HPLC法測定藏藥榜嘎中阿替新\\異葉烏頭堿的含量

【摘要】目的:測定四批藏藥榜嘎中的阿替新、異葉烏頭堿含量。方法:采用HPLC法，用DiamonsilC18柱(5μm，150mm×4.6mm)，以甲醇-水-氯仿-三乙胺(70:30:2:0.1)洗脫，流速1ml/min，柱溫30℃，檢測波長230nm。結(jié)果:在1micro;g～5micro;g間，阿替新與異葉烏頭堿均呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.238%，RSD值1.477%。結(jié)論:該方法簡便、準確、重復性好，可用于藏藥榜嘎中阿替新、異葉烏頭堿的含量測定。

【關(guān)鍵詞】榜嘎;阿替新;異葉烏頭堿;HPLC

【中圖分類號】R29【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)10-188-2

榜嘎是常用藏藥，為毛茛科植物船盔烏頭Aconitum naviculare(Brahl.)Stapf及甘青烏頭Aconitum tanguticum(Maxim.)的全草。主要分布于西藏南部，陜西秦嶺、甘肅南部、青海東部、四川西部，云南北部等地也有出產(chǎn)。功效清熱解毒利濕，主治肝炎、膽囊炎、肺炎、感冒發(fā)熱、咽喉炎、胃腸炎等。榜嘎主要含有生物堿類成分，本研究測定了其中的阿替新、異葉烏頭堿含量。

1實驗部分

1.1儀器、試藥和藥品

Thermo高效液相色譜儀(Finigan公司)，PDA檢測器，甲醇為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純，阿替新、異葉烏頭堿對照品由SIGMA公司提供。榜嘎藥材四批，分別購自四川省阿壩州馬爾康、紅原、黑水及阿壩四縣。

1.2色譜條件[1]和系統(tǒng)適用性試驗

(A)

(B)

(C)

圖1.阿替新和異葉烏頭堿對照品溶液色譜圖(A)，榜嘎樣品溶液色譜圖(B)，和空白溶液色譜圖(C)，(1.阿替新，2.異葉烏頭堿)

用Diamonsil C18柱(5μm，150mm×4.6mm)，以甲醇-水-氯仿-三乙胺(70:30:2:0.1)洗脫，流速1ml/min，柱溫30℃，檢測波長230nm，按阿替新計，色譜柱理論塔板數(shù)不低于6×103，阿替新峰和異葉烏頭堿峰與其他峰達到基線分離，峰形對稱。色譜圖見圖1。

1.3溶液的制備

1.3.1對照品溶液的制備精密稱取阿替新、異葉烏頭堿適量，加二氯甲烷制成濃度為1mg/ml的溶液，精密吸取1ml，置于尖底具塞試管中，精密加入0.01mol/l硫酸溶液1ml，渦旋2min，離心5min，取上清液，即得。

1.3.2樣品溶液的制備取粉末10g，加入25%氨水6ml潤濕，再加入乙醚50ml，放置過夜，過濾，藥渣用乙醚洗滌三次，每次15ml，合并乙醚液，在60℃以下?lián)]干，殘渣用二氯甲烷溶解并定量轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中。色譜檢測前按1.3.1處理此溶液并進樣。

1.4方法學考察

1.4.1線性范圍精密吸取上述阿替新和異葉烏頭堿對照品溶液2、4、6、8、10micro;l注入液相色譜儀，觀察色譜圖，記錄其峰面積，并以峰面積A為縱坐標，進樣量C(micro;g)為橫坐標，進行回歸，阿替新進樣量在1micro;g～5micro;g間線性關(guān)系良好，A=38345C-1354.1(r=0.9999);異葉烏頭堿進樣量在1micro;g～5micro;g間線性關(guān)系良好，A=32069C-39.6(r=0.9999)。

1.4.2精密度試驗精密吸取阿替新對照品溶液5micro;l，連續(xù)進樣6次，阿替新峰面積的RSD為0.21%，表明儀器精密度良好。

1.4.3重復性試驗取榜嘎粉末5份，分別按1.3.2項下方法制成樣品溶液，以1.2項下色譜條件，精密吸取5micro;l注入液相色譜儀，記錄峰面積，計算阿替新含量，結(jié)果阿替新平均含量0.106%，RSD為1.45%，表明該方法重復性良好。

1.4.4穩(wěn)定性試驗取樣品溶液，分別在0、1、2、4、6、8小時，精密吸取5micro;l注入液相色譜儀，記錄峰面積，結(jié)果RSD為1.73%，表明樣品溶液在8小時內(nèi)穩(wěn)定。

1.4.5加樣回收率試驗稱取已知含量的榜嘎粉末5份，每份約0.1g，精密稱定，分別加入一定量的對照品，按上述重

(下轉(zhuǎn)第190頁)

(上接第188頁)

復性方法測定阿替新含量，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

1.5樣品測定

按1.3.2項下方法制備樣品溶液后，按上述重復性項下方法測定阿替新、異葉烏頭堿含量，結(jié)果見表2。

2討論與結(jié)論

由于關(guān)于阿替新與異葉烏頭堿的研究較少，缺少參考文獻，本實驗參照其同屬植物烏頭的主要成分烏頭堿的樣品處理方法及色譜條件[1，2]，得到了較好的提取率和色譜分離。紫外光譜吸收圖中顯示該兩種化合物的最大吸收均接近230nm，故選擇230nm為檢測波長。測量結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的榜嘎藥材中阿替新與異葉烏頭堿含量差別不大。榜嘎藥材化學成分和含量測定的研究較少，由于資源有限，本實驗只測定了其中的兩種成分，建議今后加強該方面研究。

參考文獻

[1] 朱俊訪，李卓亞，沈志濱，等.HPLC法測定不同地區(qū)制川烏中新烏頭堿、次烏頭堿及烏頭堿的含量[J].食品與藥品，2008，10(9):44-46.

[2] 張聿梅，魯靜，蔣渝，等.川烏和制川烏中單酯及雙酯型生物堿成分的含量測定[J].藥物分析雜志.2005，25(7):807-812.