復(fù)方消經(jīng)痛膠囊對痛經(jīng)模型大鼠血清及子宮組織中 MDA、NO、SOD、GSH-PX的影響

李蘭芳 解麗君 李國風 郝娜 張勤增 盧樹杰 李星 李亞軍

復(fù)方消經(jīng)痛膠囊對痛經(jīng)模型大鼠血清及子宮組織中 MDA、NO、SOD、GSH-PX的影響

李蘭芳 解麗君 李國風 郝娜 張勤增 盧樹杰 李星 李亞軍

目的 探討復(fù)方消經(jīng)痛膠囊對縮宮素所致大鼠痛經(jīng)模型的保護作用。方法 SD大鼠 60只,隨機分為空白組、模型組、復(fù)方消經(jīng)痛膠囊高、中、低(2.0、1.0、0.5 g/kg)和陽性藥對照組(田七痛經(jīng)膠囊,2.0 g/kg)。除正常對照組外,其余各組大鼠連續(xù)皮下注射己烯雌酚 10 d,從注射己烯雌酚的第 4天開始,各組灌胃給藥,模型組灌胃等體積的蒸餾水,連續(xù) 7 d。末次給藥 40min,每只大鼠腹腔注射縮宮素0.2 U,1h后,麻醉大鼠,取血 3ml,分離血清,迅速剝?nèi)∽訉m制備勻漿,分別測定血清和子宮勻漿中一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)與谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)的活性。結(jié)果

復(fù)方消經(jīng)痛膠囊能明顯提高血清和子宮組織勻漿中 SOD、GSH-PX的活性,降低MDA含量;并能提高血清和子宮勻漿中 NO的含量。結(jié)論 復(fù)方消經(jīng)痛膠囊通過增加大鼠血清和子宮組織中 SOD、GSH-PX的活性;提高NO含量,降低MDA含量,調(diào)節(jié)體內(nèi)生物信息失衡,進而緩解痛經(jīng),對大鼠原發(fā)性痛經(jīng)有保護作用。

復(fù)方消經(jīng)痛膠囊;催產(chǎn)素;NO;SOD;MDA;GSH-PX;大鼠;痛經(jīng)

復(fù)方消經(jīng)痛膠囊由黃芪、白芍、人參、熟地、川芎等中藥組成。主要用于治療原發(fā)性和部分原因引起的繼發(fā)性痛經(jīng)。前期研究表明,該膠囊對催產(chǎn)素誘發(fā)的大鼠和小鼠痛經(jīng)模型具有很好的鎮(zhèn)痛作用[1];可明顯抑制大鼠正常離體子宮的收縮頻率、幅度、活動力;能降低由于縮宮素引起的大鼠離體子宮收縮增強作用;能降低在體家兔子宮的收縮頻率、幅度、活動力;同時能對抗縮宮素引起的家兔在體子宮收縮增強作用[2]。為了探討了該藥治療原發(fā)性痛經(jīng)的作用機制,進行了如下實驗研究。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 雌性 SD大鼠 60只,體重 150～180g,由河北醫(yī)科大學動物中心提供,許可證號：SCXK(冀)2003-1-003,合格證編號：706017。

1.2 藥品 復(fù)方消經(jīng)痛膠囊,由河北省醫(yī)學科學院藥物研究室研制(批號：200207102)。內(nèi)容物為棕黑色粉末,每克相當于原生藥 5.74 g。田七痛經(jīng)膠囊,廣州敬修堂(藥業(yè))股份有限公司生產(chǎn)(批號：01220619)?？s宮素針劑,上海子能制藥有限公司生產(chǎn)(批號：010708)。己烯雌酚,天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn)。

1.3 試劑 一氧化氮試劑盒(批號：20070203),由南京建成生物工程研究所提供。谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒(批號：20070612);考馬亮斯蘭蛋白測定試劑盒(批號：20070613);SOD試劑盒(批號：20070321);MDA試劑盒(批號：20070611),均由南京建成生物工程研究所第一分所提供。

1.4 儀器 722分光光度計,上海第二分析儀器廠生產(chǎn);METTLER AE240型電子天平,梅特勒儀器上海有限公司;TDL-5-A型臺式離心機,上海安亭科學儀器廠;CS-6R型低溫離心機,美國貝克曼公司;電動勻漿器,Silont crusher M,德國Heidelph公司。

