PPAR－γ在侵襲性垂體瘤中的表達(dá)

婁金峰 牛光明 婁季宇 蘇芳忠 陶勝忠 張鵬遠(yuǎn) 尹先印 宋 樂(lè)

鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院 1）神經(jīng)外科 2）神經(jīng)內(nèi)科 鄭州 450014

垂體腺瘤在組織學(xué)上是一種顱內(nèi)良性腫瘤，但在生物學(xué)行為上可分為侵襲性生長(zhǎng)和膨脹性生長(zhǎng)兩類(lèi)［1］。過(guò)氧化物酶增值因子激活物受體（PPAR－γ）是核受體超家族的成員之一［2］，可誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞分化，并抑制其惡性增值，可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的凋亡［3］。目前認(rèn)為PPAR－γ在腫瘤的生長(zhǎng)、分化和侵襲中發(fā)揮重要作用。我們采用RT－PCR方法檢測(cè)［4］并探討PPAR－γ表達(dá)在侵襲性垂體腺瘤的發(fā)生與發(fā)展中的作用和作為預(yù)測(cè)生物學(xué)行為標(biāo)志物的價(jià)值，并進(jìn)一步預(yù)測(cè)其在垂體腺瘤預(yù)后和治療中的相關(guān)作用［5］。

1 材料和方法

1.1 材料 標(biāo)本取自2009－01～2010－07鄭州大學(xué)第一、第二附屬醫(yī)院神經(jīng)外科手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)證實(shí)的垂體腺瘤標(biāo)本42例。男22例，女20例。年齡17～63歲，平均45.6歲。依據(jù)內(nèi)分泌學(xué)檢查：無(wú)功能腺瘤9例，生長(zhǎng)激素腺瘤6例，催乳素腺瘤27例。本研究所有標(biāo)本均為首次發(fā)現(xiàn)，未接受放化療，MR掃描均為大腺瘤（直徑＞1cm）且有完整臨床資料并依據(jù)Wilson改良Hardy分類(lèi)系統(tǒng)分級(jí)分期標(biāo)準(zhǔn)分組：侵襲性垂體腺瘤組18例，非侵襲性垂體腺瘤組24例。腫瘤侵襲性的判定標(biāo)準(zhǔn)［6］：（1）Hardy－Knosp［7］分級(jí)分期，III級(jí)或以上及C－E期認(rèn)為是侵襲性垂體腺瘤；（2）鞍底硬膜和鄰近骨質(zhì)經(jīng)病理證實(shí)有腫瘤細(xì)胞；（3）影像學(xué)檢查見(jiàn)腫瘤包繞雙側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈。凡符合上述3項(xiàng)中的任何一項(xiàng)者均歸為侵襲性組，余為陰性對(duì)照組。

1.2 試劑和方法

1.2.1 試劑及儀器來(lái)源：RT－PCR檢測(cè)試劑盒（上海禾尤蒙生物科技有限公司），Taq DNA聚合酶（北京全式金生物技術(shù)有限公司），dNTP（上海普羅麥格公司），DNA Marker I（北京全式金生物技術(shù)有限公司），RT－PCR儀（珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司），引物均為北京賽百盛基因技術(shù)有限公司提供。1.2.2 PPAR－γ表達(dá)活性檢測(cè)：PPAR－γ表達(dá)使用 RT－PCR技術(shù)方法，腫瘤標(biāo)本經(jīng)液氮冷凍處理后，放置－80℃超低溫冰箱保存。按說(shuō)明書(shū)操作，經(jīng)過(guò)RNA提取，然后加入反轉(zhuǎn)錄試劑并PCR擴(kuò)增后，循環(huán)反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5min，94℃30s；55℃35s；72℃90s；27個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min終止反應(yīng)。然后采用2%瓊脂糖凝膠電泳后觀察。

1.2.3 結(jié)果判定：陽(yáng)性結(jié)果判定：PPAR－γ目的基因 RTPCR產(chǎn)物凝膠電泳后在紫外燈下出現(xiàn)476bp的熒光條帶。采用凝膠圖像分析儀對(duì)RT－PCR結(jié)果進(jìn)行圖像分析，Bandscan5.0計(jì)算條帶的積分光密度（Integrated optical density，IA），IA＝平均吸光度＊面積，目的條帶的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度用目的片段（IA）／內(nèi)對(duì)照（IA）的相對(duì)比值來(lái)表示。由內(nèi)參β－actin作陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。兩樣本率的比較用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)、校正的t檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，結(jié)果判斷以α＝0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

