艾篙揮發油體內外抑菌作用的實驗研究

【摘要】目的:對艾篙揮發油進行體外抑菌作用和體內保護作用進行的實驗研究，檢測艾篙揮發油體內外抑菌效果。方法:并以紅霉素為對照采用瓊脂培養基(Mue-H inton)二倍稀釋法對艾篙揮發油的最低抑菌濃度(MIC)檢測;通過對感染小鼠進行試驗性治療來檢測致死保護率。結果:艾篙揮發油對實驗菌的MIC90值范圍0.78-25μL/mL;對對金葡萄球菌感染小鼠致死保護率20%-50%，對綠膿桿菌感染小鼠死亡的保護率30%-40%，對大腸桿菌感染小鼠死亡的保護率20%-40%。結論:艾篙揮發油體外對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌具有抑菌作用，其抑菌作用優于或等同于紅霉素;體內對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌感染 小鼠具有較好的保護作用。

【關鍵詞】艾篙揮發油;最低抑菌濃度;體外抑菌;體內保護

【中圖分類號】R-3【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)10-042-2

菊科多年生植物艾篙Artemisiaar gyile vel.et Vant.的干燥葉作為中草藥，可以就地取材，有較高的藥用價值和悠久的應用歷史。傳統藥性理論認為艾篙具有理氣血、逐寒濕、溫經血、安胎、殺蟲止癢等作用。現代醫學的藥理研究表明，艾篙揮發油是一種廣譜的抗菌抗病毒藥物，它對細菌和病毒具有抑制和殺傷作用，對呼吸系統疾病有一定的防治作用。艾篙味芳香、苦燥辛散，能理氣血、溫經脈、逐寒濕、止冷痛，為婦科良藥。可用于治療院腹冷痛，經寒不調，宮冷不孕等癥;炒炭止血，可用于治療虛寒性月經過多，崩漏帶下，妊娠胎漏;艾篙搗絨，制成艾條、艾柱，外灸能散寒止痛，溫煦氣血;煎湯外洗可治濕瘡疥癬，祛濕止癢。艾篙化學成分含揮發油0.45%-1.00%，是艾篙抗菌作用的重要成分。油中主要為:一松油醇、8-按葉精、α一側柏酮(α- thujone)、α一水芹烯(α-pHellandrene)，β-T香烯(β-caryopHyllene)，茨烯、樟腦、藏茵香酮、反式葦醇(transcarveol)。為了將艾篙更方便、科學地應用于臨床，我們提取艾篙揮發油，進行了體外抑菌作用和體內保護作用的研究。

1實驗材料

1.1藥物

艾篙購于安徽中醫學院第一附屬醫院藥房;紅霉素片，石藥集團歐意藥業有限公司出品，批號50404010。

1.2菌種

金黃色葡萄球菌10株(含標準菌株ATCC25923)、大腸桿菌10株(含標準菌株ATCC25922)、綠膿桿菌10株，由本院微生物教研室提供。

1.3培養基

瓊脂培養基(Mue-H inton)，上海東海醫化試劑公司生產，批號0010320。

1.4動物

昆明種小鼠，體重(20士2)g，清潔級，安徽醫科大學動物中心提供。

1.5艾篙揮發油制備

取艾篙適量，裝入5000mL的蒸溜瓶中，加水浸泡1h ，加水量不得超過3500mL。按《中國藥典》2000版(一部)附錄XD水蒸氣蒸餾法提取揮發油。餾出物含有少量水。加氯化鈉少許，置冰箱冷藏24h，使水、油兩相分層，再用分液濾斗進行分離，濾得綠色透明的、具有濃郁芳香氣味的液體，即艾篙揮發油。

2方法與結果

2.1體外抑菌作用

2.1.1供試菌液的制備將各供試菌種分別接種于供試培養基中，37℃培養24h，選用標準菌落接種于液體培養基中培養6h，調整菌液濃度為108CFU/mL，備用。

2.1.2含藥物培養基的制備將試驗品及對照品分別加入培養基中做2倍稀釋，艾篙揮發油(μL/ml)和紅霉素(μg/mL)最終濃度依次為200，100，50，25，12.5， 6.25，3.12，1.56，0.78，同時設空白對照。