1.5 實驗方法 將體重 150～180 g雌性 SD大鼠 60只隨機分為 6組,即對照組、模型組、田七痛經(jīng)膠囊組(2.0g/kg)、復(fù)方消經(jīng)痛膠囊高、中、低劑量組(2.0 g/kg、1.0 g/kg、0.5g/kg),每組10只。除對照組外,其余各組大鼠連續(xù)皮下注射己烯雌酚10天(第 1天、第 10天 2天皮下給予 0.8mg/只,第 2天到第 9天給予 0.4mg/只)。在注射己烯雌酚的第 4天開始給藥,各組均灌胃給藥,1次/d,連續(xù) 7 d。模型組和對照組給于等體積的蒸餾水。實驗過程中,所有大鼠自由飲水攝食,實驗開始和結(jié)束各稱量體重 1次。最后 1次灌胃 40min后,每只大鼠腹腔注射縮宮素 0.2U,1 h后,大鼠腹腔注射20%烏拉坦(3.0ml/kg)麻醉后,腹主動脈取血 3m l,制備血清,測定血清中一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量;超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶的活性。迅速剝離子宮,用電子天平精密稱取0.5 g左右,加 0.9%氯化鈉溶液制備成 10%子宮組織勻漿,離心后按試劑盒說明書要求分別測定NO和 MDA含量以及SOD和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)的活性。

2 結(jié)果

2.1 對大鼠血清及子宮組織中SOD活性的影響 與對照組比較,模型組血清和子宮組織勻漿中的 SOD活性降低(P＜0.01),與模型組比較,復(fù)方消經(jīng)痛膠囊高、中、低劑量組均使血清中 SOD的活性顯著升高(P＜0.05),同時使子宮勻漿中SOD的活性明顯升高(P＜0.05),田七痛經(jīng)膠囊能使血清中SOD的活性明顯升高(P＜0.05),也能升高子宮勻漿中 SOD的活性,但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見表 1。

表1 對大鼠血清及子宮勻漿中 SOD活性的影響n=10,±s

表1 對大鼠血清及子宮勻漿中 SOD活性的影響n=10,±s

注：與模型組比較,＊P＜0.05;與對照組比較,#P＜0.01

組別 劑量(g/kg)血清SOD(U/ml)子宮勻漿 SOD(U/mgprot)對照組 - 100±59 74±19模型組 - 157±65# 44±24#田七痛經(jīng)膠囊組 2.0 111±64＊ 62±30高劑量組 0.5 128±56＊ 73±29＊中劑量組 1.0 124±54＊ 72±24＊低級量組 2.0 133±70＊ 73±30＊

2.2 對大鼠血清及子宮組織中 GSH-PX酶活性的影響 與對照組比較,模型組血清和子宮組織中 GSH-PX酶活性降低(P＜0.05或 ＜0.01),與模型組比較,復(fù)方消經(jīng)痛膠囊高、中、低劑量均使大鼠血清中 GSH-PX酶活性顯著升高(P＜0.05),同時使子宮組織中GSH-PX酶活性顯著升高(P＜0.01或＜0.05)。田七痛經(jīng)膠囊亦能使大鼠血清和子宮勻漿中 GSH-PX酶活性顯著升高(P＜0.05或 ＜0.01)。見表 2。

表2 對大鼠血清及子宮勻漿中 GSH-PX活性的影響n=10,±s

表2 對大鼠血清及子宮勻漿中 GSH-PX活性的影響n=10,±s

注：與對照組比較,＊P＜0.01,#P＜0.05;與模型組比較,△P＜0.05,☆P＜0.01

組別 劑量(g/kg)血清GSH-PX(酶活力單位)子宮勻漿 GSH-PX(酶活力單位)對照組 - 874±164 70±16模型組 - 364±120# 55±18＊田七痛經(jīng)膠囊組 2.0 794±221△ 103±42☆高劑量組 0.5 716±302△ 81±21☆中劑量組 1.0 582±110△ 73±10△低級量組 2.0 597±144△ 65±14△

2.3 對痛經(jīng)大鼠血清及子宮組織中 MDA含量的影響 與正常組比較,模型組血清和子宮組織中MDA含量顯著增高(P＜0.05或 ＜0.01),與模型組比較,復(fù)方消經(jīng)痛膠囊高、中、低劑量均使大鼠血清 MDA的含量顯著降低(P＜0.05),同時使子宮組織中 MDA的含量顯著降低(P＜0.05或 ＜0.01)。田七痛經(jīng)膠囊亦能使大鼠血清和子宮勻漿中 MDA的含量顯著升高(P＜0.05或 ＜0.01)。見表 3。

