化學發光法測定甲胎蛋白的臨床應用評價

【摘要】目的:評價化學發光法(ECLIA)測定甲胎蛋白(AFP)的臨床應用價值。方法:在羅氏cobas e411分析儀上用化學發光分析法對AFP進行測定，同時用酶聯免疫吸附法(ELISA)進行AFP的測定。結果:兩法呈正相關，都有較好的重復性，但ECLIA法CV值明顯小于酶聯免疫吸附法，ECLIA比(ELISA)具有更寬的檢測范圍。結論:應用ECLIA檢測AFP，具有靈敏度高、重復性好、穩定性強等優點，是目前測定AFP較好的方法，適用于臨床對AFP進行檢測，有著良好的發展前景。

【關鍵詞】甲胎蛋白;化學發光法;酶聯免疫吸附

【中圖分類號】R453【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)10-118-1

甲胎蛋白(AFP)是胚胎發育早期的一種主要血清蛋白，分子量約70000，含糖40g/L，由96%蛋白質和4%的碳水化合物組成，正常人血清中AFP含量在2-8g/L之間，AFP正常值一般低于25g/L，AFP是診斷肝癌最特異的標志物，是目前最好的可實際用于早期診斷原發性肝癌的指標，可在癥狀出現前6-12 mo作出診斷。臨床上檢測AFP的方法主要有放射免疫法(RIA)、酶免疫法(EIA)、酶聯免疫法(ELISA)、熒光免疫法(FIA)、化學發光分析法(ECLIA)等，本文采用化學發光法分析法(ECLIA)和酶聯免疫吸附法(ELISA)對42份血清進行AFP測定，現報告如下。

1材料與方法

1.1一般資料本院2009年1月-12月收治的42例肝癌患者，經影像學、組織病理學檢查確診為原發性肝癌，抽取肝癌住院患者晨血5ml，分離血清。將其中15份血清混合后分裝(用于精密度試驗)，置于-2O℃冰箱保存，集中測試。

1.2儀器與試劑ECLIA法采用羅氏公司生產的cobas e411型化學發光分析儀，測定試劑及配套試劑，ELISA法定量試劑盒為鄭州博賽生物工程有限責任公司生產。

1.3方法

1.3.1化學發光免疫分析法按儀器操作規程和試劑說明書進行測定。

1.3.2ELISA按操作規程進行測定。

1.4統計學分析用SPSSI3.0進行數據整理和統計分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1相關性分析用上述兩種方法對42份受檢血清進行AFP定量分析，測定結果作相關性分析，結果表明，兩種方法差異無顯著性(P>0.05)，直線回歸方程為:YECLIA=0.9463XELISA+0.9174，r=0.9528，兩法呈正相關。

2.2精密度試驗[1]按NCCLS評價方案，用ECLIA分析法和ELISA法分別對取低、中、高三個不同濃度的血清AFP連續測定20次，再每天測1次，共測20d，結果顯示ECLIA分析法的CV值明顯小于ELISA法，結果見表1

表1 兩種方法測定AFP精密度對比

樣本標本次數ECLIA法次數ELISA法

批內CV% 批間CV%批內CV% 批間CV%

1

2

3低值203.1 2.4206.5 5.8

中值202.4 1.3205.6 5.3

高值201.9 0.9205.3 4.9

2.3線性范圍評價取高值混合血清作6點倍比稀釋，各復測3次，以原倍血清測定值為標準按稀釋倍數算得其理論值，與兩種方法實際測定值比較進行線性分析，ECLIA分析法回歸方程為:Y=0.9675X+1.0526，r=0.9846;ELISA法回歸方程為:Y=0.7347X+28.5903，r=0.9243。ECLIA分析法在950ng/ml范圍內線性良好;ELISA在560ng/L范圍內線性良好。ECLIA分析法比ELISA法具有更寬的檢測范圍。

2.4靈敏度測試重復測定無標準品樣本，n=20，平均數加2個標準差所對應的濃度為最低檢測值。ECLIA測得AFP靈敏度為1.28ng/mL。

3討論

上世紀70年代中期Arakawe首先報道ECLIA，發展至今已經成為一種成熟的、先進的超微量活性物質檢測技術，應用范圍廣泛，是目前發展和推廣應用最快的免疫分析方法，也是目前最先進的標記免疫測定技術，主要具有靈敏度高、特異性強、試劑價格低廉、方法快速、檢測范圍寬、操作簡單自動化程度高等優點。高靈敏度的化學發光法已被廣大研究人員所認可，正逐漸替代傳統的生物檢測技術。另外，ELISA法定量AFP試劑盒的線性及標準問題是測定結果準確性的關鍵，ELISA法的“鉤狀效應”，即測定顯色隨著待測標本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后，測定吸光度隨抗原濃度的增加而開始下降至不顯色，容易造成假陰性結果。電化學發光免疫法檢測甲胎蛋白的原理為雙抗體夾心法，由于電化學發光采用磁性微珠包被技術，磁珠體積小，可以吸附更多的抗原或抗體，同時磁珠的核心是鐵，在磁場中很快下沉，因此容易進行洗滌和固相載體分離。發光信號檢測的寬線性加上獨特的標記物本身循環發光，使電化學發光檢測的線性范圍更寬[2]。由于非同位素金屬三聯吡啶釕在自然環境下非常穩定，因此用它標記的試劑也非常穩定。總之，應用ECLIA分析法檢測AFP，具有靈敏度高、重復性好、穩定性好等優點，有著良好的發展前景。

參考文獻

[1] 楊昌國等.精密度評價和方法比較中NCCLS評價方案的應用[J].臨床檢驗雜志，1999，17(1):47.

[2] 梁崴.電化學發光與酶聯免疫檢測血清甲胎蛋白的比較[J].中華醫學檢驗雜志，2001，24(4):25.