同胞相合移植單個核細胞和CD34+細胞輸入數量與造血重建的關系*

萬鼎銘，索金艷，孫 慧，孫 玲，謝新生，王桂菊，姜中興，袁小庚，成 琳

鄭州大學第一附屬醫院血液科鄭州450052

△男，1963年5月生，博士，主任醫師，教授，研究方向:造血干細胞移植及血液病的基礎與臨床，E-mail:wwddmm@vip.sina.com

近年來外周血造血干細胞移植(peripheral blood stem cell transplantation，PBSCT)已在臨床上廣泛應用，有取代骨髓移植的趨勢。移植后造血重建主要取決于輸入造血干細胞的數量與質量，但迄今為止尚未發現造血干細胞的特異性標志，不能直接對造血干細胞定量，只能用相關間接指標預測造血重建。預示造血重建的主要指標有移植物中單個核細胞(mononuclear cells，MNC)計數、CD34+細胞計數和集落形成單位(colony forming unit，CFU)測定［1-2］。CFU測定耗時較長，且重復性差，因此臨床上多采用輸入MNC和CD34+細胞數量來預測移植后造血重建。現就鄭州大學第一附屬醫院的同胞相合異基因PBSCT 35例的臨床資料進行回顧性分析，探討輸入MNC和CD34+細胞數量與造血重建的相關性。

1 臨床資料

1.1 一般資料 35例均為鄭州大學第一附屬醫院2003年3月至2009年7月住院PBSCT患者，男19例，女16例，年齡6～49歲，中位年齡32歲，其中慢性粒細胞白血病(慢性期)10例，慢性粒細胞白血病急淋變1例，急性淋巴細胞白血病7例(CR1)，急性髄系白血病14例(M12例，M28例，M42例，M52例，均為第1次完全緩解)，高危骨髓增生異常綜合征3例。診斷及療效標準見文獻［3］。

1.2 觀察方法 35例患者行同胞相合異基因PBSCT，均應用改良BU/CY預處理方案［4］。移植前5 d供者開始皮下注射粒細胞集落刺激因子(rhGCSF)5μg·kg－1·d－1，于移植當天使用 COBE Spectra血細胞分離機無菌采集、分離外周血造血干細胞后直接回輸。應用全自動血細胞分析儀進行白細胞計數。同時涂片2張進行分類計數。MNC數量=WBC×MNC%×移植物容積，其中MNC%取2次均值。流式細胞儀檢測CD34+細胞數量。每個受者輸入移植物中MNC數量≥2.0×108kg－1，并根據相應CD34+細胞數量分為A和B組，A組CD34+細胞數量≥2×106kg－1，B組＜2×106kg－1，但＞1×106kg－1。移植后每日查血常規，觀察中性粒細胞和血小板計數情況，連續3 d中性粒細胞計數≥0.5×109L－1及連續7 d不輸血小板的情況下血小板計數≥20×109L－1為造血重建標準。移植后第60天及第100天分別經DNA指紋、ABO血型及性別染色體等證實造血重建成功與否。

1.3 統計學處理 采用SPSS 13.0進行統計分析。對2組造血重建時間進行方差齊性及t檢驗，對2組造血重建成功率行χ2檢驗及確切概率法;MNC和 CD34+細胞數量分布不符合正態分布，2者間相關分析采用Spearman秩相關分析;檢驗水準α=0.05。

1.4 結果 輸入移植物中MNC數量(2.37～13.40)×108kg－1，每例均超過移植閾值2×108kg－1，相應CD34+細胞數量(1.01～15.60)×106kg－1。A組24例，CD34+細胞數量(3.86～15.60)×106kg－1; B組11例，CD34+細胞數量(1.01～1.98)×106kg－1。2組造血重建時間及成功率差異均無統計學意義(表1)。35例輸入MNC數量和CD34+細胞數量間呈正相關關系(rs=0.650，P＜0.001)。

表1 2組造血重建情況的比較

2 討論

PBSCT造血重建成功的關鍵在于輸入的造血干細胞的質量和數量。因此尋求能快速準確判斷移植物中造血干細胞含量的方法有重要臨床意義。目前臨床上廣泛利用輸入移植物中MNC數量和CD34+細胞數量預測外周血移植物中造血干細胞數量及移植后造血重建，在同胞相合PBSCT中以輸入移植物中MNC數量≥(2.0～4.0)×108kg－1、CD34+細胞數量≥(2.0～4.0)×106kg－1作為保證植入成功的閾值。作者的研究結果顯示:在輸入移植物中MNC數量≥2×108kg－1時，CD34+細胞數量≥2×106kg－1組和1×106kg－1≤CD34+細胞數量＜2×106kg－1組均能獲得穩定的造血重建，2組中性粒細胞計數及血小板計數恢復時間差異無統計學意義，說明在MNC計數達到2×108kg－1以上的情況下，只要輸入CD34+細胞數量達到1×106kg－1以上，就能預測移植后穩定造血重建。提示在同胞相合PBSCT中，移植物MNC數量≥2×108kg－1同時CD34+細胞數量≥1×106kg－1與造血重建有良好的相關性，可以作為預測造血重建的有效指標。作者還發現，輸入MNC和CD34+細胞數量之間呈正相關關系，與劉旭輝等［5］的研究結果一致。MNC計數比需要流式細胞儀檢測的CD34+細胞計數穩定性更好，簡便易行，速度快，因此在不能檢測CD34+細胞的醫院，輸入MNC數量可用作移植后造血重建的預測指標。

以往認為CD34是造血干細胞的標志，但目前證實CD34－的造血干細胞才具有完整的造血重建能力，而 CD34－造血干細胞能轉化成 CD34+細胞［6］。MNC成分復雜，其中大部分是CD34－細胞，只包含了少量的CD34+細胞，小鼠MNC起始培養和CD34+細胞起始培養的研究顯示均有體內造血重建能力，且差異無統計學意義。采用處于DNA合成期的MNC計數作為采集物中造血干細胞的質量指標比CD34+細胞計數更快捷，結果更穩定［7］。因此更為準確的造血干細胞標志及預測移植后造血重建的指標仍需進一步探索。

［1］To LB，Haylock DN，Simmons PJ，et al.The biology and clinical uses of blood stem cells［J］.Blood，1997，89(7):2 233

［2］裴仁治，馬俊霞，岑東，等.自體造血干細胞移植治療急性白血病［J］.臨床血液學雜志，1998，11(4):161

［3］張之南.血液病診斷與療效標準［M］.3版.北京:科學出版社，2007.

［4］萬鼎銘，康軼青，孫慧，等.改良Bu/CY預處理方案行異基因造血干細胞移植治療惡性血液病的臨床研究［J］.中國實用內科雜志，2009，29(7):648

［5］劉旭輝，裴仁治，岑東，等.自體外周血干細胞移植物中單個核細胞計數與CD34+細胞的相關性［J］.現代實用醫學，2004，16(12):701

［6］翟瓊莉，劉燕.造血干細胞的兩種形式:CD34+和CD34－［J］.國外醫學:免疫學分冊，2002，25(5):253

［7］王亞平.造血干細胞生物學及其研究方法［M］.北京:科學出版社，2006:97