Rh弱 D、Del的檢測及臨床意義探討

楊 珊,孔慶芳,譚慶芬

(廣西壯族自治區血液中心,廣西 柳州 545005)

Rh血型系統是人類紅細胞血型系統中最為復雜且最具多態性的系統,在臨床的重要性僅次于ABO血型系統,Rh(D)陰性者接受 Rh(D)陽性的血液,可能產生抗 -D導致免疫性輸血反應。因此,正確檢定 Rh(D)陰性個體,排除 Rh弱 D、Del的個體,建立真正的 Rh(D)陰性獻血者庫尤顯重要?，F將我們的檢測結果報道如下:

1 資料與方法

1.1 一般資料 2003年 1月至 2010年 1月我院采用常規血清學方法初篩為 Rh(D)陰性樣本 341例,進一步用間接抗人球蛋白試驗檢測弱 D,應用三氯甲烷/三氯乙烯吸收放散法檢測 Del。302例中144例確證為 Rh(D)陰性者及 16例 Del型進行了Rh系統其他抗原的測定。

1.2 試劑 IgM抗 -D,IgG抗 -D試劑(上海血液生物醫藥有限責任公司,北京金豪制藥有限公司,Biotest),IgM抗 -C、抗 -c、抗 -E、抗 -e試劑(上海血液生物醫藥有限責任公司),三氯甲烷(成都正達化學試劑有限公司),三氯乙烯(廣東光華化學試劑有限公司)。

1.3 方法 Rh(D)陰性篩選及確認:用 3批不同生產廠家、不同批號的單克隆 IgM抗 -D試劑作鹽水法試驗,未出現凝集者用 3批不同生產廠家、不同批號的單克隆 IgG抗 -D試劑作間接抗人球蛋白試驗。出現凝集者判為弱 D,未出現凝集者用 3批不同生產廠家,不同批號的單克隆 IgM抗 -D試劑及 3批不同生產廠家、不同批號的單克隆 IgG抗 -D試劑作三氯甲烷/三氯乙烯吸收放散試驗:將充分洗滌的兩份壓積紅細胞 0.5 ml,1份加入 0.5 ml混合 3批不同生產廠家、不同批號的單克隆 IgM抗 -D試劑(置 4°C孵育 1 h),另 1份加入 0.5 ml混合 3批不同生產廠家、不同批號的單克隆 IgG抗 -D試劑(置 37°C孵育 1 h),每隔 10 min搖勻一次。洗滌吸收抗 -D后的紅細胞 7次,末次洗滌后棄盡上清,加入與之等體積的生理鹽水,再加入與之等量的三氯甲烷/三氯乙烯(1∶1)混合液。加蓋振搖 30 s,顛倒混勻 30 s,開蓋后 37°C水浴 5 min,3 000 r/min離心后取上清液,與 Rh(D)陽性細胞分別在鹽水、抗人球蛋白介質中反應,出現凝集者為 Del型。

2 結 果

初篩為 Rh(D)陰性樣本 341例中,檢出弱 D 23例 ,占 6.7%,Del 16例 ,占 4.7%,確證 Rh(D)陰性302例 ,占 88.6%。

144例確證為 Rh(D)陰性及 16例 Del型個體Rh系統表型分布見表 1。

表1 144例確證為 Rh(D)陰性及 16例Del型個體 Rh系統表型分布[例(%)]

Rh(D)陰性者中 ccee最多,占 57.6%,其次是Ccee,占 27.1%。Del型中 Ccee最多,占 68.8%,其次是 CCee,占 12.5%。

3 討 論

D抗原分陽性和陰性兩大類,陽性中包括正常D與變異 D,變異 D中又包括弱 D和部分 D,而 Del屬弱 D。弱 D型、部份 D型、Del型在初篩時一般為陰性,如果不進一步用間接抗人球蛋白試驗及吸收放散試驗會漏檢。血液中心或血站在建立 Rh(D)陰性稀有血型庫時,采用間接抗人球蛋白試驗篩出弱 D型,但一般不采用吸收放散試驗篩出 Del型。有報道 Del型血液輸給 Rh(D)陰性受血者有可能被免疫產生抗 -D[1-2]。弱 D型、Del型個體作為獻血者,其血液應當作 Rh(D)陽性血使用,而作為受血者,則應視為 Rh(D)陰性而輸注 Rh(D)陰性血液,以確保安全、有效輸血。因此檢測弱 D型、Del型有利于建立真正的 Rh(D)陰性獻血者庫,保障輸血安全。同時有必要為弱 D型、Del型人群建立檔案,并應告之作為受血者輸血時應輸注 Rh(D)陰性血液。

Del型是非常弱的 D抗原,可以在約 30%的 Rh(D)初篩陰性個體中檢出[3],我們從 341例初篩為Rh(D)陰性樣本中檢出 Del型 16例,占 4.7%。國內報道湖北地區占 22.67%[4],海南地區占20.65%[5],安徽地區占 15.6%[6]。我們檢測的結果偏低于所見的報道,可能是我們檢測的數量較少,還有待進一步證實。但從報道中可以看出 Del型分布存在一定的地區差異。

確認部分 D需要一組針對全部 D表位的單抗來檢測,因條件所限,我們僅采用 3批 IgM抗 -D、3批 IgG抗 -D單克隆試劑,假如這些試劑是針對不同的 D表位,其結果僅可提示而不能確定是部分 D。檢測弱 D型、Del型時宜采用不同生產廠家多種抗 D試劑,避免漏檢。

檢出 Rh(D)陰性者中 ccee最多,占 57.6%,其次是 Ccee,占 27.1%。Del型中 Ccee最多,占68.8%,其次是 CCee,占 12.5%。有報道[7]Del型與C抗原相關。Okuda等[8]報道,在日本 Rh(D)陰性供血者中,27.7%存在 RhD基因,同時發現具有RhD基因的 Rh(D)陰性個體表型為 CC或 Cc。在我們的檢測結果中 Del型檢出比例較多者含 CC及Cc抗原,但因檢測數量較少,有待進一步證實。

[1] Wagner T,Kormoczi GF,Buchta C,et al.Anti-D immunization by DEL red blood cells[J].Transfusion,2005,45(4)∶520-526.

[2] Yasuda H,Ohto H,Sakuma S,et al.Secondary anti-D immunization by Del red blood cells[J].Transfusion,2005,45(10)∶1 581-1 584.

[3] 王曉珠,蘭炯采,吳緒華,等.Rh弱 D及 Del樣本的檢測研究[J].中國實驗血液學雜志,2005,13(3)∶509-511.

[4] 沈 鋼,章俊華,張 浩,等.湖北漢族 RhD陰性個體 Rh表型及 RhD基因多態性研究[J].中國輸血雜志,2007,20(4)∶304-306.

[5] 葉建忠,楊向萍,蔡于旭,等.海南漢族 RhD陰性個體 RhD基因研究[J].中國輸血雜志,2005,18(2)∶97-100.

[6] 蔡玲君,丁 權,陳文仙,等.云南地區 RhD陰性個體 RhD基因研究[J].中國輸血雜志,2006,19(6)∶452-453.

[7] 陳善華,丁 琪,楊育紅,等.洛陽地區 RhD陰性無償獻血者表型分布調查[J].中國輸血雜志,2009,22(11)∶921-922.

[8] Okuda h,Kawano M,Iwamoto S,et al.The RhD gene is higly detectable in Rhd-negative Japanese donors[J].J in Invest,1997,100(2)∶373-379.