急性冠狀動脈綜合征患者血清纖維連接蛋白的變化

李鳳,禇俊,徐修才,翟志敏

(1.安徽醫科大學附屬省立醫院、安徽省立醫院,a心內科,b中心實驗室,合肥 230001;2.安徽省心血管病研究所)

急性冠狀動脈綜合征(ACS)是包括不穩定型心絞痛(UAP)、急性心肌梗死(AMI)及心源性猝死在內的一組具有嚴重危害性的冠心病危急癥。許多研究表明冠狀動脈內易損粥樣硬化斑塊破裂以及繼發的血栓形成是 ACS的主要發病機制。傳統的凝血理論認為在血栓形成的過程中,纖維蛋白原(Fg)及血管性假血友病因子(vWF)是血小板血栓形成和增長的兩個主要配體,但近年來不斷有研究表明血清纖維連接蛋白(Fn)也參與血小板的粘附和聚集,參與動脈血栓的形成。本研究擬通過檢測在急性冠脈綜合征患者血清 Fn的水平及變化,旨在進一步探討其在急性冠脈綜合征發病中的作用及其意義。

1 對象和方法

1.1 對象 2008年 4月至 2008年 10月收集在安徽醫科大學附屬省立醫院確診為 ACS的患者 67例,其中 UAP組 17例,男性 13例,女性 4例,平均年齡(66±12)歲,均經冠狀動脈造影證實;AMI組50例 ,男性 36例,女性14例,平均年齡(64 ±11)歲,ACS診斷符合 WHO標準。所有患者均除外肝腎功能障礙、肺栓塞、下肢靜脈血栓形成、免疫系統、血液系統疾病。健康對照組:13例,男 8例,女 5例,平均(62±12)歲,經體檢、常規心電圖等檢查證實為無心血管、肺、腦、肝、腎疾病及糖尿病,代謝內分泌等病,且排除近期或遠期感染,自身免疫性疾病,家族中有腫瘤、高血壓及糖尿病者。

表1 各組的一般資料比較(±s)

表1 各組的一般資料比較(±s)

注:與健康對照組比較,a P＜0.01,b P＜0.05

組別 例數 年齡(歲) 男/女(例) 吸煙(例) 高血壓(例)糖尿病(例)白細胞(×109/L)中性粒細胞(%)健康對照組 13 62±12 8/5 4(31%) 0(0%) 0(0%) 6.3±1.25 63.3±4.7 AMI組 50 64±11 36/14 27(54%) 26(52%) 12(24%) 10.7±4.4a 66.9±17.8 UAP組 17 66±12 13/4 10(59%) 10(59%) 2(12%) 5.9±1.45 61.3±6.7組別 血小板計數(×109/L)三酰甘油(mmol/L)總膽固醇(mmol/L)低密度脂蛋白(mmol/L)高密度脂蛋白(mmol/L)血糖(mmol/L)健康對照組 193.3±76.8 1.09±0.39 4.50±0.69 2.15±0.50 1.37±0.24 4.82±0.45 AMI組 197.7±92.2 1.68±0.89b 4.35±0.90 2.54±0.69 1.09±0.26a 7.6±5.2a UAP組 191.1±66.8 1.81±1.01b 3.87±0.96 2.44±0.68 1.11±0.26b 5.67±2.49

1.2 冠狀動脈造影 病例組住院期間有 47例行冠狀動脈造影與支架置入術,冠狀動脈造影采用 Judkin法,每支血管選擇最佳多體位造影。以國際通用的直徑法由 2名有經驗的醫師對造影結果進行分析。具體方法為冠狀動脈造影示腔徑狹窄≥50%的病變,若左前降支、回旋支或右冠狀動脈中 1支狹窄者為單支病變組;2支有病變者為雙支病變組;3支均有病變者為 3支病變組。對于左主干病變者,無論左前降支或回旋支有無病變,均為雙支病變組;若同時合并右冠狀動脈病變則為 3支病變組。

1.3 標本收集及生化測定 UAP組和 AMI組入院后即刻取外周靜脈血 3 ml,健康對照組次日清晨空腹采集靜脈血 3m l。常溫下靜止 1 h或 4℃冰箱過夜后次日清晨離心,以 1 000 r/min離心 10 min,取上層血清置于 -70℃冰箱保存。采用雙抗體夾心固相酶聯免疫(ELISA)方法檢測血清 Fn的水平,試劑由 Bender Medsystems公司提供,嚴格按照試劑盒說明測定,以酶聯免疫檢測儀在 450 nm波長下測定(BioChem公司 奧地利)。同時收集檢驗科測定的各項項指標數據,包括血常規、凝血常規、血糖以及血脂全套、肝腎功能、心肌酶譜和肌鈣蛋白等(數據由安徽省立醫院檢驗科提供)。

