雌激素α受體基因多態性與疾病相關性的研究進展*

夏淑林 張振華 李旭

雌激素受體（ER）包括α和β兩種亞型，1986年Green等首次克隆出ERα，1999年又發現了ERβ。近年來對ER的研究大部分集中在ERα上，其中較常見的位點是PvuII、XbaI、T29C和A252966G位點，本文就這些位點的基因多態性與HBV感染相關性疾病、乳腺癌、骨質疏松等疾病的研究進展作一綜述。

一、ERα基因多態性

ERα基因多態性或遺傳變異可以導致ER表達水平及功能的變化，進而影響到雌激素的生物學意義。由于ERα的1號內含子中含有增強子、啟動子等重要調節序列，因而發生突變將有可能影響到ER的表達與功能，因此人群中不同的ER基因型可能決定了不同個體間ERα的表達與功能上的差異。目前研究較多的T29C、PvuII和XbaI多態性位點位于ERα基因兩個連鎖不平衡區域中的A區域內，A252966G位于B區域內。其中，T29C是由ERα基因外顯子1上第10號密碼子處由C到T轉化而而來；PvuII和XbaI多態性位點位于外顯子2上游的大約400個堿基對；A252966G多態性位點位于內含子5中。近年大量流行病學研究結果顯示ERα基因以上四個位點基因多態性與多種疾病尤其是HBV感染相關性疾病的發生有關。

二、ERα基因多態性與HBV感染相關性疾病的關聯分析

HBV呈世界性分布，約有3.5億以上的慢性感染者。感染HBV后臨床表現復雜多樣，包括急性自限性感染和轉為慢性化狀態，后者可進展成無癥狀攜帶者，慢性肝炎，暴發性肝炎，肝硬化甚至肝癌，形成復雜的疾病譜。在機體清除HBV的過程中，特異性細胞免疫和細胞因子都發揮著重要的作用。其中雌激素對HBV的清除發揮著重要的調節作用，早有研究發現HBV基因組序列存在著糖皮質激素應答元件[1]，該元件對雌激素敏感，而雌激素能抑制HBV的復制[2]。此外還發現，女性發生HBeAg及HBsAg血清學轉換高于男性，機制未明，但近年來發現雌二醇可以誘導淋巴細胞產生IFN-g，從而限制病毒的復制和擴散，并對其他免疫細胞發揮強大的免疫調節作用。然而，臨床觀察發現經母嬰垂直感染HBV患者中，大多可在很長一段時間內表現為無癥狀攜帶者，機制可能是在懷孕時雌激素通過FoxP3蛋白、CD4+T及CD25+T細胞誘導免疫耐受有關。最近又發現給大鼠注射雌激素可激活免疫反應，從而中止已經誘導的免疫耐受。HBV感染后的臨床結局各異，除了與病毒本身的因素相關外，宿主的遺傳因素發揮重要作用，研究發現ERα基因多態性與HBV感染性疾病顯著相關[3]。雌激素通過ER發揮生物學效應，ERα基因多態性影響ER的表達和功能，最終必然導致雌激素的效應發生改變。

（一）HBV持續感染 Deng等[3]用PCR-RFLP法對1277例持續HBV感染者、748例自發性康復患者和293個核心家系進行分型，發現ERα 29T/T基因型的個體與至少含一個29C等位點的個體相比持續HBV感染的易感性顯著增加，中國人群中ERα基因T29C位點多態性與HBV持續感染顯著相關，而A252966G位點與持續HBV感染的易感性無相關性。T29C是一種同義突變，該位點本身可能不具有生物學功能，ERα基因的調控區可能存在與T29C呈高度連鎖不平衡的功能性多態位點。事實上，在該基因第1外顯子上游約1Kb的區域和內含子1距第2外顯子約400bp的區域分別存在（TA）n可變數目串聯重復（VNTR）和PvuII限制性片段長度多態性位點。該基因5’端調控序列中，在（TA）nVNTR下游約220bp的區域，存在類固醇反應元件[4]，（TA）nVNTR可能通過改變雌激素反應元件或其他己知的反應元件的反應性，從而影響ERα基因的轉錄。bMyb是一種普遍存在的轉錄因子，參與細胞的增殖，一項應用報告基因的實驗進行研究的結果發現PvuII多態性位于轉錄因子bMyb潛在的結合位點，并可影響基因的轉錄效率，攜帶C等位基因的ER表達量較高。ER基因的mRNA表達下降導致ERα表達降低。一項關于日本人群的研究揭示，無癥狀HBV攜帶者和慢性乙型肝炎患者外周血單個核細胞（PBMC）胞漿中的ERα表達水平比健康對照低，而INF-α可以使PBMC中的ERα水平升高。ERα基因的多態性與機體免疫功能有關，可能由于HBV攜帶者ER的低水平表達，導致免疫系統對雌激素的反應不足，從而造成對HBV病毒清除不力而容易導致HBV持續性感染。

