胃癌組織中KISS-1和基質金屬蛋白酶-9蛋白的表達*

張延新,劉喜民,陳奎生,杜華貞,張云漢

1)漯河醫學高等專科學校病理學教研室漯河 462002 2)漯河醫學高等專科學校組織胚胎學教研室漯河 462002 3)鄭州大學基礎醫學院病理學教研室;河南省腫瘤病理重點實驗室鄭州 450052

#通訊作者,男,1964年8月生,博士,教授,研究方向:腫瘤病理,E-mail:chenksh2002@yahoo.com.cn

胃癌是消化道最常見的惡性腫瘤,病死率高。研究[1]表明,胃癌的生物學行為與某些分子指標有關。作者運用免疫組織化學SP法檢測了胃癌組織中腫瘤轉移抑制基因KISS-1與基質金屬蛋白酶-9 (MMP-9)蛋白的表達,探討2者在胃癌發生發展及浸潤轉移中的作用。

1 材料與方法

1.1 標本來源 45例胃癌組織標本來自漯河醫學高等專科學校附屬醫院及鄭州大學第一附屬醫院2005年9月至 2007年 9月的存檔蠟塊,均經病理學復查確診。45例中男 34例,女 11例,年齡 36～78歲。胃癌診斷和分級參照全國胃癌協作組病理組規定標準。45例胃癌標本中,按浸潤深度分為淺肌層組(14例)、深肌層組(15例)及外膜組(16例);按有無淋巴結轉移分為轉移組(22例)和無轉移組(23例)。所有患者術前均未接受化療、放療及免疫治療。45例均為胃腺癌,每例標本分別取無壞死癌灶及遠離癌灶的手術殘端組織(正常組織),全部標本均經40 g/L多聚甲醛固定,石蠟包埋,4μm厚連續切片備用。

1.2 2種組織中KISS-1和MMP-9蛋白檢測 羊抗人KISS-1單克隆抗體購自美國DAKO公司,兔抗人MMP-9多克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術有限公司。采用SP法,KISS-1一抗工作濃度為1: 200,MMP-9為即用型工作液,DAB顯色,蘇木素復染。染色步驟嚴格按說明書進行,以PBS代替一抗作為陰性對照,分別用已知結腸和肝臟陽性切片作為KISS-1和MMP-9的陽性對照。結果判定:KISS-1和MMP-9陽性信號定位于胞質,呈棕黃色顆粒,顯色強時為棕褐色。計數不少于 5個高倍視野或1 000個細胞,計算陽性細胞百分率。參照文獻[2-3],根據染色強度及陽性細胞百分率綜合計分。陽性細胞百分率＜10%為 1分,10%～為 2分,＞50%為3分;按染色強度:陰性為0分,淡黃色染色為 1分,中度黃色染色為 2分,棕褐色染色為 3分。以 2者之積計總分,總分 ＜3分為陰性,≥3分為陽性。

1.3 統計學處理 采用SPSS 12.0進行統計學處理。2種組織KISS-1和MMP-9蛋白陽性率的比較采用配對 χ2檢驗,不同病理特征的胃癌組織中KISS-1和MMP-9蛋白陽性率的比較采用χ2檢驗,對胃癌組織中KISS-1和MMP-9蛋白表達的關系行Pearson關聯性分析,檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 2種組織中KISS-1及MMP-9蛋白的表達正常胃黏膜和胃癌組織中KISS-1及MMP-9蛋白的表達見圖1和表1、2。可知,胃癌組織中KISS-1蛋白的表達低于正常胃黏膜,MMP-9蛋白的表達高于正常胃黏膜。不同病理特征的胃癌組織中KISS-1及MMP-9蛋白的表達見表3。

圖1 正常胃黏膜(A)及胃癌組織(B)中K ISS-1和MM P-9蛋白的表達(SP,×400)1:KISS-1蛋白;2:MMP-9蛋白。

表1 正常胃黏膜及胃癌組織中K ISS-1蛋白的表達 例

表2 正常胃黏膜及胃癌組織中MM P-9蛋白的表達

表3 不同病理特征的胃癌組織中K ISS-1和MMP-9蛋白的表達

2.2 胃癌組織中KISS-1蛋白與MMP-9蛋白表達的關聯性分析 見表4。

表4 K ISS-1蛋白與MM P-9蛋白表達的關聯性分析 例

3 討論

KISS-1基因是Lee等于1996年發現的腫瘤轉移抑制基因,與多種腫瘤的浸潤轉移密切相關,部分學者[4]認為 KISS-1同時參與腫瘤的發生發展過程。Kostadima等[5]從272例乳癌組織中提取KISS-1 mRNA,結果顯示在有轉移的乳癌組織中KISS-1表達沉默。該研究結果顯示,KISS-1蛋白在胃癌組織中的表達低于正常胃黏膜;在浸潤淺肌層、深肌層和外膜層胃癌組織中,KISS-1蛋白陽性表達率呈降低趨勢;有淋巴結轉移的胃癌組織中陽性表達率較無淋巴結轉移組降低,表明KISS-1參與胃癌的發生發展及浸潤轉移過程,可能是KISS-1通過信號傳導通路促使細胞內第二信使 1,2-二酰甘油和 1,4,5-三磷酸肌醇產生增多,增加細胞內鈣離子水平,進而抑制腫瘤細胞的增生,誘導腫瘤細胞分化和凋亡,同時誘導腫瘤細胞過度黏附而使其移動能力受抑[6]。

MMP-9是MMPs家族中重要的一員,被激活之后形成Ⅳ型膠原酶,降解、破壞靠近腫瘤表面的細胞外基質,從而促進腫瘤細胞向周圍組織浸潤和轉移[7-8]。該研究結果顯示,MMP-9蛋白在胃癌組織中的表達高于正常胃黏膜;在浸潤淺肌層、深肌層和外膜層癌組織中MMP-9蛋白的陽性表達率呈增高趨勢;有淋巴結轉移的胃癌組織中其陽性表達率高于無淋巴結轉移組,推測MMP-9蛋白表達升高可導致細胞外基質降解增加,進而促使胃癌浸潤轉移的發生。

此外,該研究結果還顯示,胃癌組織中KISS-1與MMP-9蛋白的表達呈負關聯,可能是KISS-1通過調節細胞質內抑制性蛋白IκBα降解胞質中p65/ p50 NF-κB蛋白,使其與MMP-9啟動子的結合降低,進而減少 MMP-9的合成,導致細胞外基質降解減少、腫瘤細胞黏附能力增強及移行能力下降,進而抑制腫瘤細胞的機動性、趨化性和侵襲性[9]。

綜上所述,KISS-1和MMP-9的表達和胃癌的發生發展及浸潤轉移有關,聯合檢測 2者有望用于胃癌的早期診斷和預后判斷。

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