春石斛蘭組培關鍵技術研究

張 瓊 曾燕楠 張寧寧 朱儆元 高年春

摘要:通過表面殺菌劑的篩選、無菌種子播種技術研究、增殖、壯苗生根培養基及煉苗基質的篩選,建立一套組培快繁春石斛蘭的技術體系,實現工廠化生產的目標。

關鍵詞:春石斛蘭;組織培養;無菌播種;增殖;生根;壯苗;工廠化

中圖分類號:S682.31文獻標識碼:ADOI編碼:10.3969/j.issn.1006-6500.2009.05.022

Foundation of System on Tissue Culture of Dendrobium nobile

ZHANG Qiong, ZENG Yan-nan, ZHANG Ning-ning, ZHU Jing-yuan, GAO Nian-chun

(Nanjing Institute of Agricultural Sciences, Nanjing, Jiangsu 210046, China)

Abstract:Tissue culture techniques of Dendrobium were researched in this paper. Through filtrating surface antiseptic, In vitro rapid propagation and regeneration,filtrating the multiplication media and rooting media, the system for techniques tissue culture of Dendrobium nobile was set up.

Key words: Dendrobium nobile; tissue culture; multiplication; radication; factorys

春石斛蘭(Dendrobiumnobile)是蘭科石斛屬植物。具有花朵密集繁茂,花形千姿百態,色彩艷麗豐富的特點。它的切花及盆栽優良品種在國際花卉市場上倍受青睞,成為人們裝點居室、會議廳的精品,是一種正處于發展中的具有較高經濟價值和觀賞價值的花卉植物。國內市場上,一盆四拼組合的優質春石斛蘭價格曾高達1 000元,國際市場上則更加昂貴,市場空間巨大。但常規的分株繁殖速度慢,滿足不了市場需求,大大地限制了推廣速度。采用組織培養及其快繁技術,建立一套經濟高效的組培快繁體系,對解決春石斛蘭種苗的供需矛盾具有重要意義。

1材料和方法

1.1供試材料

試驗在南京市農業科學研究所組織培養中心進行,供試材料有從深圳蕙鑫科技有限公司引進的星光、友誼使者,南京市農業科學研究所具有自主知識產權的雜交品種春石斛1號及經過20 Gy輻照過的春石斛4號。以星光、友誼使者的莖頭(見1.2.1)及春石斛1號、春石斛4號半成熟種子為外植體進行組培試驗。

1.2方法

1.2.1莖頭表面滅菌試驗星光、友誼使者新萌發的嫩莖除去葉片,保留葉鞘,用洗潔精清洗浸泡10 min,再用軟毛刷仔細清洗并流水沖洗30 min。分成5組,每組20個。以用75%酒精滅菌作對照,另外4組分別用75%酒精滅菌后再用0.1%升汞、0.2%升汞、10%的次氯酸鈉和15%的次氯酸鈉消毒,無菌水沖洗干凈,剝取莖段接種到6-BA和NAA分別是3.0 mg/L和1.0mg/L的誘導培養基上。

1.2.2種子消毒試驗取春石斛1號、春石斛4號的半成熟、未開裂種莢,先用75%的酒精進行表面消毒,再用0.2%的升汞殺菌10 min,無菌水沖洗干凈,小心地撕開種莢,取出棉絮狀的微型種子,攤開在加入激素的MS培養基上。在22～25℃, 1 000～2 000 lx的環境下培養50 d。以長成的叢芽為外植體進行組織培養。

1.2.3激素對組培苗的影響待誘導出的不定芽長到1 cm以上,切下接入添加不同配比激素的MS培養基中,6-BA和NAA濃度配比分別為0.5 mg/L ∶0.1 mg/L ,0.5 mg/L ∶0.2 mg/L,1.0 mg/L∶0.1 mg/L,2.0 mg/L∶0.2 mg/L,1.0 mg/L∶0.2 mg/L,2.0 mg/L∶0.1 mg/L。在22～25℃,光照1 000～2 000 lx的環境下培養。

