白藜蘆醇對(duì)自然衰老小鼠H₂O₂含量和ATP酶活力影響的實(shí)驗(yàn)研究

[摘要]目的:研究白藜蘆醇是否對(duì)自然衰老小鼠的老化具有延緩作用。方法:健康4月齡昆明種小鼠12只，作為青年組對(duì)照組(A);健康18月齡昆明種小鼠60只，隨機(jī)分為五組:老年空白對(duì)照組(B)，老年陽性對(duì)照組(C)，老年絞股藍(lán)皂苷對(duì)照組(D)，老年白藜蘆醇高劑量組(E)，老年白藜蘆醇低劑量組(F)，以灌胃方式給藥，用生化分析方法測(cè)定過氧化氫(H₂O₂)含量和三磷酸腺苷(adenosine-triphosphate，ATP)酶活力。結(jié)果:與青年對(duì)照組比較，其余五個(gè)老年組小鼠血清中H₂O₂含量均增高，皮膚組織中ATP酶的活力均明顯減弱。結(jié)論:白藜蘆醇對(duì)自然衰老小鼠的老化具有延緩作用。

[關(guān)鍵詞]白藜蘆醇;自然衰老;自由基;過氧化氫;ATP酶

[中圖分類號(hào)]Q813.1[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1008-6455(2010)01-0063-02

Effect of resveratrol on content of H₂O₂ and activities of ATP enzyme of naturally senile mice

WANG Pei， WU Jing-dong，ZHANG Hui-shu，LI Dong-zi

(Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，Liaoning，China)

Abstract:ObjectiveTo study if resveratrol have function on delaying naturally senile mice or not.Methods12 kind of Kunming age in four-month female small mice contrast a group as youth(A)，60 kind of Kunming age in eighteen- month female small mice at random divides 5 group， 12 for a group: Old age blank group(B)，old age masculine group(C)，old age gypenoside group(D)， resveratrol high dose(E)，resveratrol low dose(F). Filling the stomach with medicine. Determine the content of H₂O₂ and the activities of ATP enzyme by the biochemistry analysis method.ResultsCompares with the youth group， the other five old age group can enhance the content of H₂O₂ in the serum and weaken the activities of ATP enzyme in the skin organization.ConclusionResveratrol have function on delaying naturally senile mice.

Key words:resveratrol;natural aging;free radical;H₂O₂;adenosine-triphosphate enzyme

白藜蘆醇(resveratro1，Res)， 又叫三羥基芪，是一種植物雌激素，已發(fā)現(xiàn)其存在于70余種植物及其制品中。大量的研究表明[1]，白藜蘆醇具有多方面有益于人類健康的重要生物藥理活性，包括抗腫瘤、抗心血管疾病、治療突變、抗氧化、抗菌抗炎、保肝、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及雌激素調(diào)節(jié)等重要的生理功能。本實(shí)驗(yàn)探索一定劑量的白藜蘆醇是否具有對(duì)自然衰老小鼠具有延緩衰老的作用，為研究和開發(fā)延緩衰老的藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1資料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組方法:選用健康4月齡昆明種小鼠12只，作為青年對(duì)照組(A);健康18月齡昆明種小鼠60只，作為老年組，再隨機(jī)分為五組:老年空白對(duì)照組(B)，老年陽性對(duì)照組(C)，老年絞股藍(lán)皂苷對(duì)照組(D)，老年白藜蘆醇高劑量組(E)，老年白藜蘆醇低劑量組(F)，每組12只，每組小鼠均為雌性，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物及給藥方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)藥物:市售白藜蘆醇(購于成都曼斯特生物科技有限公司)，臨用前以0.5%羧甲基纖維素(沈陽纖維素廠)作為溶媒，置4℃冰箱備用。絞股藍(lán)皂苷(購自成都曼斯特生物科技有限公司)。維生素EC顆粒(國藥準(zhǔn)字H11022348北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司)。0.9%生理鹽水(國藥準(zhǔn)字h22022056吉林省廣春藥業(yè)有限公司)。

1.2.2 給藥方法:A組:給予生理鹽水(20ml/kg);B組:給予生理鹽水(20ml/kg);C組:給予維生素EC混懸液(30mg/kg);D組:給予絞股藍(lán)皂苷混懸液30mg/kg;E組:給予白藜蘆醇混懸液30mg/kg;F組:給予白藜蘆醇混懸液10mg/kg。以上操作每日一次，共進(jìn)行30天。每隔7天稱量小鼠體重，隨其體重加減灌胃量。

1.3 取材方法:第31天采用眼眶取血法，離心制備血清。取小鼠下腹部的全層皮膚(不含皮下脂肪)，制備成組織勻漿。

1.4 主要試劑和儀器:H₂O₂、ATP酶活性測(cè)定試劑盒，均購于南京建成生物工程研究所。各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定均按照試劑盒說明書進(jìn)行測(cè)定，采用化學(xué)比色法。