表3 對大鼠血清及子宮勻漿中 MDA含量的影響n=10,±s

表3 對大鼠血清及子宮勻漿中 MDA含量的影響n=10,±s

注：與對照組比較,＊P＜0.01;與模型組比較,#P＜0.05,△P＜0.01

組別 劑量(/g/kg)血清MDA(nmol/m l)子宮勻漿MDA(nmol/mgprot)對照組 - 3.8±1.6 9.6±5.4模型組 - 7.8±1.0＊ 18.5±10.6＊田七痛經(jīng)膠囊組 2.0 5.9±1.5△ 10.6±2.8#高劑量組 2.0 5.9±2.0△ 7.9±2.1#中劑量組 1.0 5.8±1.3△ 7.7±1.4#低劑量組 0.5 5.6±1.7△ 9.7±5.0#

2.4 對痛經(jīng)大鼠血清及子宮組織中 NO含量的影響 與對照組比較,模型組血清和子宮組織中 NO含量顯著降低(P＜0.05),與模型組比較,復(fù)方消經(jīng)痛膠囊高、中、低劑量組血清中NO的含量顯著升高(P＜0.01),高、中劑量組子宮組織中NO的含量明顯升高。田七痛經(jīng)膠囊亦能使大鼠子宮勻漿中NO含量顯著升高(P＜0.05)。見表 4。

表4 對大鼠血清及子宮勻漿中 NO含量的影響n=10,±s

表4 對大鼠血清及子宮勻漿中 NO含量的影響n=10,±s

注：與對照組比較,＊P＜0.05;與模型組比較,#P＜0.05,△P＜0.01

組別 劑量(g/kg)血清NO(μmol/L)子宮勻漿 NO(μmol/gprot)對照組 - 53±20 5.0±3.1模型組 - 33±12＊ 2.5±2.5#田七痛經(jīng)膠囊組 2.0 53±10 3.2±1.2#高劑量組 2.0 132±28△ 5.0±1.2△中劑量組 1.0 76±23△ 5.0±3.8#低劑量組 0.5 62±14△ 3.2±2.8

3 討論

在本實驗中觀察到,由縮宮素造成的痛經(jīng)模型大鼠血清和子宮勻漿中抗氧化酶的活性下降,MDA的含量升高。同時血清和子宮勻漿中 NO的含量均下降。對于這種影響的解釋已有眾多的報道[3-5]。月經(jīng)期間,子宮平滑肌陣發(fā)性的收縮導(dǎo)致肌間血管受壓而出現(xiàn)子宮肌層及內(nèi)膜的暫時缺血,從而形成較多的活性氧(OFR)。正常情況下,細胞內(nèi)有自由基清除劑,使氧自由基轉(zhuǎn)化為過氧化氫,后者通過GSH-PX酶的作用還原為水分子。痛經(jīng)時各種抗氧化酶活性相應(yīng)降低,由此激起自由基的連鎖、增生反應(yīng),形成一系列的脂質(zhì)自由基及其降解產(chǎn)物,從而進一步引起細胞膜的流動性降低,通透性增高,線粒體腫脹,溶酶體破壞及溶酶體酶的釋放,更進一步加重了子宮內(nèi)膜的損傷,使痛經(jīng)發(fā)生并加劇。本實驗結(jié)果表明復(fù)方消經(jīng)痛膠囊可以明顯增強血清中 SOD和GSH-PX酶活性,減少自由基及其降解產(chǎn)物—MDA的含量,消除了機體內(nèi)的過氧化氫及脂質(zhì)過氧化物,阻斷活性氧自由基對機體的進一步損傷,調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜缺血時細胞內(nèi)的氧化應(yīng)激狀態(tài),保護生物膜,包括細胞膜、細胞器膜上多烯脂肪酸、細胞骨架及其他蛋白質(zhì)免受自由基攻擊。從而達到治療或緩解痛經(jīng)的作用。

NO是一種具有多種生物功能的氣體分子,參與痛經(jīng)的發(fā)生過程[6]。NO可通過作用于子宮中左旋精氨酸-NO-環(huán)磷鳥苷(CGMP)系統(tǒng),調(diào)節(jié)子宮收縮性。NO參與外周及中樞水平的痛覺調(diào)制[7],在外周作用于不同的靶細胞,通過NO-CGMP途徑表現(xiàn)為致痛和鎮(zhèn)痛雙重作用,這種雙重作用決定于局部NO的生成量,NO生成減少時可促進傷害性信息傳遞產(chǎn)生疼痛,生成量增多時,則起抑制作用而鎮(zhèn)痛。本研究結(jié)果表明,痛經(jīng)模型大鼠子宮勻漿和外周血液中 NO含量降低,提示痛經(jīng)模型大鼠內(nèi)源性 NO合成和釋放減少,使 NO介導(dǎo)的生物信息傳遞異常,血管活性物質(zhì)調(diào)節(jié)失調(diào),導(dǎo)致內(nèi)皮功能失常,引起疼痛[7]。復(fù)方消經(jīng)痛膠囊使大鼠血液和子宮組織中 NO含量升高,調(diào)節(jié)了內(nèi)皮細胞功能,同時擴張子宮血管平滑肌,擴張血管、改善微循環(huán)的作用,有助于恢復(fù)缺血組織的血液供應(yīng),減輕疼痛癥狀。這可能是復(fù)方消經(jīng)痛膠囊治療痛經(jīng)的機制之一。

