柑橘全爪螨對4種殺螨劑的抗性監(jiān)測及增效作用

摘 要：為探明近年來柑橘全爪螨田間種群對常用殺螨劑抗性的變化趨勢，采用玻片浸漬法于2008—2009)年連續(xù)2a監(jiān)測了柑橘全爪螨重慶種群對甲氰菊酯、噠螨酮、阿維菌素和甲維鹽4種常用殺螨劑的抗性，同時測定了磷酸三苯酯(TPP)、順丁烯二酸二乙酯(DEM)和增效醚(PBO)的增效作用。結(jié)果表明，柑橘全爪螨對甲氰菊酯的抗性上升速度較快，抗性增長倍數(shù)達(dá)5.1倍，噠螨酮次之，抗性增長倍數(shù)為2.2倍。柑橘全爪螨對阿維菌素的抗性兩年間變化很小，相反對甲維鹽的敏感性有所升高。增效作用研究表明，TPP對甲氰菊酯、阿維菌素和甲維鹽的增效倍數(shù)分別為3.2倍、2.0倍和3.8倍。DEM對噠螨酮和甲維鹽的增效倍數(shù)分別為3.3倍和2.6倍。PBO對甲氰菊酯、阿維菌素、噠螨酮和甲維鹽的增效倍數(shù)分別為2.7倍、1.7倍、2.4倍和7.2倍。而TPP對噠螨酮以及DEM對甲氰菊酯和阿維菌素均未表現(xiàn)出明顯的增效作用。

關(guān)鍵詞：柑橘全爪螨；殺螨劑；增效劑；抗性

中圖分類號：S666 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1009—9980(2010)04—570—05

柑橘全爪螨Panonychus citri(McGregor)又名柑橘紅蜘蛛、瘤皮紅蜘蛛，屬蛛形綱、蜱螨亞綱、前氣門目、葉螨科、全爪螨屬，是一種世界性的多食性害螨，除危害柑橘外，還可以危害蘋果、梨以及豆類等多種植物。該螨主要以成螨、若螨和幼螨刺吸葉片、綠色嫩梢及果實表皮，造成被害葉片呈現(xiàn)許多灰白色小斑點，失去光澤，甚至大量落葉、落果，嚴(yán)重影響樹勢和產(chǎn)量。柑橘全爪螨1a發(fā)生數(shù)代，其發(fā)生代數(shù)隨發(fā)生地溫度高低而變化，每年有2個明顯的發(fā)生高峰期，即4月中旬至6月中旬和9月中旬至11月中旬。柑橘全爪螨與柑橘始葉螨、柑橘銹螨并稱為橘園三大害螨。

目前，對柑橘全爪螨的防治仍以化學(xué)防治為主。由于該螨較其他柑橘害蟲活動范圍小，發(fā)育周期短，世代多，產(chǎn)卵量大且卵突變率高，在一定范圍內(nèi)受藥劑選擇淘汰作用機會相對較多，抗性因子積累相對較快，造成該螨抗藥性產(chǎn)生極為迅速。研究表明，柑橘全爪螨已經(jīng)對有機磷類、有機氯類、菊酯類等多種農(nóng)藥產(chǎn)生了不同程度的抗藥性，且抗藥性問題愈演愈烈。近年來，有關(guān)柑橘全爪螨的抗性監(jiān)測在國內(nèi)外逐漸受到重視。為及時掌握田間柑橘全爪螨對常用殺螨劑的抗藥性水平及動態(tài)，指導(dǎo)柑橘害螨化學(xué)防治，作者于2008—2009年連續(xù)2a監(jiān)測了重慶北碚地區(qū)柑橘全爪螨對近年來生產(chǎn)中常用的4種代表性殺螨劑(甲氰菊酯、噠螨酮、阿維菌素和甲維鹽)的抗性變化情況，同時測定了磷酸三苯酯(TPP)、順丁烯二酸L酯(DEM)和增效醚(PBO)3種增效劑對上述4種殺螨劑的增效作用，旨在探討柑橘全爪螨對殺螨劑敏感性下降的生物化學(xué)機理，為殺螨劑及增效劑的合理使用提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 供試螨源

供試柑橘全爪螨分別于2008年11月和2009年4月采自重慶北碚中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院柑橘研究所柑橘苗圃園內(nèi)。園內(nèi)近年來對柑橘全爪螨的防治主要以3月中旬施用齊螨墩素，9月底施用甲氰菊酯及12月初施用甲氰菊酯和噠螨酮混劑為主，園內(nèi)施藥水平一致。

1.2 供試藥劑

甲氰菊酯(Fenpropathrin，92％原藥)；噠螨酮(Pyridaben，95.2％原藥)；阿維菌素(Abamectin，93％原藥)；甲維鹽(Emamectinbenzoate，49.5％原藥)。增效醚(PBO，化學(xué)純，Sigma公司)；順丁烯二酸二乙酯(DEM，化學(xué)純)；磷酸三苯酯(TPP，化學(xué)純)。上述藥劑除PBO外，其余均由四川省農(nóng)藥檢定所提供。

