ＲＡＳＳＦ１Ａ基因在膀胱癌中的表達(dá)及意義

467000河南省平頂山市郟縣人民醫(yī)院 

泌尿外科



摘要目的：研究RASSF1A基因在膀胱移行細(xì)胞癌（BTCC）中的表達(dá)，探討RASSF1A在BTCC發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法：采用鼠抗人RASSF1A單克隆抗體及免疫組化檢測(cè)8例正常膀胱組織及37例膀胱移行細(xì)胞癌組織中的RASSF1A蛋白表達(dá)。結(jié)果：RASSF1A蛋白的表達(dá)率在正常膀胱組織中為100%（8/8），在膀胱癌組織中為24.3%（9/37）。兩組間表達(dá)率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其中在表淺型（Ta~T1）組表達(dá)率為25%（4/16），浸潤(rùn)型（T2~T4）組表達(dá)率為23.8%（5/21），二組中表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)表達(dá)率分別為27.3%（3/11）、22.22%（4/18）、25.0%（2/8）。該三組之間表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：RASSF1A基因的失表達(dá)或低表達(dá)，可能與膀胱移行細(xì)胞癌的發(fā)生有關(guān)，而與其臨床分期、病理分級(jí)無關(guān)。該基因有望作為早期診斷膀胱腫瘤發(fā)生的腫瘤學(xué)標(biāo)記物。

關(guān)鍵詞 膀胱腫瘤 癌 移行細(xì)胞 RASSF1A基因 免疫組化

采用免疫組織化學(xué)方法對(duì)8例正常膀胱組織及37例膀胱腫瘤組織中RASSF1A蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，以探討RASSF1A基因的表達(dá)與膀胱腫瘤的發(fā)生、臨床分期及病理分級(jí)的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

一般資料：收集我院泌尿外科2005年10月~2006年6月住院病人的膀胱移行細(xì)胞癌病理標(biāo)本37例及癌旁正常膀胱組織8例。男31例，女6例，年齡37~81歲，平均68.4歲。所有患者術(shù)前均未行化療或放療。臨床分期：淺表型（Ta~T1）16例，浸潤(rùn)型（T2~T4）21例。其中Ⅰ級(jí)11例，Ⅱ級(jí)18例，Ⅲ級(jí)8例。

方法與試劑：抗體為英國(guó)生產(chǎn)的鼠抗人RASSF1A單克隆抗體，采用SABC法常規(guī)微波抗原修復(fù)3分鐘，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性；滴入RASSF1A抗體30μl，放入濕盒過夜。

DAB顯色、蘇木素復(fù)染、梯度酒精脫水、二甲苯透明，封片后進(jìn)行結(jié)果判定。

對(duì)照實(shí)驗(yàn)：正常對(duì)照組為癌旁正常膀胱組織；陰性對(duì)照為PBS代替抗體的空白對(duì)照。

結(jié)果評(píng)定：無陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞，或陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞率＜20%為陰性，陽(yáng)性細(xì)胞呈棕黃色。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)介于20%~40%為弱陽(yáng)性（+），介于40%~60%為陽(yáng)性（++），陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞60%者為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：統(tǒng)計(jì)RASSF1A蛋白陽(yáng)性標(biāo)本例數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性率X²檢驗(yàn)。以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

RASSF1A陽(yáng)性著色定位于細(xì)胞漿，顯彌漫性均質(zhì)狀。正常膀胱黏膜上皮細(xì)胞顯陽(yáng)性反應(yīng)，著色較重，呈彌漫性分布，膀胱腫瘤組織少數(shù)呈陽(yáng)性反應(yīng)，著色較淺。部份呈局灶性。

RASSF1A蛋白在正常膀胱組織表達(dá)率為100%，在TCC組織中的表達(dá)率為24.3%（9/37），兩者間的表達(dá)有顯著性差異（P＜0.05），各病理分級(jí)間、臨床分期間的表達(dá)無顯著性差異（P＞0.05）（見表）。

討論

RASSF1A基因是2000年報(bào)道的從3號(hào)染色體短臂克隆出來的新型候選抑癌基因，因其表達(dá)產(chǎn)物中含有與Ras蛋白結(jié)構(gòu)區(qū)域，因而得名RASSF1A。已有研究顯示，RASSF1A基因在正常組織中廣泛表達(dá)，并認(rèn)為RASSF1A基因是人類腫瘤中經(jīng)常失活的抑癌基因。近年來對(duì)RASSF1A的研究中證實(shí)，RASSF1A在正常組織中100%表達(dá)，但在肺癌、乳腺癌、鼻咽癌、腎癌、前列腺癌和膀胱癌等中卻出現(xiàn)了較高頻率的表達(dá)缺失，并經(jīng)甲基化特異性PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)RASSF1A的啟動(dòng)子的CPG島被高甲基化，卻較少出現(xiàn)突變。因此，目前認(rèn)為，由于RASSF1A啟動(dòng)子的異常甲基化，引起了RASSF1A表達(dá)的缺失，導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生。

RASSF1A基因含有6個(gè)外顯子，在啟動(dòng)子區(qū)域存在16個(gè)CPG位點(diǎn)。其DNA全長(zhǎng)1873bp，含340個(gè)氨基酸的開放讀框，編碼產(chǎn)物相對(duì)分子量為38800的蛋白多肽，為可溶性胞質(zhì)蛋白。酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)表明，該蛋白能與DNA修復(fù)蛋白XPA發(fā)生相互作用，表明該蛋白內(nèi)含有與XPA相互作用的位點(diǎn)。在缺失RASSF1A表達(dá)的腫瘤細(xì)胞中使其再表達(dá)，可抑制腫瘤細(xì)胞克隆的形成和非貼壁腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。Lee等在對(duì)膀胱移行細(xì)胞癌的研究中發(fā)現(xiàn)，80%的膀胱癌細(xì)胞系測(cè)不到RASSF1A的表達(dá)，有60%的原發(fā)性膀胱癌中有RASSF1A表達(dá)的減少，在97%未表達(dá)的原發(fā)性膀胱癌中發(fā)現(xiàn)了RASSF1A啟動(dòng)子甲基化。本研究中8例正常膀胱黏膜均有RASSF1A蛋白的表達(dá)，在膀胱癌組織中的表達(dá)率分別為表淺型25.0%（4/16）、浸潤(rùn)型23.8%（5/2），說明RASSF1A的低表達(dá)可能參與了膀胱癌的發(fā)生，其低表達(dá)與膀胱癌的分級(jí)、分期無顯著相關(guān)性。提示RASSF1A與腫瘤的發(fā)展、演進(jìn)關(guān)系不甚密切。作為新發(fā)現(xiàn)的候選抑癌基因，RASSF1A基因的功能及作用機(jī)制仍未完全明確，能否作為判斷早期膀胱腫瘤發(fā)生的有效腫瘤學(xué)標(biāo)記物，值得進(jìn)一步研究。