在42例垂體腺瘤中，PPAR－γ陽(yáng)性表達(dá)22例，陰性表達(dá)20例，總陽(yáng)性率52.4%。在侵襲組中，PPAR－γ陽(yáng)性表達(dá)13例，陰性表達(dá)5例，陽(yáng)性率72.2%；在非侵襲性組中，PPAR－γ陽(yáng)性表達(dá)9例，陰性表達(dá)15例，陽(yáng)性率37.5%。侵襲組與非侵襲組間在PPAR－γ表達(dá)陽(yáng)性率上有顯著差異（P＝0.044，P＜0.05）。侵襲性垂體腺瘤 PPAR－γ表達(dá)水平為（0.972±0.103），非侵襲性垂體腺瘤 PPAR－γ表達(dá)水平為（0.121±0.013），二者間有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t＝163.61，P＜0.05）。在無(wú)功能腺瘤中，侵襲組（0.937±0.091）與非侵襲組（0.189±0.016）間PPAR－γ基因表達(dá)水平存在顯著差異（t＝88.54，P＜0.05）；在生長(zhǎng)激素腺瘤中，侵襲組（0.413±0.055）與非侵襲組（0.307±0.032）間 PPAR－γ基因表達(dá)水平無(wú)明顯差異（t＝2.45，P＞0.01）；在催乳素腺瘤中，侵襲組（0.930±0.087）與非侵襲組（0.064±0.011）間 PPAR－γ基因表達(dá)水平存在顯著差異（t＝20.56，P＜0.05）。電泳圖片如下（圖1）。

圖1 PPAR－γ在侵襲性垂體腺瘤和非侵襲性垂體腺瘤中的表達(dá) M：Marker I

表1 PPAR－γ基因在垂體腺瘤中的表達(dá)

3 討論

Hardy等依據(jù)蝶鞍及其周?chē)切越Y(jié)構(gòu)和腦組織變化以及CT和MRI結(jié)果將垂體腺瘤分為局限型和侵襲型，即腺瘤直徑＜2.5cm，有分泌癥狀無(wú)視力及視野改變者為局限型；腺瘤直徑＞2.5cm，有鞍底破壞，視力及視野改變以及顱高壓癥狀者為侵襲型［8］。近些年對(duì)侵襲型垂體腺瘤生物學(xué)行為的分子研究日益增多，致力于尋找高增生性、侵襲性的物質(zhì)依據(jù)，以便早期干預(yù)，阻止其臨床復(fù)發(fā)。

有研究證明：垂體腺瘤組織中存在PPAR－γ的高表達(dá)［9-12］，但在侵襲性垂體腺瘤與非侵襲性垂體腺瘤之間PPAR－γ的分布是否存在差異，國(guó)內(nèi)外相關(guān)的報(bào)道大部分是基于蛋白水平的表達(dá)［13－14］，關(guān)于其分子水平的表達(dá)，報(bào)道較少。本研究發(fā)現(xiàn)，侵襲性腺瘤組的PPAR－γ表達(dá)水平明顯高于非侵襲性腺瘤組，并觀察了在不同性別、年齡、大小的垂體腺瘤中PPAR－γ基因的表達(dá)情況。垂體腺瘤可能通過(guò)某些尚不明確的機(jī)制發(fā)揮促進(jìn)PPAR－γ表達(dá)的作用，從而促進(jìn)了侵襲性腺瘤與非侵襲性腺瘤之間PPAR－γ表達(dá)水平的差異，這方面的研究有待于進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量及更為深入的探討。

本研究還發(fā)現(xiàn)，在無(wú)功能及催乳素性侵襲性垂體腺瘤中PPAR－γ表達(dá)水平明顯高于相應(yīng)非侵襲組腺瘤，其為什么只在這兩種類(lèi)型垂體瘤中高表達(dá)——有待更進(jìn)一步的研究，這樣有可能使得PPAR－γ成為無(wú)功能及催乳素侵襲性垂體腺瘤治療的新靶點(diǎn)。

綜上所述，在侵襲性垂體腺瘤中，PPAR－γ均呈現(xiàn)一定程度的表達(dá)，說(shuō)明其與垂體腺瘤的侵襲性有一定的關(guān)聯(lián)，但對(duì)其作用機(jī)制及生物學(xué)效應(yīng)尚未完全清楚，需要進(jìn)一步探討。

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