結核病診斷技術

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2009.20.046

我國結核病疫情:我國屬于全球結核病高負擔國家之一，結核病的患病人數在世界各國中居于第2位。疫情嚴峻的原因與臨床診斷技術和新藥研制滯后、防治不力、結核桿菌與人類免疫缺陷病毒(HIV)雙重感染以及耐藥結核病人數的急劇增加等有關。目前診斷肺結核的主要方法是痰涂片染色鏡檢，結合X線胸片檢查，繼以結核分枝桿菌培養確認。但是，涂片檢查敏感性差，分離培養結核桿菌時間過長，X線檢查又往往缺乏特異性，用于基因診斷技術的PCR尚處于發展階段。因此，建立敏感、特異、快速、低成本的快速檢測方法十分重要。現對結核病的快速診斷技術概況加以綜述。

結明實驗:結明實驗(MycoDot)是國內外使用較早、較普遍的結核抗體快速檢測試驗，即將脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)作為抗原固定于在電泳梳上，再將此附有抗原的電泳梳置于稀釋的血清或全血中浸泡，標本中如有LAM抗體，則與梳上LAM抗原相結合，浸入顯色液后，抗體金顆粒便會特異性地聚集在抗原抗體復合物上，在梳上附著抗原處形成紅色圓形斑點，即為陽性。結核菌細胞壁成分中含有阿拉伯甘露糖，因此只有當患者患活動性結核病時，才會有陽性反應。健康人、既往感染者(結素試驗陽性)以及卡介苗接種者都顯示為陰性。在入組3個國家1602例患者的臨床試驗中，結明試驗的總敏感性為70.2%，特異性為95.1%。在這一方法中，標本采集方便，方法簡單、快速、可靠，可用肉眼判斷實驗結果，無需特殊實驗儀器，便于基層醫院推廣。

結核病診斷試劑盒:結核病診斷試劑盒(FD)采用結核分枝桿菌的特異性抗原——脂阿拉伯甘露糖(LAM)為固相抗原，并以金溶膠為標記。其原理是將結核桿菌的特異性抗原LAM固定在特制載體上，當被檢血清或全血中含有結核桿菌的特異性抗體(LAM-IgG)時，便與載體上的抗原結合為抗原復合物，這種復合物可與標記有“雙抗”的金溶膠試劑發生作用，形成紫紅色斑點。因此，試驗結果呈紫紅色斑點者為陽性，無紫紅色斑點者為陰性。既往研究表明，FD檢測陽性率為80%，特異性為94%，檢測結果不受卡介苗接種的影響。FD檢測簡便、快速，且不需要專門技術和特殊設備，是用于結核病的診斷和鑒別診斷的一項輔助診斷方法，適用于在基層醫療單位推廣使用。

斑點金標免疫滲濾法:斑點金標免疫滲濾法(DIGFA)是將固相人型結核分支桿菌蛋白衍生物(PPD)純化抗原包被在斑點反應板上，其與體液中的抗結核分支桿菌抗體(PPD-IgG)形成復合物，膠體金標記抗人IgG或海藻硫酸多糖(SPA)與復合物結合，形成肉眼可見的紅色斑點。既往研究表明，斑點金標免疫滲濾法檢測各類血清678份，敏感性為76.8%，特異性為91.5%。但受結核菌或其他分枝桿菌感染及卡介苗接種等影響，也可出現交叉反應。這種方法具有簡便、快速，結果易于判讀，無需特殊儀器，能進行單個標本的測定，受檢患者可及時得到結果等特點，適用于基層醫院診斷結核菌感染和進行流行病學調查。

結核桿菌抗體膠體金法診斷試劑盒:結核桿菌抗體膠體金法診斷(TB-DOT)試劑盒是用現代生物技術提純結核分枝桿菌特異性外膜抗原，應用斑點金免疫滲濾試驗(DIGFA)原理，并用定量標準色譜卡技術制作的TB-DOT試劑盒，用于活動性肺內外結核病IgG、IgM、IgA的檢測。研究顯示的靈敏性和特異性分別為85.5%和93.6%，與國內學者報道靈敏性73.8%、特異性94.1%基本一致，因此，TB-DOT試劑盒是一種靈敏性和特異性較高的試劑盒。

免疫膠體金標記技術:免疫膠體金標記技術(ICS)具有快速、簡便、準確的特點，有助于提高診斷，適用于活動性結核病的診斷。這種方法可用于涂片培養陰性但有臨床癥狀的患者，鑒別肺癌與其他肺部疾患，或動態觀察結核病化療效果。但是，目前該方法檢測成本較高，尚難用于結核病初篩及在基層醫療單位普及應用。