白術中多菌靈農藥殘留量分析*

王 瑤, 富徐燕， 王 霞， 白 巖，楊賽賽， 潘蘭英， 田 薇

(1.浙江農林大學 林業與生物技術學院,浙江 臨安 311300；2.山東省分析測試中心，山東 濟南 250000)

我國是生產和使用化學農藥的大國,長期使用農藥對生態環境及人體健康的危害和影響已經引起人們的高度關注.多菌靈(carbendazol，N-(2-苯并咪唑基)氨基甲酸甲酯)，又叫苯并咪唑 44 號、棉萎靈等，是一種廣譜內吸性殺菌劑，能防治水稻、棉花、蔬菜、果樹等多種作物的多種病害，尤其對子囊菌和半知菌引起的病害有較好的防治效果[1]，但它的殘效期比較長，對哺乳動物有一定的毒性[2].因此,農產品中多菌靈殘留量的測定越來越受到重視.近年來,有關多菌靈在多種作物上的殘留分析方法有許多報道，如熒光分析法[3]、紅外光譜法[4]、氣相色譜法[5]、薄層掃描法[6]及紫外光譜法[7]等,其中:薄層掃描法靈敏度較低、氣相色譜法需要對樣品進行衍生化處理.因此，目前多菌靈的殘留分析一般采用液相色譜法[8-11]，如Amadeo等用液相色譜-質譜(LC-MS)法[12]測定水果蔬菜中多菌靈的殘留;Rodney[13]等用液相色譜法測定藍莓中多菌靈的殘留.有關多菌靈在白術果實上的殘留研究尚未見報道.本文建立了用高效液相色譜法測定白術中多菌靈農藥殘留量的方法.

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Waters 2487型高效液相色譜儀;Waters 515 HPLC Pump;MILLIPORE超純水器;DZG-6050型真空干燥箱;KQ2200DE型數控超聲波清洗器.

石油醚、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺均為分析醇;甲醇為色譜醇.多菌靈對照品(純度≥99%)由農業部環境保護科研檢測所研制.

多菌靈標準溶液的配制：準確量取0.90 mL 100 μg/mL的多菌靈標準品溶液，置于10 mL容量瓶中，以N,N-二甲基甲酰胺溶解并定容至刻度，搖勻后即為標準溶液.

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品的處理

作物白術(Atractylodesmacrocephala)采自浙江農林大學百草園白術基地.農藥為50%的多菌靈可濕性粉劑.原藥劑用水稀釋500倍，于6月5日進行噴灑施藥.噴藥后按一定時間間隔隨機采樣，采樣后立即干燥，貯藏于陰涼處備用.

精確稱取制備好的白術樣品2.000 g于三角瓶中，加入20 mL甲醇和5 mL 0.1 mol/L鹽酸溶液，超聲提取1 h，抽濾，再用15 mL甲醇洗殘渣，合并濾液于平底燒瓶中，在40 ℃水浴減壓濃縮至15～20 mL.將濃縮后的提取液轉移至分液漏斗中，加入10 mL 0.1 mol/L鹽酸溶液和50 mL 0.1 g/L NaCl溶液后，再加入25 mL石油醚劇烈振蕩1 min，靜置分層后棄去石油醚層.下層水相用2 mol/L NaOH溶液調節pH值至6.5，再用二氯甲烷萃取3次，每次15 mL，合并二氯甲烷萃取液于平底燒瓶中,經無水Na2SO4干燥，減壓濃縮至近干，再用氮氣吹干，以N,N-二甲基甲酰胺定容至2 mL,即得樣品溶液.

1.2.2 色譜條件

色譜柱：4.6 mm×150 mm，TRACE EXCEL ODS不銹鋼柱，粒徑5 μm.流動相：V(甲醇)∶V(水)=35∶65,流速1.0 mL/min.檢測波長：281 nm.

2 結果與討論

2.1 樣品提取凈化

多菌靈不溶于水，微溶于常用的有機溶劑.因此,常規方法用有機溶劑很難將多菌靈從白術樣品中提取出來.本實驗利用多菌靈在酸性條件下成鹽而易溶于水的特性，使用甲醇和0.1 mol/L鹽酸溶液，在超聲提取器上超聲1 h，提取白術中殘留的多菌靈，凈化后直接用液相色譜儀檢測.

2.2 流動相選擇

分別吸取對照品和樣品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件檢測，以樣品溶液中多菌靈的分離度作為指標，對所得譜圖進行分析，進而確定合適的流動相.

流動相AV(甲醇)∶V(水)=45∶55，所得多菌靈色譜圖見圖1.結果顯示目標峰基部未完全分離，即峰分離度不夠.

流動相BV(甲醇)∶V(水)=35∶65,所得色譜圖見圖2.圖2顯示多菌靈的峰形及分離度良好.

因此,本實驗選用V(甲醇)∶V(水)=35∶65的流動相系統.

2.3 精密度和重復性測定

精密度實驗 分別取對照品溶液(9 μg/mL)20 μL，重復進樣5次，測定每次進樣后多菌靈的峰面積值,其相對標準偏差(RSD)為2.203%，表明儀器的精密度良好.

圖1 流動相A條件下所得多菌靈色譜圖

圖2 流動相B條件下所得多菌靈色譜圖

重復性實驗 取同一個樣品5份,按供試品制備方法制備后，重復進樣5次，測定每次進樣后多菌靈的峰面積值.結果顯示：其RSD為3.18%，表明重現性良好.

2.4 線性關系和檢出限測定

在上述色譜條件下，測定了HPLC/UV對多菌靈響應的線性關系.檢測線性范圍為0.45～108 ng，其線性回歸方程式為

Y=8 886.7X-8 875.2,R=0.999 7.

表明對照品溶液在0～5.4 μg/mL與峰面積呈良好的線性關系.

2.5 穩定性檢測

取新鮮配制的樣品溶液，分別在0，2，4，8，16，24 h進樣20 μL,測定峰面積，其RSD為3.97%，表明穩定性良好.

2.6 樣品分析及回收率檢測

在上述色譜條件下,準確吸取已制備好的樣品溶液20 μL，注入高相液相色譜儀中，用外標法定量，根據公式計算殘留量,結果見表1.

表1 多菌靈在白術中的含量隨時間呈遞減關系

回收率實驗：精密稱取已知含量的樣品2 g，加入一定量的多菌靈標準品，按上述方法對樣品進行提取、凈化和色譜測定后，計算添加回收率,結果見表2.多菌靈在樣品中的添加回收率在94.57%～103.33%，RSD為3.75%.

3 結 論

1)本文采用反相高效液相色譜法分析白術中的多菌靈殘留，利用高效液相色譜儀的洗脫功能，使殘留的多菌靈在7.5 min時流出，而其他基質共提物則在其前流出，對多菌靈不產生干擾，從而使得定性定量結果更趨準確和真實.檢測線性范圍為0.45～108 ng，加樣回收率在94.57%～103.33%，最低檢出量3.6×10-10g，最低檢測質量濃度為0.022 5 μg/mL.方法定量準確、快捷，操作簡便，靈敏度高，滿足農藥殘留分析的要求.

2)國家生產安全標準規定無公害藥材中多菌靈的殘留量應小于0.5 mg/kg，根據本實驗結果，多菌靈在白術上最后一次施藥到采收應不少于30 d，最好不少于40 d.

表2 多菌靈殘留分析方法的添加回收率

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