微柱凝膠法在交叉配血試驗中弱陽性結果的分析

張寶艷

準確的交叉配血是臨床安全輸血的重要保證。以往的鹽水配血法只能檢測出血清中的完全抗體,微柱凝膠技術可檢測出血清中的不完全抗體,有標本用量少、靈敏度高、特異性強、操作簡便、結果可長期保存等優點[1]。由于靈敏度高,因此在配血過程中常出現弱陽性結果,若不能快速作出準確的判斷,則會影響臨床輸血的及時性和安全性。我們將 2008年采用微柱凝膠技術配血過程中遇到的弱陽性結果的判定報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2008年 1月至 12月在本院需要輸血的住院或門診患者 6668例次,均為惡性腫瘤患者。

1.2 材料 血型不完全抗體檢測卡由長春博訊生物技術有限責任公司提供,孵育器、專用離心機由長春博研科學儀器有限責任公司提供,0.9%氯化鈉溶液由中國大塚制藥有限公司提供,低離子溶液由珠海貝索生物技術有限公司提供。

1.3 標本處理 血液標本常規 EDTA抗凝血(抗凝劑與血液比例為 1∶9),血液加入試管后注意及時混勻。離心后與血細胞分離清楚,血漿高度≥1.5cm,不能溶血。

1.4 方法與原理 制備受、供者血漿和 0.5%～0.8%紅細胞懸液,標記配血卡。主側加入供血者紅細胞懸液和受血者血漿各 50μl,次側加入受血者紅細胞懸液和供血者血漿各 50μl,然后在 37℃孵育器中孵育 15m in,再使用專用離心機離心5min,900 r/min,2min,1500 r/min,3min,取出肉眼觀察結果。此方法是通過調節凝膠的濃度來控制凝膠間隙的大小,使其間隙只能允許游離的紅細胞通過,從而使游離的紅細胞和聚集的紅細胞分離。當抗原、抗體反應,抗人球蛋白試驗時,血細胞發生凝集、離心時,凝集塊不能通過凝膠間隙,而留在凝膠孔的上層,呈陽性反應,根據微柱上面的凝塊或顆粒的多少、散布的程度來判斷陽性的強弱,未凝集的血細胞離心時可通過凝膠間隙,而沉積在凝膠孔的底部,則呈陰性反應。

2 結果

在 6668例次微柱凝膠法配血結果中,纖維蛋白含量過高影響判定結果的 58例;冷凝集素影響交叉配血的 5例,這 5例中主、次側微柱均出現不同程度的弱凝集把這些卡放在 37℃孵育器孵育 15min后離心,凝集有不同程度的減弱。對這些病例測定冷凝集素效價均在 1∶512以上,從而證實這 5例交叉配血困難均由于冷凝集素的影響;自身凝集造成微柱次側弱凝集 54例,這些病例主側大多為陰性,而次側均呈現不同程度的弱凝集,凝集顆粒散布在微柱的中下部,而不是在微柱的頂端呈一線狀沉淀,不規則抗體篩查試驗均為陰性,自身對照均出現弱陽性,冷凝集素效價均在 1∶128以下;藥物影響判定結果的 4例,均為次側出現弱陽性;陳舊血標本影響判定結果 10例,均為次側出現弱陽性。

3 討論

纖維蛋白含量過高影響配血結果,是由于患者血液標本抗凝效果不佳,內含不易察覺的纖維蛋白出現細胞凝塊,這種假凝集程度一般較弱,黏附一定量紅細胞的纖維蛋白大多聚集在微柱的最上層,但顏色較淡,而大部分紅細胞則沉積到微柱的底端,這種情況一般不難判斷[2]。因此為了防止血液凝固給試驗帶來不良影響,患者血液抽出后應立即注入抗凝管,并充分搖勻。

冷凝集素綜合征患者應盡量避免輸血,可輸可不輸者盡量不輸,必須輸時,可輸入同型的洗滌紅細胞,并在室溫放置復溫后再輸注,輸時應緩慢,在輸血過程中應密切注意觀察[3]。

自身凝集的患者一般是由于多次輸血的患者和腫瘤患者,54例均為腫瘤患者,其本身易產生高效價的冷凝集素,且紅細胞上 T、Tn類抗原易暴露,纖維蛋白易升高;反復多次輸血的患者由于輸注大量異體血液制品而產生紅細胞及白細胞抗體。這些抗體易吸附在患者的紅細胞上,故主要出現微柱次側的凝集。這類患者應盡量減少輸血,必須輸血時,可輸少量濃縮紅細胞或洗滌紅細胞。洗滌患者紅細胞后重新配血均呈陰性結果。

10例由陳舊血樣造成配血弱陽性的患者均重取血樣,重新配血后均呈陰性。一般陳舊血標本放入 4～10℃冰箱保存后,在體外致敏造成假陽性結果。筆者在工作中還發現快過期的配血卡也容易造成弱陽性結果,應注意辨別,亦應合理調配配血卡,以免造成配血困難。

1 舒象武.應用微柱凝膠抗球蛋白技術進行交叉配血.中國現代醫學雜志,2003,13:116-118.

2 陳靜,馬濤.微柱疑膠技術篩選及鑒定不規則抗體的臨床應用.河北醫藥,2008,30:1233-1234.

3 王靜,沈立松,沈霞.冷凝集素綜合癥引起交叉配血困難 1例報告.臨床輸血與檢驗,2001,3:57.