分子信標檢測限制性內切酶活性的新型熒光分析方法
2009-04-29 00:44:03霍希琴顏鴻飛李軍周興旺李偉羊小海
生命科學研究 2009年1期
霍希琴 顏鴻飛 李 軍 周興旺 李 偉 羊小海
摘要：利用分子信標被切割后熒光信號的變化，發展了一種簡便的檢測限制性內切酶活性的新型熒光分析方法。以限制性內切酶Xsp I為例，將其識別位點嵌入具有莖環結構的分子信標探針(Molecular Beacon，MB)的環狀部分。利用這種分子信標在溶液中形成的瞬時二聚體結構，實現了限制性內切酶對分子信標的切割。在優化的條件下。反應初速度與酶的濃度成正比，線性范圍為0.05～50U/mL，檢測限為0.05U.mL。通過改變分子信標環部的識別位點的序列，還可以檢測其他限制性內切酶如Alu I的活性。
關鍵詞：分子信標；熒光分析；限制性內切酶
中圖分類號：Q55文獻標識碼：A文章編號：1007－7847(2009)01－0006－05
