不同方法提取銀杏葉活性物質抑菌效果的比較研究

摘要：本試驗采取常壓煎煮、高壓煎煮、乙醇冷浸漬、微波提取四種方法提取銀杏葉活性物質，并選擇金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及枯草芽孢桿菌三種菌檢測銀杏葉提取物的抑菌效果。結果表明，銀杏葉提取物具有一定的抑菌效果，且其抑菌效果隨提取方式、菌種和濃度的不同而有差異，溫度對其抑菌效果沒有影響，銀杏葉活性物質顯示出良好的熱穩定性。

關鍵詞：銀杏葉提取物；抑菌效果；抑菌圈

中圖分類號：R282.710.5 文獻標識號：A 文章編號：1001－4942(2010)04－0062－03

銀杏又名公孫樹、白果樹、鴨腳子樹、靈眼等，為銀杏科銀杏屬落葉高大喬木。銀杏中含有多種化學成分，其中具有藥用價值的成分主要為黃酮類化合物、萜內酯類化合物和酚酸類化合物，另外還含有豐富的蛋白質、多種維生素、胡蘿卜素和鈣、磷、硼、硒等營養保健成分。到目前為止已知其化學成分的銀杏葉提取物多達160余種，主要有黃酮類、萜類、酚類、生物堿、聚異戊烯、奎寧酸、亞油酸、蟒草酸、抗壞血酸、a－已烯醛、白果醇、白果酮等。此外，利用銀杏葉研制的銀杏葉飲料、銀杏桃果汁、銀杏啤酒、銀杏茶等保健品已在市場上流通，并取得了良好效果。

近年來，銀杏葉提取物(以下簡稱EGb)的藥用和臨床治療價值，推動了國內外醫學界對它的深入研究。隨著化學檢測手段及臨床應用的深入研究，在銀杏葉的制劑工藝、成分分析、藥理作用、毒理實驗和臨床試驗等方面國內外都有許多報道。但對于銀杏葉提取物抗菌作用的研究，迄今鮮有報道。本文詳細介紹了采用不同提取方法提取的銀杏葉活性物質對常見菌的抑制作用，闡明了其抗菌特性，以期為銀杏葉提取物在醫藥、食品等抗菌防腐方面的開發利用提供參考。

1 試驗方法

1.1 銀杏葉活性物質的提取

1.1.1 銀杏葉的處理洗滌去雜：除去銀杏葉中的雜物和泥沙，洗滌時間不宜過長，以免有效成分流失，一般控制在3～5 min；洗凈后瀝干除去部分水分，使銀杏葉含水60％～70％，含水量過多會降低浸提溶劑的濃度，影響浸提效果。切碎：切成寬約0.5 cm的細絲較合適，過粗不利于有效成分的浸提，過細影響實驗操作。

1.1.2 提取方法常壓煎煮法：將20 g銀杏葉、200 ml水加入錐形瓶中，100℃水浴3.0 h；高壓煎煮法：將20 g銀杏葉、200 ml水加入錐形瓶中，121℃濕熱、0.105 MPa壓力煎煮3.0 h；乙醇冷浸漬法：將20 g銀杏葉、200 ml酒精加入錐形瓶中，室溫放置，浸漬抽提3次，每次5天，最后將過濾后回收的乙醇合并收集；微波提取法：將20 g銀杏葉、200 ml水放入錐形瓶中，火力1.0，每次30 s，加熱14次，共計7 min。

1.1.3 除雜將上述藥液分別裝入10 ml離心管中，離心5 min，轉速為4000 r/min，收集三種水提液及醇提液。

1.1.4 濃縮常壓濃縮法得提取原液(每1 ml提取液對應1g銀杏葉)，密閉儲藏備用。

1.2 抑菌效果的檢驗

菌懸液的制備：分別取試驗菌種(見表1)，接種于斜面培養基試管中，37℃培養18～20 h活化后，加入2ml無菌水，充分振蕩得菌懸液。將采用不同方法提取的EGb原液分別制成8倍、4倍、

2 倍稀釋液和濃縮一倍的提取液。

抑菌圈的測定(濾紙片法)：將濾紙制成直徑為6 mm的圓片，干熱滅菌備用；用無菌移液槍吸取各自適宜濃度的菌液0.2 ml滴在平皿中央，然后將45℃左右的牛肉膏蛋白胨培養基傾注入平皿，充分混勻待凝；用無菌鑷子夾取上述濾紙片分別蘸取不同濃度的EGb提取液，然后放入平皿培養基中，每皿3片，用無菌水及乙醇作對照。37℃培養18～20 h。量取濾紙片周圍抑菌圈直徑，比較不同提取方法、不同濃度的EGb提取物對不同菌種的抑菌效果。

1.3 溫度對EGb抑菌效果的影響

取用4種方法提取的EGb原液于121℃濕熱滅菌，以金黃色葡萄球菌作為試驗菌，試驗方法同

1.2 測定濾紙片的抑菌圈的大小。

2 結果與分析

2.1 不同提取方法、不同濃度的EGb對不同菌種的抑菌效果

從表1可以看出，銀杏葉提取物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌均有一定的抑制作用，但是由于提取方法、提取物濃度以及菌種種類的不同，EGb所顯示出來的抑菌效果也各不相同。

以各種提取方法的1倍濃縮液對于大腸桿菌的影響為例(圖1)，可以看出用乙醇冷浸漬法提取的銀杏葉活性物質抑菌效果最明顯，微波提取法次之，以后依次為高壓煎煮法和常壓煎煮法。其它方法提取的不同濃縮液對其它菌種也顯示出相似的結果，未一一列出。其原因可能是乙醇冷浸漬法比較適合于銀杏葉活性物質的提取，能較大量地提取出銀杏葉內含有的抑菌物質，也可能是由于乙醇本身具有較強的抑菌效果而強化了整個提取物的抑菌效果。

銀杏葉提取物對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑制效果普遍強于對枯草芽孢桿菌的抑制效果。這或許是因為枯草芽孢桿菌具有芽孢，抵抗不良環境的能力較強。

在相同的時間內，EGb溶液的濃度越高，抑菌效果越明顯，而且同一濃度的EGb溶液作用時間越長，抑菌效果越明顯，并且對革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌的抑菌效果都很強烈。

2.2 溫度對EGb抑菌效果的影響

從表2可以看出，EGb溶液在高溫滅菌后，對金黃色葡萄球菌的抑制效果與高溫滅菌前相比無明顯差別，說明溫度對EGb的抑菌能力影響不大，EGb具有良好的熱穩定性。

3 結論與討論

3.1 本試驗結果表明，EGb對革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌都有良好的抑制生長作用。提取方法和提取物濃度均影響EGb的抑菌效果，以乙醇冷浸法效果最好，EGb濃度越高，作用時間越長，抑菌效果越明顯。試驗中還可以看出，EGb具有良好的熱穩定性，這可以為以后的應用提供比較好的條件。

3.2 銀杏活性物質的提取一般采用水和不同濃度的乙醇作溶媒。影響水煎煮提取的主要因素有加水量、煎煮時間、煎煮次數。在銀杏制劑生產過程中，需要盡可能多地從有效部位提取出有效成分及輔助成分，而使無效成分和組織物質等不被浸出。

3.3 銀杏葉提取物作為藥品、食品及化妝品添加劑已經被國內外廣泛采用，同時，它的天然抗菌與防腐方面的重要作用將使銀杏葉開發利用具有更加廣闊的前景。