1 李國風,李蘭芳,郝娜,等.復(fù)方消經(jīng)痛膠囊鎮(zhèn)痛抗炎作用研究.時針國醫(yī)國藥,2007,18：13-14.

2 李蘭芳,張建新,郝娜,等.復(fù)方消經(jīng)痛膠囊對動物子宮活動的影響.中國中藥雜志,2007,32：843-846.

3 裴培田,姚凝.舒經(jīng)玫瑰膠囊對小鼠原發(fā)性痛經(jīng)血清中谷胱甘肽過氧化物酶及一氧化氮的影響.中國藥物與臨床,2005,5：24-25.

4 徐小娟,金沈銳.不同比例芍藥甘草湯對痛經(jīng)大鼠子宮組織內(nèi)皮素和一氧化氮的影響.中國中醫(yī)藥信息雜志,2004,11：973-974.

5 裴培田,王昕,趙一梅,等.舒經(jīng)玫瑰膠囊對小鼠原發(fā)性痛經(jīng) MDA、Ca2+的影響.中國中醫(yī)藥信息雜志,2003,10：31-32

6 彭芝配,騰久祥,黨海珍,等.九氣拈痛膠囊對催產(chǎn)素所致痛經(jīng)大鼠鎮(zhèn)痛作用機制的研究.湖南中醫(yī)學院學報,2005,25：7-10

7 田令華,王曉民,韓濟生.一氧化氮與痛覺調(diào)制.生理科學進展,1996,27：161-164.

Effects of compound Xiaojingtong capsuleon M DA,NO,SOD,GSH-PX in b lood serum and uterus tissue of rats with dysmenorrhea induced by oxytocin

LILanfang,XIE Lijun,LIGuofeng,etal.Hebei Academy of Medical Sciences,Shijiazhuang 050021,China

Ob jective To investigate the protective effectof com pound Xiaojingtong capsule(CXJTC)on oxytocin-induced dysmenorrhea in rats.M ethods Sixty rats were random ly divided into control group,dysmenorrhea model group,high-dose(2.0g/kg),m idd le-dose(1.0g/kg)and low-dose(0.5g/kg)CXJTC groups,and Tianqi Tongjing capsule(TQTJC)group(2.0g/kg).Diethylstilbestrol was continuously administrated by subcutaneous injection,once a day for 10 days in rats ofallgroups except for the rats in control group.CXJTCwas adm inistrated by intragastric mode for 7 days in rats of all CXJTC groups and distillated water was instead for the rats inmodel group.The administration of oxytocin(0.2U)was carried on in every rat at 40 m in after lastadministration.The ratswere anesthetized atonehourafter administration of oxytocin.The blood was taken and the uterus was dissected and homogenated formeasurement of concentration of NO and MDA,and the activities of SOD and GSH-PX in serum and homogenate of uterus were detected.Results As compared with those inmodel group,the activities of SOD and GSH-PX were obviously increased,and the concentration of NO was increased too,however,the concentration of MDAwas decreased in serum and homogenate of uterus in CXJTC group.Conclusion CXJTC has a protective effecton rats with dysmenorrhea induced by oxytocin,and the effects may be caused by increasing the concentration of NO,and the activities of SOD and GSH-PX,and by decreasing the concentration ofMDA.

compound Xiaojingtong capsule;oxytocin;NO;SOD;MDA;GSH-PX;rats;dysmenorrhea

R 984

A

1002-7386(2010)05-0530-03

項目來源：河北省科學技術(shù)研究與發(fā)展攻關(guān)計劃項目(編號：04276101D-50)

050021 石家莊市,河北省醫(yī)學科學院(李蘭芳、解麗君、李國風、郝娜、張勤增);河北省中藥注射劑工程技術(shù)研究中心(盧樹杰);河北醫(yī)科大學藥學院實習生(李星、李亞軍)

2010-01-13)