甜瓜枯萎病接種方法比較試驗初報

王登明　張學軍　馮炯鑫　王葉筠　伊鴻平

摘要：分別采用灌根法、米飯粒接種法、蘸根法及胚根接種法對甜瓜枯萎病進行接種試驗，擬為甜瓜抗病育種提供依據。結果表明：米飯粒接種法發病率最高，達到99％；胚根接種法最低，為10％；灌根法發病率為66.7％；蘸根法發病率為91％，且操作簡單、精確，最適合進行甜瓜枯萎病抗病鑒定研究。

關鍵詞：甜瓜；枯萎病；接種；蘸根法

甜瓜枯萎病是甜瓜生產中的主要病害之一，近年來隨著溫室、大棚等設施瓜菜生產的發展。該病的發生日益嚴重。并有蔓延趨勢，嚴重影響了甜瓜產量和品質，使瓜農遭受巨大經濟損失。因該病為土傳病害，藥劑防治相對困難，并且由于長期用藥，病原菌逐漸產生抗藥性，防治效果日益降低，所以選育抗病品種被認為是最經濟、最有效的措施。為此，國內外相繼開展了甜瓜抗枯萎病育種研究。本文初步研究了甜瓜枯萎病苗期抗性鑒定接種的幾種方法，選出了最佳的接種方法。擬為甜瓜抗枯萎病育種奠定基礎。

1材料與方法

試驗于2008年12月在海南三亞新疆農業科學院哈密瓜研究中心科技示范園進行。

1.1供試材料

1.1.1供試菌種甜瓜枯萎病病原菌為尖孢鐮刀菌甜瓜?；?Fusarium oxysporurrt f.sp.melonis)，在海南三亞新疆農業科學院科技示范園分離獲得。供試甜瓜品種：金鳳凰，新疆農業科學院哈密瓜研究中心提供。

1.1.2培養基(1)PDA培養基：200g馬鈴薯，20g葡萄糖，20g瓊脂，1000mL水；(2)米飯培養基：取大米10g，倒入50mL三角瓶中，加20～30mL水于121℃下滅菌25min；(3)PD培養液：200g馬鈴薯，20g葡萄糖，1000mL水；(4)玉米粒培養基：取干玉米粒若干。倒入100mL三角瓶中，加30mL水于121℃下滅菌25min。

1.2接種方法

1.2.1供試材料準備將種子放置在電恒溫烘箱中，38～68℃干熱消毒2～5d。再將消毒后的干種子直接播于已消毒以椰糠和黃砂(8:1)混合物為基質的12孔育苗盤，每孔10粒。放在28℃左右溫室大棚內正常管理備用。

1.2.2接種體準備將病原菌分別接種于盛有100mL PDA培養液的三角瓶、PDA平板、裝有米飯粒和玉米粒的三角瓶中，25℃下培養7～10d備用。

1.2.3接種方法本試驗共設3個處理，3次重復，每個重復30株。

1.2.3.1灌根接種法病原菌于PD培養液中振蕩培養7～10d，培養溫度25℃，培養液經4層紗布過濾配成稀釋液，用血球記數板鏡檢記數孢子濃度，制備成濃度為1×10⁶個/mL孢子懸浮液用于接種。該稀釋液含有病原菌產生的毒素，在幼苗子葉期輕輕拔起植株并用清水沖洗根部，栽種于盛有營養土的育苗缽內，每缽注入10mL稀釋液，架拱22～25℃的溫室中保濕48 h。然后在溫室內正常管理，觀察幼苗發病情況，接種后自發病之日起，每天觀察幼苗的發病情況，共調查7d，統計總發病株數。

1.2.3.2米飯粒接種法在三角瓶中加少許大米粒，加水浸泡1～2min，將水倒出，121℃滅菌25min，接菌培養7～10d后，以1％的劑量拌入椰糠基質中。在幼苗子葉期，輕輕拔起植株并用清水沖洗根部，栽種于盛有接菌營養土的育苗缽內。架拱22～25℃的溫室中保濕48 h，然后在溫室內正常管理，觀察病情同上。

1.2.3.3蘸根接種法用2L無菌蒸餾水洗培養皿上的孢子，血球記數板鏡檢記數，達到5×10⁶個/mL，幼苗子葉期輕輕拔起植株用清水沖洗根部，輕輕微傷根后在菌懸液中蘸根15min，然后定植在營養杯內。架拱22～25℃的溫室中保濕48 h，然后在溫室內正常管理，觀察病情同上。

1.2.3.4胚根接種法在三角瓶中加少許玉米粒，加水浸泡1～2min，將水倒出，121℃滅菌25min，接菌培養7-10d后，用無菌蒸餾水沖洗玉米粒，用血球記數板鏡檢記數孢子濃度，制備成濃度為5×10⁶個/mL孢子懸浮液，再將催好芽的種子浸泡在菌液中30min后立即播種。然后在溫室內正常管理，觀察病情同上。

2結果與分析

試驗結果表明：4種接種方法中，采用米飯粒接種法接種發病率最高，達到99％；蘸根法接種發病率次之，為91％；灌根法接種發病率低，僅66.7％，與米飯粒接種法發病率相差32.3個百分點：而胚根接種法發病率僅為10％。4種接種方法中，米飯粒接種法潛育期最短，為3.3d，但其發病率最高；蘸根法為6.3d；灌根法為8d；胚根接種法潛育期最長，為13.7d，且發病率最低。從操作上看，胚根接種法最簡單，蘸根法也比較方便。方差分析表明，4種不同接種方法的發病率差異顯著，且米飯粒接種法、蘸根接種法與灌根接種法和胚根接種法間的差異達到極顯著水平。見表1。

3結論

研究者對甜瓜枯萎病接種方法已經做了很多工作，本試驗第1次對甜瓜枯萎病4種接種方法進行了比較。結果表明：(1)灌根法操作簡單，病原菌劑量最易把握，但是發病率太低、發病慢。(2)米飯粒接種法發病太快。幾乎百分之百發病，病原菌劑量不易把握，操作較復雜，且不易攪拌均勻。(3)胚根接種法基本不發病，可能是病原菌孢子濃度達不到發病的理想濃度，筆者認為應進一步進行濃度梯度試驗，從而驗證此方法是否適宜接種甜瓜枯萎病。(4)從試驗結果的準確性、試驗操作的簡便性及接種方法的效果方面綜合考慮，試驗的初步結論為采用蘸根法接種進行甜瓜枯萎病抗病鑒定最合適。