放療聯(lián)合免疫治療頭頸癌的療效觀察

雷學(xué) 段鵬 畢艷華 趙紅林 秦越亮 郭麗雙

晚期頭頸癌療效較差,隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展,腫瘤免疫治療有了明顯的進(jìn)步,筆者采用細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷(CIK)細(xì)胞聯(lián)合放療治療晚期頭頸癌取得較好療效,報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 38例均為 2006年 1月至 2008年 8月在我院治療的頭頸癌患者,其中男 24例,女 16例;年齡 33～68歲,平均年齡 55歲。所有病例均經(jīng)病理證實(shí),鼻咽癌 13例,喉癌 12例,口咽癌 8例,下咽癌 5例;Ⅲ期 24例,Ⅳ期 14例。隨機(jī)分為放療聯(lián)合免疫治療組(聯(lián)合組)和單純放療組(單放組),每組19例。2組近 1個(gè)月未抗腫瘤治療,3個(gè)月未使用過(guò)免疫增強(qiáng)劑。

1.2 主要試劑 PE標(biāo)記的鼠抗人 CD4、CD8抗體,FITC標(biāo)記的鼠抗人 CD25、CD3抗體,同型對(duì)照分別為 PE標(biāo)記的鼠抗人IgG 1免疫球蛋白,FITC標(biāo)記的鼠抗人IgG 1免疫球蛋白均為美國(guó)公司產(chǎn)品。

1.3 方法

1.3.1 CIK細(xì)胞制備及回輸[1]：抽取外周血 20ml,利用密度梯度離心分離并收集單個(gè)核細(xì)胞,用RPMI-1640完全培養(yǎng)基洗滌 3次,調(diào)整細(xì)胞到 1×106/ml,加入 IFN-γ1 000 U/m l,24 h后加入 rh IL-2 1 000U/ml,anti-CD3McAb 50 ng/ml,孵箱中常規(guī)條件培養(yǎng)。隔天換液,補(bǔ)加 rhIL-2 1 000 U/ml。培養(yǎng) 21 d收集細(xì)胞合格后,回輸細(xì)胞總數(shù)為 1.6×1010,懸浮于含500 g/L人血白蛋白0.9%氯化鈉溶液 250ml內(nèi),分 4次回輸給患者。

1.3.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：靜脈血 2ml,EDTA抗凝。取不同熒光標(biāo)記的單克隆抗體各 20μl,分別加入 100μl抗凝外周血,室溫下孵育 15m in,加入紅細(xì)胞裂解液,PBS洗滌兩次,用流式細(xì)胞儀檢測(cè),Cellquest軟件分析數(shù)據(jù),記錄陽(yáng)性細(xì)胞百分率。

1.3.3 治療方案：?jiǎn)畏沤M和聯(lián)合組放療方案相同,聯(lián)合組在放療開(kāi)始前 1周內(nèi)給予 CIK細(xì)胞回輸。

1.3.4 觀測(cè)指標(biāo)及療效判定：瘤體變化、生存期、外周血淋巴細(xì)胞亞群(CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T)及CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞亞群水平等。腫瘤客觀療效分為完全緩解(CR),部分緩解(PR),輕度緩解(MR),穩(wěn)定(SD),進(jìn)展(PD),總緩解=CR+PR+MR。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用 SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)量資料以±s表示,采用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料采用 χ2檢驗(yàn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 客觀療效 聯(lián)合組緩解率高于單放組(χ2=5.216,P＜0.05)。見(jiàn)表 1。

表 1 2組治療后療效比較 n=19,例

2.2 機(jī)體免疫狀態(tài) 單放組和聯(lián)合組治療后患者細(xì)胞免疫總體水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),但在細(xì)胞水平上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);聯(lián)合組治療后誘導(dǎo)輔助 T細(xì)胞水平(CD3+CD4+T)及細(xì)胞毒性殺傷效應(yīng)細(xì)胞水平(CD3+CD8+T)均較單放組增高(P＜0.05);而單放組抑制性調(diào)節(jié)細(xì)胞水平(CD4+CD25+T)較聯(lián)合組增高明顯(P＜0.05或 ＜0.01),見(jiàn)表 2。

表 2 2組治療后免疫狀態(tài)比較 n=19,±s

表 2 2組治療后免疫狀態(tài)比較 n=19,±s

組別 CD3+T CD3+CD4+T CD3+CD8+T CD4/CD8 CD4+CD25+T聯(lián)合組 67.6±0.4 36.9±0.4 30.7±0.3 1.27±0.02 17.2±0.7單放組 66.6±0.4 35.6±0.4 29.2±0.3 1.22±0.02 19.6±0.9 t值 1.676 2.221 3.126 1.508 2.089 P值 0.102 0.033 0.004 0.140 0.044

2.3 不良反應(yīng) 聯(lián)合組不良反應(yīng)主要是發(fā)熱和類(lèi)流感癥狀,癥狀均較輕,耐受性好,無(wú)因不良反應(yīng)而退出治療者。

3 討論

腫瘤患者體內(nèi)抗原提呈細(xì)胞功能缺陷、腫瘤免疫殺傷細(xì)胞作用一過(guò)性、腫瘤免疫療效低等影響了腫瘤免疫治療。生物治療是通過(guò)誘導(dǎo)機(jī)體主動(dòng)免疫或過(guò)繼性免疫法來(lái)調(diào)整被破壞的機(jī)體與腫瘤之間的平衡,使患者免疫功能得到恢復(fù),增強(qiáng)對(duì)癌癥的防御力。

放療對(duì)頭頸癌療效確切,但長(zhǎng)期生存和生活質(zhì)量改善不能令人滿(mǎn)意,其中一個(gè)原因是患者經(jīng)放療后體內(nèi)免疫系統(tǒng)遭到破壞,自身免疫力下降。CIK細(xì)胞是人外周血單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)體外激活、培養(yǎng)后獲得的一群同時(shí)表達(dá) CD3和 CD56分子的異質(zhì)細(xì)胞,兼具有 T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性和自然殺傷細(xì)胞的非MHC限制性殺瘤優(yōu)點(diǎn)[2]。調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞是存在于正常機(jī)體內(nèi)的一類(lèi)具有獨(dú)特的免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞,在介導(dǎo)機(jī)體腫瘤免疫耐受過(guò)程中起著重要作用[3]。

筆者研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),在放療前給予 CIK過(guò)繼免疫治療后,患者體內(nèi)特異性免疫細(xì)胞水平明顯增高,同時(shí)負(fù)性調(diào)節(jié)因子明顯下降,說(shuō)明經(jīng)過(guò)免疫強(qiáng)化后,體內(nèi)免疫水平處在較高且平穩(wěn)的激活水平,有利于效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮對(duì)放療后殘存的腫瘤細(xì)胞的殺傷作用,提高療效[4]。

1 李翠萍,陳寶安,陳津,等.臍血來(lái)源的 CIK細(xì)胞大容量制備方法的建立.臨床腫瘤學(xué)雜志,2005,17：291-292.

2 吳擘颋,徐建民.CIK細(xì)胞：過(guò)去、現(xiàn)在與將來(lái).中國(guó)臨床醫(yī)學(xué),2006,23：782-784.

3 Mottet C,Golshayan D.CD 4+CD 25+Foxp3+regulatory T cells：from basic research to potential therapeutic use.Swiss Med Wkly,2007,37：625-634.

4 Linn YC,Lau LC,Hui KM.Generation ofcytokine-induced cells from leukaem ic samples with in vitro cytotoxicity againstautologous and allogeneic leukaemic blasts.Br JHaematol,2002,116：78-86.