反相高效液相色譜法測定迷迭香中鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的含量

中圖分類號：R282.71 文獻標識碼：B 文章編號：1006－1533(2009)10－0469－02

迷迭香(Rosmarinus officinalis L.)系唇形科迷迭香屬多年生草本植物，原產于歐洲及北非地中海沿岸，現在我國云南、湖南、四川、貴州等地也有種植。迷迭香是一種多用途的經濟作物，從中可提取抗氧化劑、迷迭香精油和醫藥中間體。抗氧化劑是從迷迭香植物中提取得到的粉末狀物質，主要成分是具有抗氧化功能的酚、酸、黃酮類成分，結構明確的活性成分有鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酚等；迷迭香提取物具有高效、無毒的抗氧化效果，可廣泛應用于食品、功能食品、香料、調味品和日用化工等行業中。筆者以反相高效液相色譜法(HPLC)測定迷迭香中鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的含量，重現性好，靈敏度高，操作簡便，適用于迷迭香的質量控制。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀(美國)；AE 240電子天平(METrLER TOLEDO，上海)；RE 52－86A旋轉蒸發儀(上海亞榮)。8批樣品經中南大學藥學院鑒定，均為唇形科迷迭香屬植物迷迭香。甲醇為HPLC級，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。鼠尾草酚和鼠尾草酸對照品購自SIC-MA公司；熊果酸購自中國藥品生物制品檢定所。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil 100-5C18(4.6 mm×250 mm，5μm)；流動相：甲醇-0.2％磷酸溶液(82：18)；流速為1 mL/min；紫外檢測器測定鼠尾草酚和鼠尾草酸檢測波長：284 mm，測定熊果酸檢測波長：210 nm。進樣量10μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取鼠尾草酚、鼠尾草酸對照品適量，加乙醇溶解，定容至25 mL量瓶中，其濃度分別為0.1和0.3 mg/mL，作為對照品混合貯備液。精密稱取熊果酸對照品適量，加乙醇溶解，制成每1 mL含0.3 mg的溶液，作為熊果酸對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

稱取樣品粉末0.5 g，精密稱定，精密加入乙醇50 mL，稱定重量，加熱回流提取1 h，冷卻，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.4 供試品溶液系統適用性試驗

按“2.3”項下制備供試品溶液。在上述色譜條件下測定，分別測得鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的相對保留時間分別為6.4、15.8和47.7 min，理論塔板數分別為11186、14350和15329，分離度均大于1.8，符合定量要求。

2.5 線性關系考察

分別精密吸取上述已配制的3種對照品貯備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0 mL，加乙醇定容成10 mL，各進樣10μL，記錄色譜圖，以濃度C(mg/mL)對峰面積A進行回歸，得回歸方程。

2.6 精密度試驗

精密吸取同一份供試品溶液，在上述色譜條件下連續進樣6次，測定其峰面積，計算RSD，鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸RSD分別為0.44％、0.31％和0.60％。

2.7 穩定性試驗

精密吸取同一供試品溶液10μL，每6 h左右進樣1次，測定、記錄峰面積，以峰面積計算RSD，鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸RSD分別為1.38％、1.10％和1.94％(n=6)。結果表明供試品溶液在室溫條件下放置30 h比較穩定。

2.8 重復性試驗

取同一批號樣品粉末0.5 g，共6份，精密稱定，按照“2.3”項下方法制備成供試品溶液，進樣10μL，按外標法計算。測得迷迭香鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸平均含量分別為0.60％、2.41％和1.98％，RSD分別為1.26％、1.43％和1.77％(n=6)，該方法的重復性較好。

2.9 加樣回收率試驗

準確稱取已鋇4定含量的迷迭香粉末0.25 g，共9份，精密稱定，分別置于50 mL量瓶中，每3份為1組，分別準確加入鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸對照品混合貯備液5.0、10.0、15.0 mL，按照“2.3”項下方法制備成供試品溶液。按上述色譜條件進行分析。3種濃度(高、中、低)的加樣回收率結果見表2。

2.10 樣品測定

按照“2.3”項下方法制備不同產地的供試品溶液，在上述色譜條件下測定，按外標法計算，結果列于表3。

3 討論

1)根據所測成分的溶解性，本實驗考察了用甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯等溶媒和超聲、回流等提取方法。結果表明，以乙醇回流1 h的提取方式，提取出來的雜質較少，通過加樣回收率試驗驗證該方法提取充分。

2)試驗中，鼠尾草酚、鼠尾草酸含量測定的檢測波長根據其各自的紫外最大吸收確定。熊果酸中無共軛體系，紫外吸收波長較短，熊果酸吸收峰在210 nm附近靈敏度較高，其他色譜峰干擾較小，分離最為理想，故試驗選用210m作為熊果酸含量測定的檢測波長。

3)試驗用的高效液相色譜條件是在參考有關文獻的基礎上，經過優化、篩選而確定的。采用2％磷酸溶液一甲醇系統，基線平穩，峰形、分離效果較佳，3種成分的分離度均在1.80以上，達到基線分離，可以同時對3種成分準確定量。

4)不同產地的迷迭香，其3種成分的含量差異較大，通過綜合考察這些成分的含量，能更科學地評價迷迭香的質量優劣。