BLG10電子秤、DY89-Ⅱ電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)、AnKeTDL-5-A離心機(jī)、水浴箱、酶標(biāo)儀(美國)等設(shè)備及其它實(shí)驗(yàn)器材均由遼寧中醫(yī)學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室提供。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有數(shù)據(jù)均通過SPSS11.5 版本軟件進(jìn)行處理，各組實(shí)驗(yàn)參數(shù)以x±s表示，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果與分析

與青年對(duì)照組比較，五個(gè)老年各組小鼠血清中H₂O₂含量顯著增高，分別是P﹤0.01，P﹤0.05， P﹤0.05， P﹤0.05， P﹤0.01;與老年空白組比較，老年陽性對(duì)照組、絞股藍(lán)皂苷組、白藜蘆醇高劑量組和白藜蘆醇低劑量組均可降低H₂O₂含量，分別是P﹤0.01，P﹤0.01， P﹤0.01，P﹤0.05，以上均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(見表1)。

與青年對(duì)照組比較，其余五個(gè)老年各組小鼠皮膚組織中ATP酶的活力均明顯減弱，分別是P﹤0.01，P﹤0.05，P﹤0.05，P﹤0.05，P﹤0.01;與老年空白組比較，其他用藥老年組均可提高ATP酶的活力，分別是P﹤0.01，P﹤0.05，P﹤0.01，P﹤0.05，以上均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(見表2)。

3討論

衰老是任何生物生命過程的必然規(guī)律，是“在成熟后已高度分化的系統(tǒng)走向組織紊亂以及趨異分化的過程” [2]。現(xiàn)已明確皮膚衰老是內(nèi)源性因素和外源性因素共同作用的結(jié)果，其中內(nèi)源性衰老(自然衰老)是不可避免的漸進(jìn)過程，外源性衰老(如風(fēng)、光、熱、化學(xué)物質(zhì)等)中以光衰老最為明顯。本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)主要針對(duì)皮膚的內(nèi)源性衰老進(jìn)行研究。

本實(shí)驗(yàn)所用白藜蘆醇為虎杖提取物，虎杖具有清熱解毒、祛風(fēng)利濕的功用，《醫(yī)林纂要》記載其“堅(jiān)腎、強(qiáng)陽益精、壯筋骨、增氣力”，其作為我國傳統(tǒng)的天然中草藥，含有多種藥理活性成分，有擴(kuò)張血管、抑制血小板、降血脂、抗氧化等廣泛的作用[3]。白藜蘆醇最初是作為葡萄屬植物的抗逆物質(zhì)-- 植物抗毒素(phytoalexin)而被發(fā)現(xiàn)的，繼而又先后在百合科、豆科、棕櫚科等多種植物中發(fā)現(xiàn)，但其含量在虎杖中較高[4]。1989 年WHO證實(shí)優(yōu)質(zhì)葡萄酒中所含白藜蘆醇大大降低了法國人心臟病發(fā)病率和死亡率(即法國悖論現(xiàn)象)[5]。白藜蘆醇自被發(fā)現(xiàn)以來，一直受到醫(yī)藥學(xué)界的重視，它被美國專著《抗衰老圣典》一書列為“100種最熱門有效抗衰老物質(zhì)”之一[6]。大量的研究表明[7]，白藜蘆醇具有多方面有益于人類健康的重要生物藥理活性，包括抗菌消炎、抗氧化、生長抑制活性、抗血小板聚集、激素調(diào)節(jié)和抗腫瘤活性等重要的生理功能。近來還發(fā)現(xiàn)其具有免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗突變、輻射防護(hù) 、抗艾滋病活性、預(yù)防急性傳染性非典型肺炎(非典) 等藥用價(jià)值。

本實(shí)驗(yàn)的理論依據(jù)是自由基學(xué)說，此學(xué)說是Denham harman[8]于1956年提出的，該理論認(rèn)為生物體內(nèi)具有一整套產(chǎn)生和清除自由基的平衡體系，隨著年齡的增長發(fā)生退行性變化，致使體內(nèi)的自由基物質(zhì)過量。體內(nèi)產(chǎn)生自由基的過程就是氧化還原反應(yīng)過程， 其產(chǎn)生過程是體內(nèi)有機(jī)物在微量元素的催化下， 被氧化形成游離基， 包括過氧化氫和羥自由基等。自由基具有極強(qiáng)的氧化能力，可使生物膜中不飽和脂類發(fā)生過氧化，形成過氧化脂質(zhì)。HUNG等研究證實(shí)白藜蘆醇的抗氧化作用強(qiáng)于維生素E及維生素C，并具有較強(qiáng)的清除自由基和抗脂質(zhì)過氧化效應(yīng)[9]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，白藜蘆醇能夠清除自由基，減少皮膚組織中H202含量和提高ATP酶的活力，推測(cè)和證明了其在延緩皮膚自然衰老方面的作用。因此在開發(fā)成具有抗氧化作用的保健食品方面有較大的空間和市場(chǎng)潛力。

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[收稿日期]2009-09-19 [修回日期]2009-12-08

編輯/張惠娟