丹參的^１３Ｃ－ＮＭＲ指紋圖譜研究

(1.山東省分析測試中心，山東 濟南 250014；2.山東省科學院生物研究所，山東 濟南 250014)

摘 要：目的：利用傅立葉變換核磁共振波譜儀測定不同產地丹參提取物的¹³C-NMR圖譜，建立鑒別丹參藥材真偽優劣的核磁共振指紋圖譜分析。方法：對丹參提取物的¹³C-NMR指紋圖譜進行解析；并與其活性成分丹參酮IIA、丹參酮Ⅰ、隱丹參酮和二氫丹參酮進行¹³C-NMR譜圖的比較與指認；獲得了兩種丹參偽品¹³C-NMR譜圖，并與丹參特征提取物譜圖進行相似度分析。結果：相似度分析處理結果表明，利用NMR指紋圖譜能快速確定丹參藥材的真偽優劣。結論：該方法操作簡單、快捷、可靠，可以作為丹參藥材真偽鑒別的依據。

關鍵詞：¹³C-NMR；指紋圖譜；丹參；鑒別

中圖分類號：R284.1文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2008）10-0021-02

丹參為唇形科植物Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖。始載于《神農本草經》，列為上品。主產我國的四川、河北、安徽等省，有祛瘀止痛，活血通經，清心除煩之功效^［1］。現代臨床上主要用于加強心肌收縮力以及促進組織的修復與再生等。丹參是最為廣泛應用的中藥材之一。有報道其偽品為旋花科植物甘薯Ipomoea batatas(L)La的干燥須根，經染色后的加工品及中藥續斷等。為此本篇以不同產地丹參的特征提取物為研究對象，以核磁共振作為主要研究手段，對獲取的丹參¹³C-NMR指紋圖譜進行相似度分析，以此作為控制丹參藥材質量的標準。

1 儀器與試藥

儀器：Varian INOVA 600型超導傅立葉變換核磁共振波譜儀。試藥：乙醇為分析醇，蒸餾水；丹參及甘薯的干燥須根，丹參偽品續斷購自山東臨沂、蒙陰、莒縣、安徽、河北等地，由山東省分析測試中心王曉研究員鑒定；丹參酮IIA、丹參酮Ⅰ、隱丹參酮、二氫丹參酮對照品由山東省分析測試中心提供。

2 實驗方法

2.1 樣品的制備

取丹參各產地樣品5g，加90%乙醇25mL，超聲提取45min^{［2，3］}，濾取提取液，將溶劑揮干，取一定量殘余物備用。

2.2 實驗條件

丹參酮IIA、丹參酮Ⅰ、隱丹參酮、二氫丹參酮和丹參及其偽品提取物的¹³C-NMR指紋圖譜用Varian INOVA 600型超導傅立葉變換核磁共振波譜儀在25℃測定，掃描次數分別為10000次，以CDCl3-d 做溶劑，TMS為內標。

2.3 精密度實驗

(1)儀器精密度：將約5mg丹參酮IIA用CDCl3-d，在上述實驗條件下重復測定¹³C-NMR六次，計算丹參酮IIA中17位甲基碳信號化學位移的RSD為2.1%

(2)方法精密度：將丹參提取物1號約5mg在上述實驗條件下重復測定¹³C-NMR六次，計算丹參酮IIA中17位甲基碳信號化學位移的RSD為3.2%

2.4 穩定性實驗

將丹參提取物1號在0、2、4、6、8及24h時測定，計算丹參酮IIA中17位甲基碳信號化學位移的RSD為3.4%，結果表明，丹參供試品常溫下24h保持穩定。

2.5 樣品NMR指紋圖譜的測定

將各批次丹參樣品及偽品按2.1所述方法進行制備并測定其¹³C-NMR指紋圖譜。典型指紋圖譜見圖1。

圖1 1號丹參樣品的¹³C-NMR核磁共振指紋圖譜

3 相似度分析

根據專家的形態學鑒定結果，首先選取1號野生丹參藥材測定指紋圖譜，并以其指紋圖譜為參照，以向量夾角法為測度，進行相似度分析。向量夾角法是以N 個數值組成的行( x1， x2， x3，…，xn ) 稱為N維向量，簡記為大寫字母X， 定義|X|=x21+x22+x23+…+x2n為向量X 的模。如果存在兩個向量X 及Y 則稱為X 與Y 的內積，X、 Y 之間的向量夾角按照下面公式計算。如果cosθ越接近1則說明兩個向量越相似^［4］。

