ＨＰＬＣ法測定感愈片中葛根素含量

摘 要 目的：建立測定感愈片有效成分含量的方法。方法：采用HPLC對感愈片中葛根素的含量進行測定。結果：葛根素在0.040～0.20μg時具有良好的線性關系，平均回收率為101.82%，RSD=1.45%(n=5)。結論：該方法靈敏、重現性好，適用于感愈片中葛根素的含量測定。

關鍵詞 感愈片 葛根素 高效液相色譜法

資料與方法

儀器與試劑：美國Waters2487-600高效液相色譜儀；Aglient-C18柱；德國SartoriusBP211D(1/10萬)電子天平；葛根素由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

色譜條件：色譜柱，Aglient-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相，乙腈:水:磷酸（10:90:0.1）；流速，1.0ml/分；檢測波長，250nm；柱溫，30℃。

對照品溶液的制備：精密稱取葛根素對照品5mg，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。①供試品溶液的制備：取本品裝量差異項下的內容物，混勻，研細，取約1g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇100ml，稱定重量，超聲處理45分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10ml，置蒸發皿中蒸干，殘渣用甲醇定容至25ml，搖勻，即得。②陰性對照品溶液的制備：取缺葛根的樣品2.0g，照供試品溶液的制備項下同法操作，即得。

線性關系考察：精密吸取葛根素對照品溶液（20.8μg/ml）2、4、6、8、10μl分別注入液相色譜儀，依法測定，根據對照品的峰面積積分值，對葛根素的進樣量繪制標準曲線，得回歸方程：Y=1.7548×105X-1.6127×104，r=0.9998。結果表明：葛根素在0.040～0.20μg時呈良好的線性關系，由于標準曲線經過原點，故采用外標一點法。色譜圖見圖1。

方法學考察精密度實驗：分別吸取10μl的對照品溶液，重復進樣5次，測得其峰面積的RSD為1.28%。穩定性試驗：精密吸取對照品溶液10μl，于0、2、4、24、36小時分別依法測定，結果峰面積的RSD為1.01%，葛根素在36小時內測定結果穩定。重現性實驗：精密稱取同一批樣品5份，按供試品溶液的制備和測試方法測定，結果供試品含量的RSD為0.96%。回收率實驗：精密稱取樣品5份，分別加入葛根素對照品一定量，按上述操作，測定，并根據樣品含量及葛根素對照品加入量，計算回收率。結果平均回收率為101.82%，RSD為1.45%(n=5)。

樣品測定：依法測定060301、060302、060303三批樣品結果見表1。

[CSX]

結 論

經過多次實驗，現本品中葛根素含量暫定為每片不得低于0.47mg。

討 論

HPLC常用的定量方法有標準曲線法，分為外標法和內標法：①外標法，在液相色譜中用得最多。②內標法，準確但是麻煩，在標準方法中用得最多［2］。

葛根素的物理性質：白色針狀結晶（甲醇-醋酸），熔點187℃（分解），(a)21D＋18.14（C=1，甲醇）。成分來源：豆科植物葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi根，野葛P.thunbergiana Benth.根。適應證：①缺血性心臟病、冠心病、心絞痛、心肌梗死。②缺血性腦血管病：腦血管痙攣、腦梗死、腦血栓形成。③眼底病（如視網膜動、靜脈阻塞、視神經萎縮）、內耳病（如突發性耳聾等）藥理藥效：①增強心肌收縮力，保護心肌細胞作用。②能擴張血管、降低血壓、改善微循環。③保護紅細胞的變形能力，增強造血系統功能等。

藥代動力學：隨著給藥劑量的增加，藥物的消除半衰期（Ti/2szlig）依次降低為（11.80，10.37，4.6小時）崐分布半衰期依資增加為（0.53，0.64，0.67小時），可通過血腦屏障，血漿蛋白結合率達24.60%。分別從尿、大便、膽汁中排泄。小鼠靜脈注射葛根素，LD為634.3mg/kg，腹腔注射LD為1412.2mg/kg。大鼠腹腔注射葛根150，100，50mg/kg連續5周，無積蓄性毒性，對心、肝、肺、脾、腎、腎上腺及腸等臟器無明顯毒性。犬靜脈注射葛根素，每日50，30，15mg/kg連續5周，再觀察70天，對大小便常規、血常規、SGPT，BUN、血糖均無明顯影響。健康成年SD大鼠實驗，劑量50，150mg/kg，對雌性大鼠胚胎及雄性大鼠生殖細胞均無致畸作用。

流動相考察：參照《中華人民共和國藥典》2005年版（一部）葛根含量測定項下測定葛根素的流動相及相關文獻，通過實驗摸索，流動相選用乙腈：水:磷酸（10：90:0.1）。葛根素具有較好的峰型和相對合理的保留時間和分離度［1］。

樣品檢測波長：取葛根素對照品，加甲醇制成每1ml中含葛根素1mg溶液，作為對照品溶液，進行紫外檢測。結果選定測定波長λmax=250nm。且溶劑陰性無干擾。

參考文獻

1 衛生部藥典委員會.中華人民共和國藥典.一部.北京:化學工業出版社，2000:256.

2 苗明三，李振國.現代實用中藥質量控制技術.北京:人民衛生出版社，2003:34.