（二）乙型肝炎肝硬化 大量研究表明，雌激素可以抑制肝纖維化的形成。謝建萍[5]用PCR/RELP法檢測并比較了98例乙型肝炎肝硬化患者，72例慢性乙型肝炎患者，84例健康對照組的雌激素受體基因PvuII、XbaI多態性，研究發現，ERα基因PvuII的Pp基因型和P等位基因可能是肝硬化發病的遺傳易感基因，pp基因型和p等位基因可能是肝硬化發病的保護基因。推測攜帶P等位基因的慢性乙型肝炎患者易發展為肝硬化，可能是因為其編碼的ER表達或者功能降低，減弱了由ER介導的雌激素的抗纖維化作用。而雌激素受體基因XbaI多態性與肝硬化無明顯相關，可能對ER功能或者表達影響很小，需要足夠大的樣本才能顯示出差異；或者不影響ER功能或者表達，從而不導致雌激素的生理學效應發生改變。

（三）乙型肝炎相關性肝癌 Zhai等[6]首次對中國人群乙肝相關性肝癌患者ER基因的多態性進行研究，在248例肝癌患者與239例健康對照中，發現ERα基因 PvuII基因多態性、T29C的多態性與乙肝相關性肝癌的易感性顯著相關，前者的C/C基因型與后者的C/C及T/C基因型增加肝癌的風險。單倍型分析也顯示ERα基因多態性與肝癌發生的風險相關。但未發現XbaI和A252966G基因多態性與肝癌相關。攜帶29C ER的mRNA表達高于攜帶29T等位基因的個體，導致ER的高表達。

HBV感染已被確認為肝癌的病因之一，然而僅五分之一的慢性乙型肝炎攜帶者發展為肝癌，這意味著在發展至肝癌的易感過程中存在影響個體變異的其他危險因素。動物模型和流行病學研究證明，雌激素具有促癌作用，并可誘導肝癌形成[7]雌激素的致癌效應主要通過ER介導，ER過表達的轉基因小鼠對合成雌激素類的致癌效應高度敏感，而攜帶29C及PvuII C等位基因的個體可能通過增加ER的mRNA轉錄水平從而促進ER高表達，最終導致癌癥的發生。

目前研究認為T29C多態性位點的T/T基因型易于感染HBV，同時又發現其C/C及T/C基因型的HBV感染者又易于發展為肝癌，但眾所周知，HBV感染者可發展為肝癌，無法用現有的研究無法解釋這樣的矛盾。

三、ERα基因多態性與乳腺癌的關聯分析

關于XbaI及PvuII多態性與乳腺癌風險的研究較多，但結果存在不一致。有些認為PvuII p等位基因及XbaI x等位基因與乳腺癌發病風險相關[8]，有的研究發現PvuII T（P）等位基因與乳腺癌風險相關[9]，還有的研究[10，11]發現PvuII和XbaI多態性與乳腺癌易感性無相關性。作為生長因子，雌激素通過ER促進正常乳腺細胞和癌細胞增值。ER過度表達并和雌激素結合促進乳腺細胞不斷增值，增加DNA復制過程中錯誤的機會，而產生基因突變最終導致癌的發生。以上兩位點不存在編碼區，不直接影響受體的功能，可能通過以下途徑影響ERα：ERα基因XbaI和PvuII多態性可能通過某種途徑增加ER的mRNA轉錄水平，導致ER的表達高于正常；與 ERα基因的其他疾病易感區域或鄰近ERα的其他基因相作用 ，從而增加乳腺癌的危險性；通過調節其他基因的mRNA穩定性和或轉錄而影響基因表達功能。

四、ERα基因多態性與骨質疏松的關聯分析

1996年第一次報道了在日本女性中，單體型 PPxx與骨密度低值存在關聯關系。一些研究發現僅PvuII多態性與骨密度有關[12～14]，Ivanova[13]等認為 XbaI基因多態性與低骨密度有關，而對芬蘭及中國的研究發現PvuII和XbaI多態性與骨密度無關[15，16]。雌激素通過ER調節破骨細胞的骨吸收和成骨細胞的骨形成，與ER結合，抑制破骨細胞的活性，促進成骨細胞的增殖、分化，在骨質疏松發病中起重要作用。ER基因PvuII，XbaI多態性如何影響骨代謝的機制，目前還不明確，可能是影響到ER表達或者功能降低，減弱了由ER介導的雌激素的抗骨質疏松作用。

五、ERα基因多態性與其他疾病的關聯分析

ER通過雌激素對血管生理功能、心血管功能發揮重要的作用。ERα基因多態性與心血管疾病密切相關，但有種族差異。如英國[17]、希臘[18]和匈牙利[19]等的研究結果不一致。有報道稱ERα基因PvuII和XbaI多態性與先兆子癇風險相關[20]。此外還有關于ERα與子宮內膜異位癥、子宮內膜癌等相關的報道。目前研究不成熟，需要進一步研究。

六、小結與展望

目前關于ERα以上四個基因多態性與各種疾病的的相關性研究已有一些進展，但研究結果不盡一致。原因可能與種族、樣本人群和環境等有關。可以利用家系進行研究消除這些影響因素，但目前對家系進行基因研究國內外報道較少，在家系成員尤其是同胞中對HBV感染者和非感染者進行對照研究未見報道，在今后的研究中可以從這方面入手進一步研究相關疾病的發病機制。

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