cosθ=X#8226;Y|X|×|Y|

每個NMR指紋圖譜都可以看作一組對應化學位移的峰高(或峰面積)的數值，可將這組數值看作多維空間中的向量，使兩個指紋圖譜間相似性的問題轉化為多維空間的兩個向量的相似性問題，利用上面公式計算cosθ來定量表

征指紋圖譜間的相似性。cosθ值大于0.85為推薦藥材，小于0.85為不推薦藥材或其它種屬藥材。相似度分析結果見表1。

4.1 丹參中功效成分的¹³C-NMR譜分析

丹參的主要功效成分為丹參酮類化合物等，見圖2、表2。因此獲得丹參中丹參酮IIA、丹參酮Ⅰ、隱丹參酮和二氫丹參酮的¹³C-NMR譜對于確認和辨別丹參的指紋圖譜非常重要。 丹參提取物及丹參酮類化合物的歸屬見表3。 

4.2 丹參的¹³C-NMR指紋圖譜特征

丹參提取物的¹³C-NMR指紋圖譜包含了丹參提取物中所有物質的氫信號，因此可以全面地反映丹參的整體化學組成，同時丹參提取物的¹³C-NMR指紋圖譜中的特征峰則可以反映丹參的特征信號，便于鑒別和指認。因此丹參提取物的¹³C-NMR指紋圖譜可以從整體面貌和局部特征信號兩方面的結合來反映丹參的整體特征。同時丹參提取物的¹³C-NMR指紋圖譜與其丹參酮類成分（丹參酮IIA、丹參酮Ⅰ、隱丹參酮和二氫丹參酮）¹³C-NMR中特征峰的比較，則達到了在整體上了解丹參特征面貌的同時，對其特征成分進行指認和鑒別的目的，進而對其質量控制提供參考依據。

4.3 丹參的¹³CNMR指紋圖譜的相似度

利用向量夾角法計算¹³C-NMR指紋圖譜的相似度能夠定量的對獲得的指紋圖譜進行科學有效的評價。不同丹參¹³C-NMR指紋圖譜的相似度結果見表1。對于不同產地丹參的相似度，除了7、8外，其余丹參的¹³C-NMR指紋圖譜相似度都在0.85以上，說明不同丹參有效成分及含量方面的一致性。但由于產地不同等原因，又造成了其指紋圖譜之間具有一定的差異性，即相似度的差異。而7、8號樣品的指紋圖譜則相似度存在較大差異，可以歸為偽品或其他種屬藥材。

5 結論

通過對不同產地丹參提取物及其偽品的指紋圖譜的研究表明，不同丹參提取物的¹³C-NMR指紋圖譜有很好的重現性和高度的特征性，¹³C-NMR指紋圖譜和特征性數據能夠準確地反映丹參特征性化學成分的存在，可以作為丹參質量評價的相對標準圖譜和數據。依據本方法可以快捷方便地鑒別丹參藥材的真偽優劣。

參考文獻：

［1］ 任仁安.中藥鑒定學［M］.北京:上?？茖W技術出版社， 1986.

［2］ 郭孝武，沈志剛.超生提取對丹參藥材中酯溶性成分的影響［J］.陜西師范大學學報，2007，35（3）：48-51.

［3］ 曹明成，沈善，潘純發.丹參提取工藝的實驗研究［J］.中成藥，1996，18（1）：4-6.［4］ 孫慶雷， 林云良，王曉等.金銀花的¹³C-NMR指紋圖譜研究［J］.波譜學，2006，23(2):28-34.

（責任編輯：陳涌濤）