2.1.3供試菌接種用接種環分別取供試菌液一環(含菌量約為104 CFU)，分別接種于含艾篙揮發油的培養基上和含紅霉素的培養基上，37℃培養24h，觀察試驗結果。艾篙揮發油對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和綠膿桿菌有顯著的抑菌作用;其抑制金黃色葡萄球菌的效果等同于紅霉素，抑制大腸桿菌、綠膿桿菌的效果大大優于紅霉素。結果見表1。

表1 艾篙揮發油和紅霉素對實驗菌MIC測定結果物(N=10)

實驗組MIC紅霉素(μg/mL)艾篙揮發油(μL/mL)

大腸桿菌MIC5012.500.78

MIC902000.78

金黃色葡萄球菌MIC500.780.78

MIC900.780.78

綠膿球菌MIC501000.312

MIC9010025

注:MIC50，MIC90分別為抑制50%，90%所試菌株的MIC值

2.2體內保護試驗

2.2.1菌液及藥液稀釋將3種菌的原菌液用5%高活性干酵母液稀釋(增強細菌的毒力)至所需濃度，測出試驗菌株的100%最小致死量(MLD)。藥液以2%吐溫-80為溶劑，艾篙揮發油稀釋濃度為120，80，40μg/mL3種溶液。

表2 艾篙揮發油對金葡萄球菌感染小鼠死亡的保護作用

組別劑量感染菌量死亡數死亡率(%)死亡保護率(%)

Ml/(kg.d)MLD/CFU

治療組67.5×10855050★★

47.5×10855050★★

27.5×10888020★★

對照組7.5×108101000

注:與對照組比較，**P<0.01

2.2.2對感染動物保護試驗選健康小鼠40只，隨機分為3個藥物治療組和1個溶劑對照組，每組10只。以上各組分別腹腔注射0.5mL含1個MLD菌量致小鼠感染，治療組腹腔注射0.5ml，3種濃度艾篙揮發油，對照組腹腔注射0.5mL 2%吐溫-80。各組小鼠每天注射2次，連續用藥3d，繼續觀察至5d。記錄感染后5d內各組小鼠的存活數和死亡數，計算死亡保護率，進行X2檢驗。死亡保護率(%)=(對照組死亡率一藥物組死亡率)×100%。結果見表2—表4

表3 艾篙揮發油對綠膿桿菌感染小鼠死亡的保護作用

組別劑量感染菌量死亡數死亡率(%)死亡保護率(%)

ML/(kg.d)MLD/CFU

治療組64×10966040★★

44×10977030★★

24×10977030★★

對照組4×109101000

注:與對照組比較，**P<0.01

表4 艾篙揮發油對大腸桿菌感染小鼠死亡的保護作用

組別劑量感染菌量死亡數死亡率(%)死亡保護率(%)

ML/(kg.d)MLD/CFU

治療組62×10966040★★

42×10988020★★

22×109101000★★

對照組2×109101000

3討論

在體外抑菌實驗中，我們采用Mue-H inton瓊脂培養基是因為Mue-H inton瓊脂對中藥抑制作用的檢測靈敏度高，比傳統使用的營養瓊脂抑菌效果提高2-16倍。在考察藥物對體內感染動物保護作用的很多文獻中，大部分采用單一的動物模型，但本實驗采用3種動物模型進行試驗，以便更好地考察艾篙揮發油對體內感染動物保護作用。

研究表明，艾篙對幾種常見食品微生物進行抑菌試驗，對細菌的抑制效果較好，尤其對金黃色葡萄球菌的效果最好，對綠膿桿菌的效果一般，對大腸桿菌的效果次之。此外，提取液MIC50，在酸性環境中(pH3-6)作用較好，但熱穩定性不好，經90℃以上，15min處理其抑菌作用不明顯。艾篙具有藥源豐富、價格低廉、不良反應小、安全性好的特點而被廣泛使用，但艾篙新劑型的研發比較滯后，仍沿用湯劑、灸劑等傳統的劑型。我們本著研發艾篙新劑型、方便臨床用藥為目的設計了本課題。本實驗證明了艾篙揮發油體內外的抑菌作用，這對下一步將艾篙揮發油研制成為一種用于預防和治療創傷感染外用藥(噴霧劑)有著重要意義。

參考文獻

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