1.2.4基本培養基的篩選本試驗進行了基本培養基的篩選,將增殖苗接入不含激素的不同基本培養基MS、LS、R2、B5、N6中,篩選壯苗的基本培養基。

1.2.5生根試驗待壯苗25 d后,叢生芽達到2 cm以上,轉入生根培養基。選取健壯的增殖苗,從每株苗的基部分開,接入N6加不同濃度配比的IBA、IAA、NAA生根培養基中誘導生根。

1.2.6馴化煉苗試驗石斛蘭組培苗對環境條件要求較高,常規移栽成活率較低,因此,在移植之前必有一個煉苗過程。當生根苗長到4 cm以上時,即可開始出瓶煉苗。先將生根苗連瓶移到煉苗場,適應1 d之后打開瓶蓋,10 d后出瓶。出瓶時要小心仔細,盡量減少根部損傷。選用了泥炭、水苔、珍珠巖、泥炭+珍珠巖和水苔+泥炭不同基質。

2結果與分析

2.1莖尖表面滅菌試驗

不同殺菌劑和濃度對外植體殺菌效果見表1。結果表明,0.2%升汞殺菌8 min效果最好。

2.2激素對石斛蘭增殖倍數和成苗率的影響

表2為生長素、細胞分裂素對石斛蘭類生長的影響,及最佳配比。結果表明,6-BA和NAA濃度分別為0.5 mg/L 和0.2 mg/L的MS增殖培養基增殖效果最好,生長速度快,葉色濃綠,成苗率高。

2.3壯苗培養基的篩選試驗

以MS為基本培養基的增殖培養基增殖快,葉色綠。但有一個很大的缺點,就是分枝太多,易倒伏,根系向上,苗向下長,很不容易成苗。所以,我們進行了基本培養基的篩選,結果如表3所示,N6基本培養基對石斛蘭壯苗效果較好。

2.4生根試驗

研究發現,IBA為0.5 mg/L的生根培養基生根量和生根率最高(表4)。當根系長至0.5 cm即可進入馴化練苗階段。

2.5馴化煉苗試驗

從表5中可以看出,水苔是石斛蘭煉苗的最好基質。4個品種的石斛蘭在水苔培養基中的成活率都遠遠超過其他基質。栽培之后的管理是保證組培苗移栽成功的關鍵,既要防病,又要控制好溫、濕度及光照,稍有不慎就會造成很大損失。在管理過程中要格外注意水分的控制,開始幾天不能澆水,以刺激根系的生長。接下來也不可大水漫灌,要用噴壺細心的慢慢噴,每天至少噴4次,雨天停止噴水。1個月后,種苗基本成活,新根系長出,抽出新葉才能澆水。

3小結

(1)石斛蘭組培的難點是外植體增殖、無菌種子播種、生根壯苗和煉苗馴化,這些關鍵技術對于石斛蘭苗的工廠化生產意義重大。外植體的增殖倍數的高低、原球莖的多少,都關系著能否以最快的速度,繁殖出優質的石斛蘭種苗。無菌播種能夠快速大量的繁殖來自同一枚種莢的種苗,有利于優良品種的快速擴繁。生根壯苗技術也是石斛蘭組培的關鍵,如果生產的苗弱或者狀態不佳,有可能造成全軍覆沒的嚴重后果。

(2)擴繁一定數量的石斛蘭組培苗后,必須提高練苗成活率。石斛蘭看似抗逆性強,幾天不澆水也不會干死。但是一旦缺水就會停止生長,無法恢復。一次澆水過多,幾天后就會發黃、爛根。因此,石斛蘭的煉苗技術對管理者的管理水平要求很高,稍有不慎,就會使前期的工作白白付之東流。

(3)在幼苗期,要抹去基部多余的側芽,留1~2個健壯的芽繼續生長。每隔10 d要施肥1次。隔周噴藥防病。只要管理精細,方法得當,石斛蘭一定會茁壯成長,為我們創造很高的經濟價值。

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