1.3 生物測定

生物測定參照聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)推薦的害螨生物測定的標(biāo)準(zhǔn)方法一玻片浸漬法并加以改進。將雙面膠帶剪成2mm長貼在載玻片的一端，用毛筆挑選健康雌成螨，將其背部黏在載玻片的雙面膠帶上，每塊載玻片40頭。通過預(yù)備試驗，在柑橘全爪螨死亡率15％～90％內(nèi)按等比或等差級數(shù)將藥劑稀釋成5個濃度，將玻片帶螨的一端浸入藥液中，輕輕搖動5s后取出，迅速用吸水紙吸干螨體及其周圍多余的藥液，室溫晾干后置于溫度為(25±1)℃、RH=75％左右的光照培養(yǎng)箱中，24h后于雙筒解剖鏡下觀察死亡螨數(shù)并作記錄。以清水為對照，對照組死亡率在10％以下視為有效試驗，重復(fù)3次。

1.4 增效測定

參照孟和生等㈣的方法，將增效劑(TPP、DEM和PBO)與藥劑原藥按有效成分3:1的比例混合成備用母液，參照1.3中所述的生物測定方法測定混劑對柑橘全爪螨的毒力(增效劑在測定濃度范圍內(nèi)對柑橘全爪螨均無直接殺傷作用)，比較LC⁵⁰值，計算增效比。除甲維鹽增效試螨采于2009年4月外，其余增效試驗使用的柑橘全爪螨采于2008年11月。

1.5 數(shù)據(jù)分析

死亡率用Abbot公式校正，將濃度換算為對數(shù)值，校正死亡率轉(zhuǎn)化為幾率值，擬合毒理回歸方程。數(shù)據(jù)處理使用本研究室開發(fā)的害蟲抗藥性管理系統(tǒng)(IRM)軟件計算致死中濃度LC⁵⁰值。

相對抗性倍數(shù)=2009年測定的LCso值／2008年測定的LC⁵⁰值

增效比(SR)=藥劑的LC⁵⁰值／(藥劑+增效劑的LC⁵⁰值)

2 結(jié)果與分析

2.1 抗性監(jiān)測

2008—2009年連續(xù)2a柑橘全爪螨對4種常用殺螨劑的抗性監(jiān)測結(jié)果見表1。柑橘全爪螨對4種常用殺螨劑抗性發(fā)展的速度由快到慢依次為：甲氰菊酯(菊酯類農(nóng)藥)、噠螨酮(雜環(huán)類農(nóng)藥)、阿維菌素(生物源類農(nóng)藥)及甲維鹽(半合成抗生素類農(nóng)藥)。柑橘全爪螨對甲氰菊酯的相對抗性倍數(shù)2a提高了5.1倍，對噠螨酮的相對抗性倍數(shù)提高了2.2倍。而對阿維菌素的敏感性變化不大，相反對甲維鹽的敏感性卻有所上升。說明柑橘全爪螨不易對阿維菌素及甲維鹽形成抗性，而菊酯類殺螨劑在田間應(yīng)用時應(yīng)加以注意。

2.2 增效作用測定

3種增效劑分別與甲氰菊酯、阿維菌素、噠螨酮和甲維鹽混用對柑橘全爪螨的控制效果見表2。在供試的4種常用殺螨劑中，PBO、DEM和TPP對甲維鹽具有明顯的增效作用。其中，甲維鹽+PBO的LC⁵⁰值為0.0452mg·L^-1，其增效比達(dá)到7.2倍：甲維鹽+TPP的LC⁵⁰值為0.1201mg·L^-1，其增效比為3.8倍；而DEM對甲維鹽的增效比僅為2.6倍。此外，DEM與PBO對噠螨酮有較強的增效作用，其增效比分別為3.3和2.4，而TPP對噠螨酮幾乎沒有增效效果。另外，TPP和PBO對甲氰菊酯亦有較為明顯的增效作用，其增效比分別為3.2和2.7，不過DEM卻無增效作用。供試的3種增效劑對阿維菌素的增效作用不太明顯，其中TPP的增效比最高僅為2.0，其次為PBO，DEM不僅不具增效作用，反而降低了柑橘全爪螨對阿維菌素的敏感性。