1.4 統計學處理 采用 SPSS 12.0統計軟件包處理。計量資料以±s表示,兩組間比較采用獨立樣本 t檢驗,三組及以上組間比較采用方差分析。計數資料以例(%)表示,各率、例數比較用 χ2檢驗。

2 結果

2.1 基本臨床表現 各組一般臨床特征見表 1。除糖尿病及高血壓患病率與健康對照組不同外,其年齡、性別及吸煙的比例在各組中差異無統計學意義。在一般的生化指標中,AMI組白細胞計數較UAP及正常人顯著增高(P＜0.000);AMI組 TG、FBG水平顯著高于健康對照組(P＜0.01),AMI及UAP組 HDL-C顯著低于對照組(P＜0.05)。而中性粒細胞百分比、血小板計數、TC、LDL-C水平在各組之間的差異無統計學意義。

2.2 血清 Fn水平 ACS組的血清 Fn水平明顯低于健康對照組(P=0.012);其亞組 AMI組亦顯著低于健康對照組(P=0.025)。UAP組與健康對照組相比,兩組差異無統計學意義(P=0.452)。AMI組低于 UAP組,兩組之間的差別無統計學意義(P=0.486),見表 2。

2.3 不同冠狀動脈病變支數 Fn水平的改變 將ACS組中的 47例患者按冠脈病變支數分為單支病變、雙支病變和多支病變組,三個亞組分別與健康對照組進行比較,結果顯示 ACS各亞組的血清 Fn水平隨著病變的嚴重程度升高但仍低于健康對照組,各組之間的差異無統計學意義(F=1.297,P=0.285),見表 3。

表2 各組血清Fn水平比較

表3 不同冠狀動脈病變支數組與健康對照組血清Fn水平比較

3 討論

近年來大量的基礎和臨床研究均顯示,冠狀動脈易損粥樣斑塊破裂,表面破損或裂隙,隨后繼發血小板聚集和血栓形成,引起冠狀動脈急性完全或不完全堵塞是引發 ACS的主要病理機制[1]。血栓的形成是引起急性事件的一個重要原因,以前認為 Fg和 vWF是引起血栓形成的兩個重要配體,但近年來研究表明Fn參與血小板的粘附和聚集,與動脈血栓的形成有著密切的聯系。Fn是由分子量為 250-kDa亞單位組成的糖蛋白二聚體,分為細胞型 Fn和血漿型 Fn,在細胞的粘附、遷移、分化和增值中起關鍵的作用。Fn主要通過 RGD序列分別以活化依賴和非活化依賴的方式粘附到血小板整合素 αIIbβ3和α5β1,但在切變應激的作用下,也可依賴于血小板表面糖蛋白 Ib,通過 vWF粘附[2]。近年來,Ni等發現在 Fg缺乏的小鼠及 Fg和 VWF因子雙重缺乏的小鼠仍有閉塞性血栓的形成[3],進一步研究發現pFn的缺失并不影響早期的血小板粘附,但是與健康對照組小鼠相比,pFn缺失的小鼠小動脈血栓形成延遲了數分鐘。血栓的增長比較緩慢,因為血栓增長的同時不斷有血小板和血小板團塊從血栓中脫落[4]。將免疫熒光標記的 pFn中心體注入到 Fn+/-小鼠,觀察到這種中心體明確局限在發展中的動靜脈血栓內,表明不論是在高切變率還是在低切變率的條件下 pFn都是血栓形成的一個整體部分[5]。以上這些研究說明 Fn和 Fgv、WF同樣是介導血小板黏附和聚集的主要蛋白配體。

