病理實驗教學H.E切片制作要點與日常管理

摘要病理教學切片的質量直接影響著病理實驗教學的質量，本文簡要分析病理教學切片制作的主要環節及標準化管理，以便更好的為病理教學服務。

關鍵詞教學切片制作環節質量管理

中圖分類號:G427文獻標識碼:A

病理學是醫學教育中實踐性很強的一門基礎學科。豍觀察常規HE切片的組織學改變是病理學研究和診斷重要的基本方法之一。在病理實驗教學過程中學生通過對病理切片的顯微鏡下觀察了解其病變特點、可能產生的臨床癥狀及疾病的發生發展過程和機制，從而對疾病做出準確的病理診斷。所以，教學切片的制作和管理是病理學實驗教學的重要組成部分，也直接影響病理學實驗課的教學效果。現就教學切片制作過程中的重要環節、注意事項以及切片管理做概括介紹。

1 教學切片的制作

1.1蠟塊的制作

(1)取材。教學標本一般來自醫院手術切及尸體解剖組織，明確病理診斷后選取教學所需典型病例。取材時若條件許可，需帶有病灶周邊正常組織;若無法保證，則單獨取一小塊正常組織與病變部位共同包埋。這樣在最終制成的切片上既有病變組織，又有正常組織，便于對比觀察。取材一般厚度以0.2-0.3cm為適，含水量豐富或易脆的組織如腦、甲狀腺、癌組織等可適當厚一點，而脂肪組織、平滑肌瘤等致密的或試劑不易滲入的組織應取薄一些;淋巴結應修掉兩側球冠，并盡量剔除周圍的脂肪組織。在切取纖維組織、肌肉組織、胃腸時，應注意纖維及肌肉的走向，取材時盡可能按與纖維平行走向切取為佳。

(2)固定。新鮮標本應及時固定，教學標本制作H.E切片所用固定劑為4%甲醛溶液。根據標本體積大小不同調整固定時間，一般4-12小時或更長。固定組織時，應該使用足量的固定液，多比少好，一般應為組織體積的5—10倍，最少也不應少于5倍。骨組織及鈣化病灶，經過固定后，必先浸入脫鈣液(濃鹽酸10-15ml，溶于100ml生理鹽水中)脫鈣，才能進行常規切片，如脫鈣不全則切片易碎裂并損傷切片刀刃。

(3)脫水。組織經過取材固定后，一般經由70%，80%，90%，95%，以至無水酒精的脫水程序，各級濃度酒精內處理的最短時間分別為2-4小時即可達到脫水的要求。但因用于制作教學切片的組織體積一般較大較厚，要求保持液體的濃度以保證脫水的作用，最好是以兩次95%酒精，兩次100%酒精重復進行脫水，以保證組織的水分脫凈。豎脫水時間應視組織種類，組織塊大小，厚薄和固定劑的不同而異。

(4)透明。組織透明時間長短應根據組織的性質而異。例如腦組織和有血塊的組織，應縮短在二甲苯內留置時間，而肌肉組織和胃腸組織則應稍延長，最好先投入酒精和透明劑等量混合液半小時，再入透明劑，并更換一次透明劑，待組織完全透明后進行浸蠟，一般需要半小時至1小時。透明過久則會導致組織過度硬化變脆。

(5)浸蠟。在整個浸蠟過程中，骨、皮膚和中樞神經系統等致密組織需要較長時間。含血多的組織，肌肉和纖維束在蠟內易過硬而發脆，故浸蠟時間應縮短。浸蠟可以分兩級或三級進行，以排除透明劑，浸蠟時間1-4小時或更長。

(6)包埋。組織包埋時應保持平整，用組織的最大面包理，囊壁、管腔組織還要注意方位，應豎直包埋。病變區域與正常區域分開取材的組織應間隔包埋在一起，以便于對比觀察。零碎組織也應包埋在一起，并使之保持在同一水平面上。

1.2 切片

切片時刀口應鋒利，防止出現刀痕和皺褶現象; 厚度一般為4-6微米，切片的要求是完整、均勻、完整。較難切的部分應放上面，如皮膚的表皮，胃腸適的漿膜等，以減少組織的斷裂現象。展片水溫應在40℃一45℃之間，水溫過高，會引起組織細胞散開，水溫過低，切片皺褶無法攤平。

1.3 染色

H.E染色的關鍵在于深淺適度，對比鮮明，蘇木素內染色時間要根據染料的新舊、切片的類型而定，一般為5- 10min。鹽酸酒精分化后水洗必須充分，一般應流水沖洗10-15分鐘，以防鹽酸殘留份致切片褪色并有促進藍化作用。不可用堿性溶液促進藍化，這樣處理切片易褪色，無法長期保存。最后伊紅復染30秒。染色理想的切片顯微鏡下觀察應是:細胞核與細胞漿應藍紅相映，核漿對比良好，核膜及核染色質顆粒清晰可見。豏

1.4 封片

使用中性樹膠濕封切片，不可干封，以免細胞收縮、龜裂或出現黑色結晶樣小點。豐中性樹膠稀釋度應適當，以均勻充滿蓋玻片不產生氣泡且樹膠不及外溢為佳。

2 教學切片的日常保存及管理

2.1教學切片的日常保存

教學切片制作完畢應記錄制作時間、制作數量、病理診斷名稱，并統一編號后放入切片盒，置于切片柜中。切片柜應保持清涼干燥，避免與化學試劑同放一室。由于(下轉第77頁)(上接第70頁)切片久置褪色，加上實驗課的破損，每次使用后應及時清理，更換褪色及破損切片，并記錄需繼續補充的教學切片種類，及時增補。

2.2切片的教學管理

教學切片主要在平常實習課中使用，其丟失與破損大多也在課堂，因此，切片的課堂管理就顯得尤為重要。筆者所在單位在上課前即向學生介紹完整的切片制作流程，告之典型標本取得的困難，增強學生愛惜切片的意識，同時加強顯微鏡規范操作的培訓，從而有效地減少了切片的損失。

病理教學切片的使用者主要是二年級的醫學生，其制作從標本從取材到封固都有十分嚴格的要求。每一項處理都直接影響切片質量，而教學切片的質量又直接影響到整個病理學的教學質量和水平。應把好每一關，加強學習，通過實踐不斷探索總結、積累經驗，以更好地為教學服務。