3 討論

害螨田間種群抗性監(jiān)測是抗性治理中的一個重要環(huán)節(jié)，通過監(jiān)測，可證明抗藥性、提供早期警告、確定抗藥性現(xiàn)狀及動態(tài)分布，明確應(yīng)當(dāng)受保護的藥劑類別及品種。但是，國內(nèi)各省市對害螨抗藥性的監(jiān)測非常零散且不連續(xù)，加之方法多樣，標(biāo)準(zhǔn)不一，使得各地區(qū)之間、年度之間的資料無法比較，也就很難判斷害螨對殺螨劑的抗藥性發(fā)展態(tài)勢。同時，由于不同地區(qū)用藥歷史、用藥背景、抗性水平以及殺螨劑對害螨的作用方式和選擇壓力不同，造成其對不同殺螨劑的抗藥性發(fā)生發(fā)展速度不同，且易與其他藥劑產(chǎn)生交互抗性。而且，近年來亦有報道不同種質(zhì)資源柑橘全爪螨對相同藥劑的敏感性存在一定差異。因此，柑橘全爪螨的抗藥性監(jiān)測不僅要從橘園使用的藥劑種類進行監(jiān)測，還需要從柑橘全爪螨的交互抗性以及寄主種類等角度進行長期連續(xù)監(jiān)測。本研究通過對重慶北碚地區(qū)2008—2009年柑橘全爪螨對4種常用殺螨劑抗性的連續(xù)監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，在短短的半年時間內(nèi)，該地區(qū)柑橘全爪螨對甲氰菊酯的抗性迅速上升(相對抗性倍數(shù)為5.1倍)，這一研究結(jié)果與前人的監(jiān)測結(jié)果類似，再次證明菊酯類農(nóng)藥的使用存在著抗藥性風(fēng)險。此外，重慶北碚地區(qū)的柑橘全爪螨對噠螨酮的敏感性也下降了2.2倍，這與前人的研究結(jié)果一致㈣，表明噠螨酮在田間迅速地產(chǎn)生抗性。然而該地區(qū)的柑橘全爪螨對阿維菌素的敏感性基本維持不變，這可能與阿維菌素這一類生物源農(nóng)藥復(fù)雜的作用機制有關(guān)。而重慶北碚地區(qū)的柑橘全爪螨對甲維鹽敏感性上升這一現(xiàn)象未見前人報導(dǎo)，其原因可能與甲維鹽在該地區(qū)近年來較少使用有關(guān)。通過對本研究采樣地用藥歷史和背景的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該橘園近年來主要使用甲氰菊酯和噠螨酮防治柑橘全爪螨，抗性監(jiān)測結(jié)果亦發(fā)現(xiàn)柑橘全爪螨對這2種藥劑的敏感性下降較快，應(yīng)引起高度重視。

增效劑作為抗性機制的診斷工具，其對殺螨劑的增效作用與防治對象、藥劑類型、害螨對殺螨劑的抗性狀況及主導(dǎo)抗性機制密切相關(guān)。本研究所選用的磷酸三苯酯(TPP)為羧酸酯酶抑制劑，順丁烯二酸二乙酯(DEM)為谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶抑制劑，增效醚(PBO)為多功能氧化酶抑制劑，均是通過抑制害螨體內(nèi)代謝酶系的解毒代謝能力而達(dá)到增效的作用。增效作用測定結(jié)果表明，羧酸酯酶和多功能氧化酶解毒代謝活性的增強可能是柑橘全爪螨對甲氰菊酯和阿維菌素產(chǎn)生抗藥性的主要原因，而谷胱甘肽S一轉(zhuǎn)移酶解毒活性的增強可能是其對噠螨酮產(chǎn)生抗性的主要原因，這與孟和生等，何林等研究害螨抗藥性機制結(jié)果相似。然而柑橘全爪螨對甲維鹽的抗藥性與羧酸酯酶、谷胱甘肽S一轉(zhuǎn)移酶和多功能氧化酶均存在一定關(guān)聯(lián)，其中多功能氧化酶解毒活性的增強可能是主導(dǎo)因素。

對柑橘全爪螨抗性綜合治理，必須了解當(dāng)?shù)馗涕偃︱龑λ巹┑目剐园l(fā)生發(fā)展水平。通過對重慶北碚地區(qū)柑橘全爪螨防治藥劑施用調(diào)查以及2a抗性監(jiān)測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，柑橘全爪螨對近年來常用的甲氰菊酯和噠螨酮的抗藥性發(fā)展速度非常快，且與其他類型農(nóng)藥有明顯的交互抗性，在生產(chǎn)中應(yīng)當(dāng)避免擬除蟲菊酯或噠螨酮等農(nóng)藥的連續(xù)單一使用，可以選擇生物源農(nóng)藥(如阿維菌素)或半合成抗生素類農(nóng)藥(甲維鹽)等新藥進行輪換施用或混用。此外，還要與農(nóng)業(yè)防治、物理防治、生物防治等措施有機結(jié)合起來，在明確抗藥性機制的基礎(chǔ)上，適當(dāng)?shù)氖褂门c抗性機制相應(yīng)的增效劑，才能提高藥劑毒力和防治效果，延長殺螨劑的使用壽命，達(dá)到延緩抗性的目的。