本研究結果發現 ACS患者血清 Fn水平顯著低于正常健康人,差異有統計學意義。血清 Fn水平與冠狀動脈疾病的病變程度無關。這與張等人[6]的研究結果類似。另外,與健康對照組相比,AMI患者白細胞計數高于正常人,差異有統計學意義,這可能與冠心病患者存在局部炎性反應有關。近年來關于Fn在冠心病方面的研究結果尚不統一,有些人的研究證實[7-8]Fn的水平在血管造影證實的冠狀動脈疾病患者中是升高的,然而我們的實驗結果以及張等人的研究卻發現 Fn在冠心病患者中顯著降低。另外,Vavalle等人[9]的研究發現血漿 Fn水平在健康人與冠狀動脈疾病之間沒有差別,并與冠狀動脈疾病的嚴重程度無關。對于以上結果可能有幾種不同的解釋:(1)所有的這些研究樣本量都比較小,易犯I類統計學錯誤;(2)研究對象不統一;(3)急性事件發生后血樣采集的時間不同也有可能影響 Fn檢測的水平;(4)Fn包含細胞型及血漿型,組成這兩種類型的成分不同,所以不同的試劑盒所含的抗體識別的抗原決定簇也可能不同;(5)其他原因可能包括不同的種族;不同的冠狀動脈造影和Fn的測定時間之間的差別。

急性冠狀動脈綜合征患者循環中血漿 Fn降低的原因可能是由于:(1)在粥樣硬化病變處,FN含量明顯的升高[10],這可能部分因為血漿 Fn從損傷的內皮組織溢出后并沉積在受累的區域。免疫組織化學的方法發現在心肌梗死后,Fn在梗死區域心肌細胞內有較強烈的染色[11],這說明在心肌缺血、梗死過程中心肌細胞膜損害致通透性增高,血漿中 Fn成分可能通過受損的毛細血管進入組織間隙,然后向受損的心肌細胞內擴散。血漿 Fn的溢出可能導致損傷和缺血區的 FN含量增加,而相應的循環中的 FN含量下降。(2)在急性缺血事件中,因為 Fn參與血小板的粘附和聚集,造成血漿 FN在血液凝固的時候被被消耗。

本組資料結果顯示,急性冠狀動脈綜合征患者血清 Fn水平顯著低于正常人,AMI組 Fn水平低于UAP組,但兩組的差異無統計學意義。血清 Fn水平與冠狀動脈病變程度無關。低循環水平也許提示Fn水平可能是急性冠脈綜合征的一種新的血清學指標,但由于我們的實驗有一定的局限性,還需要更大樣本更完善的實驗來進一步闡述 Fn與急性冠脈綜合征之間的關系。

[1] 可海霞,賈銀明.易損斑塊標志物和急性冠狀動脈綜合征[J].新鄉醫學院學報,2007,24(6):632-635.

[2] Wu YP,Vink T,Schiphorst M,etal.Platelet thrombus formation on collagen athigh shear rates ismediated by von willebrand factor-Glycokprotein Ib interaction and inhibited by von Willebrand factor-glycoprotein IIb/IIIa interaction[J].JArterionscler Thromb Vasc Biol,2000,20(6):1661-1667.

[3] Ni H,Denis CV,Subbarao S,et al.Persistence of platelet thrombus formation in arterioles ofmice lacking both von Willebrand factor and fibrinogen[J].JClin Invest,2000,106(3):385-392.

[4] Ni H,Yuen PST,Papalia JM,et al.Plasma fibronectin promotes thrombus growth and stability in in jured arterioles[J].Proc Natl Acad Sci USA,2003,100(5):2415-2419.

[5] Matuskova J,Chauhan AK.,Cambien B,et al.Decreased Plasma Fibronectin Leads to Delayed Thrombus Growth in In jured Arterioles[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,2006,26(6):1391-1396.

[6] Zhang Y,Zhou X,Krepinsky JC,et al.Association study between fibronectin and coronary heart disease[J].Clin Chem Lab Med,2006,44(1):37-42.

[7] Orem C,Durmus I,Kilinc K,etal.Plasma fibronectin level and its association with coronary artery disease and carotid intima-media thickness[J].Coron Artery Dis,2003,14(3):219-224.

[8] Ekmekci H,Ekmekci OB,Sonmez H,et al.Evaluation of fibronectin,vitronectin,and leptin levels in coronary artery disease:impacts on thrombosis and thrombolysis[J].Clin Appl Thromb Hemost,2005,11(1):63-70.

[9] Vavalle JP,Wu SS,Hughey R,et al.Plasma fibronectin levels and coronary artery disease[J].J Thromb Haemost,2007,5(4):864-866.

[10] Tan MH,Sun Z,Opitz SL,et al.Deletion of the alternatively spliced fibronectin EIIIA domain in mice reduces atherosclerosis[J].Blood,2004,104(1):11-18.

[11] 孫忠國,張凡,成日青,等.Fn、HSP70在冠心病猝死心肌中表達的診斷意義[J].河北北方學院學報(醫學版),2007,24(1):67.