.0mL，注入含10%EDTA-Na230ul的試管中，4℃2500g離心10min，分離血漿，-20℃保存，標本收齊后統一按Wollin等介紹的方法進行檢測，向0.5mL血漿中依次加入3.0mL 0.2M磷酸緩沖液（pH7.2）、0.1mL（4μg）辣根過氧化酶溶液、0.1mL（500μg）0-二回香胺、0.1mL（175μg）二鹽酸尸胺。37℃水浴中孵育30min，在436nm波長下測OD值，從以二胺氧化酶為標準制作的曲線上查出DAO的量。

1.5 統計學處理

數據以±s表示，采用t檢驗。

2 結果

2.1 NPY水平

燙傷對照組3h、6h、12h NPY高于正常對照組，差異有顯著性（p＜0.01）。燙傷治療組6h、12h比燙傷對照組低，差異有顯著性（p＜0.01）。而且燙傷治療組恢復至正常的時間也比燙傷對照組短（見表1）。

2.2 血漿DAO水平

燙傷對照組3h、6h、12h DAO高于正常對照組和燙傷治療組，差異也有顯著性（p＜0.01）。而燙傷治療組只是略高于正常對照組，無統計學差異，而且燙傷治療組恢復至正常的時間也比燙傷對照組短。燙傷對照組，72h又有增高現象。見表1。

3 討論

筆者觀察到燙傷治療組大鼠應用虎杖苷治療后血漿NPY和DAO水平均比沒有用虎杖苷的燙傷對照組大鼠要低很多，而比正常對照組的大鼠稍高，說明虎杖苷能夠防止燙傷大鼠血漿NPY和DAO的升高。邵立健等人［6］研究提示燙傷大鼠早期腸粘膜的損傷不是由于炎癥介質的作用所致，而主要是由于腸道血液供應減少引起的。Han等人［7］應用游離的腸血管研究NPY與腸血管的收縮關系，結果表明刺激交感神經所引起的血管收縮30%是由NPY介導的，這種收縮作用可被NPY Y1受體拮抗劑所阻斷，應用放射免疫法測得在刺激頻率為16Hz時NPY含量最高，此時血管也發生強烈收縮，這表明NPY對腸血流的調節發揮重要作用。彭曦等人［8］用激光多普勒血流儀測定了燒傷后3h、6h、12h和24h腸粘膜血流量都低于正常，以傷后12h粘膜血流量降低最為顯著。邵立健等人［3］研究證實大鼠燙傷后血漿NPY的變化趨勢與前者測的燒傷后腸粘膜血流量的變化趨勢一致。并進而推測燙傷作為一種應激，交感神經興奮，引起NPY釋放，血漿NPY升高，腸血管收縮，血流量下降，腸粘膜屏障功能障礙，造成燙傷后腸道缺血缺氧性損傷。我們的結果表明虎杖苷能夠很好地對抗燙傷后血漿NPY的升高，其機理可能是虎杖苷保護創面、降低了應激性，以及作用于腸道抑制了腸道交感神經的緣故。

二胺氧化酶（DAO）是具有高度活性的細胞內酶，存在于哺乳動物小腸粘膜絨毛上層，其它組織和細胞中含量極少，其活性與絨毛高度和粘膜細胞的核酸和蛋白質合成密切相關，是反映小腸粘膜結構和功能較理想的指標。腸粘膜細胞缺血受損后，腸粘膜細胞內DAO釋放入血，致血清DAO升高，測定血清DAO活性可反映腸粘膜的缺血程度，對研究創（燒）傷后小腸粘膜結構和功能損傷可能導致腸源性感染有指導意義［9］。

虎杖是傳統的治療燒燙傷的藥物。虎杖能抗殺病原微生物，防止感染，而且具活血化瘀，止痛收斂的功效，對燒傷具有明顯的消炎、收斂、防腐的特點［9］。現代科學近一步證實虎杖中的虎杖苷確能防止血管內皮細胞受損、維持血管壁的完整性、減輕血漿外滲、防止腸粘膜損傷［10，11］，這也可能是降低DAO的原因。綜上所述，虎杖苷既能保護創面，也能減少胃腸應激性，能夠降低燙傷大鼠血漿NPY與DAO，所以對燙傷大鼠腸粘膜屏障具有明顯的保護作用。

實驗中還觀察到燙傷對照組DAO的值在3h和72h呈雙峰性升高，可能為燙傷腸缺血再灌注時腸道屏障功能有損傷。而燙傷治療組DAO的值上述現象不明顯，說明虎杖苷也能夠緩解燙傷后腸缺血再灌注時腸道屏障功能的損傷，其機理有待進一步研究。

參考文獻：

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（責任編輯：姜付平）