HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地黃連中小檗堿的含量

吳 佳

(長(zhǎng)沙民政職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410004)

HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地黃連中小檗堿的含量

吳 佳

(長(zhǎng)沙民政職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410004)

目的:對(duì)黃連中主要成分進(jìn)行全面分析，評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地和品種的黃連藥材的內(nèi)在質(zhì)量，以開(kāi)發(fā)生藥資源。方法:采用色譜柱為Alltima C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈－0.05mol磷酸二氫鈉水溶液 (磷酸調(diào)PH=2.5)(30∶70)，流速0.8 ml·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng)345 nm。結(jié)果:鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.09～1.81μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.9998，平均回收率為101.20%。結(jié)論:本方法快速簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，重現(xiàn)性好，可用于評(píng)價(jià)黃連的內(nèi)在質(zhì)量。

HPLC;黃連;小檗堿

黃連為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch.、三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云連Coptis teeta Wall.的干燥根莖［1］。味苦、性寒、入心、肝、胃、大腸經(jīng)，功能清熱燥濕、瀉火解毒。是一種很好的清熱解毒消炎藥，具有廣譜抗生素的作用。常用于治療濕熱內(nèi)蒸、痞滿脹悶、煩躁嘔逆、泄瀉痢疾、消渴、暴發(fā)火眼、癰疽腫毒、中耳炎、急性扁桃體炎、百日咳、大葉性肺炎、流行性腦脊髓膜炎、膽囊炎等，且具有抗癌、抗放射及促進(jìn)細(xì)胞代謝的作用［2］。近年來(lái)，黃連復(fù)方中的藥理和臨床研究也有了新的發(fā)現(xiàn)，并擴(kuò)大了應(yīng)用范圍，引起了人們對(duì)黃連的特別關(guān)注。但由于野生資源的過(guò)度采挖及旅游開(kāi)發(fā)等諸多因素，使黃連的自然環(huán)境遭到嚴(yán)重破壞，野生資源狀況堪憂。市場(chǎng)緊缺的需求和隨著國(guó)家對(duì)GAP的倡導(dǎo)，國(guó)家和地方也加大了黃連人工栽培的支持力度，使其黃連的資源狀況得到了緩解。然而人工栽植品種黃連的品質(zhì)如何綜合評(píng)價(jià)?黃連中主要的藥效成分為生物堿，而小檗堿又是黃連中含量最大的生物堿，所以本文以小檗堿的含量做為指標(biāo)，評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地的黃連的內(nèi)在質(zhì)量。

1.儀器與試藥

Agilent 1100高效液相系統(tǒng)，二極管陣列檢測(cè)器，HP工作站;AlltimaC18(4.6 mm ×250 mm，5 μm);KQ－100超聲儀，Sartorius電子天平，乙腈、甲醇為色譜純，水為高純水，其余試劑均為分析純。鹽酸小檗堿購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，純度為99%。黃連藥材采自四川、廣州等地，經(jīng)鑒定為黃連Coptis chinensis的干燥根。

2.方法

2.1 色譜條件

色譜柱為 Alltima C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm)。流動(dòng)相:乙腈－0.05mol磷酸二氫鈉水溶液(磷

酸調(diào) PH=2.5)(30∶70)，柱溫30℃，流速0.8 ml·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng)345 nm。上述色譜條件下，小檗堿與其它各組分離度良好。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

圖1 鹽酸小檗堿對(duì)照品及樣品色譜圖

取對(duì)照品鹽酸小檗堿適量，精密稱(chēng)定為44.56 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，為對(duì)照品溶液。將上述溶液保存于4℃冰箱中，備用。

B 2.3 供試品溶液的制備

取黃連藥材粉末(過(guò)40目篩)約0.1g，精密稱(chēng)定，置于50 mL容量瓶，精密加鹽酸－甲醇(1∶100)溶液約45ml，60℃水浴鍋中溫浸15分鐘，超聲處理30分鐘，冷卻至室溫，加鹽酸－甲醇(1∶100)溶液至刻度。過(guò)濾，取續(xù)濾液過(guò)0.45 μm濾膜，5 L進(jìn)樣。色譜圖見(jiàn)圖1

3.結(jié)果與分析

3.1 線性范圍

精密吸取上述對(duì)照品溶液 1μL、2μL、5μL、10μL、15μL、20μL，進(jìn)樣 HPLC分析。以峰面積積分值對(duì)應(yīng)進(jìn)樣濃度回歸處理，計(jì)算得小檗堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=6223.8 x+104.74，r=0.9998，結(jié)果表明小檗堿在0.09－1.81μg范圍內(nèi)進(jìn)樣濃度與峰面積之間呈良好的線性關(guān)系。

3.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液5 μL于同一天內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄小檗堿的峰面積，得出日內(nèi)精密度為1.55%，見(jiàn)表1;精密吸取同一供試品溶液5 μL連續(xù)進(jìn)樣3 d，每天3次，記錄峰面積，以上小檗堿成分的日間精密度分別為1.43%，見(jiàn)表2。表明儀器較為穩(wěn)定。

表1 日內(nèi)精密度結(jié)果

表2 日間精密度結(jié)果

3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液5 μL分別于配制后的0，2，4，8，12，24，48，72 h 測(cè)定面積積分值，小檗堿穩(wěn)定性的RSD為1.03%，見(jiàn)表3。表明處理后的樣品在3 d內(nèi)穩(wěn)定。

表3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.4 重復(fù)性試驗(yàn)

稱(chēng)取黃連藥材粉末約0.1g共6份，精密稱(chēng)定，按2.3項(xiàng)下制備樣品，測(cè)定小檗堿的平均含量為48.07 mg·g－1，RSD 為 1.41%，見(jiàn)表 4。

表4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.5 加樣回收率

精密稱(chēng)取適量已知含量的黃連藥材粉末(60目)6份，加入一定量的2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按2.3項(xiàng)下制備樣品，測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，小檗堿的加樣回收率為101.20%，RSD為1.24%，見(jiàn)表5。

表5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.6 樣品含量測(cè)定

按樣品溶液制備法制備十批樣品溶液，同法進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算結(jié)果，見(jiàn)表6。

表6 樣品含量測(cè)定結(jié)果

4.討論

由表6可知，十個(gè)產(chǎn)地的黃連中小檗堿的含量為88.01mg/g－43.99mg/g之間，可用來(lái)評(píng)價(jià)黃連質(zhì)量。其中四川洪雅和云南的小檗堿最高，這與傳統(tǒng)的道地藥材雅連、云連質(zhì)量?jī)?yōu)相符，另外湖南邵陽(yáng)產(chǎn)的黃連小檗堿含量也較高，這對(duì)于發(fā)展湖南中藥材事業(yè)，開(kāi)發(fā)優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的中藥資源提供有力依據(jù)。此實(shí)驗(yàn)結(jié)果摸索出的測(cè)量方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，可以很好地評(píng)價(jià)黃連的質(zhì)量，為更好地評(píng)價(jià)黃連藥材的優(yōu)劣提供依據(jù)。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典Ⅰ部［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005.213.

［2］田智勇，李振國(guó).黃連的研究新進(jìn)展［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2004，15(10):704 －706.

R282

A

1671－5136(2010)02－0132－03

2010－04－25

吳 佳 (1982－)，女，湖南沅江人，長(zhǎng)沙民政職業(yè)技術(shù)學(xué)院藝術(shù)學(xué)院輔導(dǎo)員、湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)專(zhuān)業(yè)碩士。