多順反子慢病毒載體介導編碼基因在人胚胎干細胞中的表達

李　慧　李　威　王　倩　宋和存　郭　毅

摘要：人胚胎干細胞的基因修飾對于干細胞在體外的調控及促進干細胞在治療方面的應用具有很高價值．探討了以艾滋病病毒－1為基礎的慢病毒栽體轉導人胚胎干細胞，表達2種或3種轉移基因的可行性和功效。應用腦心肌炎病毒的內部核糖體進入住點(IRES)序列和，或口蹄疫病毒(FMDV)裂解因子2A構建雙順反子和三順反子慢病毒載體，綠色熒光蛋白(eGFP)和06-甲基鳥嘌呤－DNA．甲基轉移酶作為檢測基因．抗嘌呤基因(嘌呤－N－甲基轉移酶；PAC)作為選擇基因，轉染人胚胎干細胞后經過嘌呤選擇．通過流式細胞技術和蛋白印跡雜交方法檢測eGFP和MGMT的表達．多基因慢病毒栽體可以同時將2或3個基因轉移到人胚胎干細胞．多順反子慢病毒栽體轉導人胚胎干細胞后經過嘌呤選擇，可以使轉移基因高效、均勻的表達。在人胚胎干細胞的基礎和應用研究方面具有重要意義。