CIN宮頸癌高危型HPV感染與外周血染色體相關(guān)性研究

潘玫 雷鈞

(江西省婦幼保健院婦瘤科 江西南昌 330006)

1 資料與方法

1.1 一般資料

CIN患者、宮頸浸潤(rùn)癌患者各20例,年齡20～60歲,病理檢查確診,均未接受放療、化療。

對(duì)照組正常健康女性10例,年齡25～52歲,均無(wú)誘變劑接觸史。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 高危型HPV-DNA檢測(cè) 應(yīng)用第2代的雜交捕獲試驗(yàn)法(Hybrid Capture Ⅱ)HC-2,它是一個(gè)放大的酶標(biāo)板技術(shù),該技術(shù)把核酸信號(hào)擴(kuò)大后利用化學(xué)發(fā)光來(lái)檢測(cè),無(wú)需基因擴(kuò)增,可檢測(cè)出13種高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68),5種低危型HPV(6、11、42、43、45與生殖道疣有關(guān)),有極高敏感性。每例取宮頸外口分泌物,進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng) 采用低葉酸TC199培養(yǎng)基,加5%小牛血清和PHA(植物凝集素,最終濃度為0.lmg/mL),pH值7.4～7.6。每5mL培養(yǎng)液接種用肝素抗凝的靜脈血0.5mL,在37℃條件下培養(yǎng)96h,收獲前加秋水仙素0.8mg,常規(guī)收獲細(xì)胞,制備染色體玻片,進(jìn)行Giemsa染色[2]。

1.2.3 染色體分析 每份標(biāo)本觀察分析50～80個(gè)分散和形態(tài)較好的中期分列相,在油鏡下逐一對(duì)細(xì)胞染色體進(jìn)行觀察及結(jié)構(gòu)檢查,記錄染色體畸變的次數(shù)與類型,計(jì)算染色體的畸變率(CAR)。對(duì)有畸變的染色體可進(jìn)行顯微照相,再進(jìn)行G顯帶分析,染色單體裂隙、斷裂,染色體裂隙、斷裂及斷片等進(jìn)行定位分析。按人類細(xì)胞遺傳學(xué)ISCN(1995)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行核型分析[3]。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)果判斷

染色體畸變率＝(亞二倍體＋超二倍體)/計(jì)數(shù)細(xì)胞×100%;染色體結(jié)構(gòu)畸變標(biāo)準(zhǔn):斷裂,裂隙,斷片,三射體計(jì)1次畸變,某一標(biāo)本畸變率在10%以上為異常。

常見(jiàn)染色體結(jié)構(gòu)異常指染色體模糊零亂,濃淡,長(zhǎng)短不一,個(gè)別染色體部分縱裂,部分裂解為單體衍生染色體,單體斷裂,雙著絲粒染色體,和無(wú)著絲點(diǎn)片段。

HPV感染陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)是1pg HPVDNA/mL(5000拷貝/mL)。

2.2 結(jié)果

(1)CIN、宮頸浸潤(rùn)癌和正常對(duì)照組的染色體畸變率(CAR)分別為8.5%、15%和0,三者之間有顯著性差異(P<0.01)。

(2)CIN、宮頸浸潤(rùn)癌和正常對(duì)照組高危型HPV感染率分別為CINI35%,CINII80.5%,CINIII(CIS)95.6%,宮頸浸潤(rùn)癌97%,正常對(duì)照組27.5%。

(3)宮頸癌患者檢出染色體斷點(diǎn)包括1p22,1q30,1p31,3p10,3p30,1q22,1q25,3q22,3p14,10q22,10q24。CIN檢出率染色體斷點(diǎn)1q23,4p10,正常人群對(duì)照組無(wú)著絲點(diǎn)片段,未發(fā)現(xiàn)明顯的染色體畸變。

3 討論

癌癥發(fā)生的本質(zhì)是由于基因突變導(dǎo)致細(xì)胞無(wú)控制增殖,研究表明染色體畸變與細(xì)胞癌變之間有著密切聯(lián)系,畸變所涉及的染色體部位與癌基因的位點(diǎn)或表達(dá)有關(guān)。HPV-DNA與宿主染色體整合可以導(dǎo)致宿主染色體的斷裂或丟失,發(fā)生染色體單體型畸變,持續(xù)性高危型HPV感染是發(fā)生宮頸病變的必要條件,手術(shù)干預(yù)合并高危型HPV感染的CIN患者,其HPV清除率72%(6個(gè)月內(nèi)),身體自然清除HPV可能原于感染病毒位于細(xì)胞核的染色體外,CINIII及宮頸浸潤(rùn)癌中HPV-DNA常整合于細(xì)胞DNA中,而腫瘤常在抑制基因位點(diǎn)發(fā)生染色體基因缺失。盡管HVP感染在生殖器癌癥的進(jìn)展中起到重要作用,但也涉及其他遺傳或環(huán)境聯(lián)合因素,大量研究發(fā)現(xiàn),宮頸癌和CIN的HPV感染和病變?nèi)旧w數(shù)量異常相關(guān),尤其是高危型HPV感染。本研究取腫瘤患者外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)分析,染色體數(shù)目畸變是反映染色體不穩(wěn)定性的指標(biāo),宮頸癌外周血淋巴細(xì)胞染色體畸變率高于CIN,CIN高于正常健康對(duì)照組(P<0.01)。CIN與對(duì)照組無(wú)顯著性差異。Rao等研究證實(shí)2q33～q37缺失,3q插入和染色體增加是侵潤(rùn)型宮頸的特征性改變,總之利用目前遺傳學(xué)技術(shù)證實(shí)的這些染色體的改變,說(shuō)明癌染色體不穩(wěn)定性與個(gè)體遺傳有關(guān),與個(gè)體腫瘤易感性增加有關(guān)。

[1]Mruty vvvs.Spontancous chromosomal aberrationsin partients with drecancerous and ancerous lesion of thd cerrix urteri[J].cancer Gent Cytogenet,1985,17:247.

[2]劉權(quán)章.人類染色體方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1992:272.

[3]Mitel man F.An International System for Human Cytogenetic Nomeenclature[M].Basel:S.Karger,1995:12.