HPLC法測(cè)定益胃顆粒中芍藥苷的含量

李雪晴 王 超 文愛(ài)東 第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥劑科 (西安 710032)

益胃顆粒由黃芪、白芍、當(dāng)歸、麥冬、五味子、枸杞子、延胡索、莪術(shù)、黃連、黨參十味中藥組成,是我院由傳統(tǒng)中藥湯劑改變劑型制得的臨床治療慢性萎縮性胃炎的藥物。本品補(bǔ)中益氣,健脾和胃,滋養(yǎng)胃陰,理氣活血,消炎止痛,主治慢性胃炎,尤其適于慢性萎縮性胃炎,芍藥苷為該藥的主藥白芍的主要成分。本實(shí)驗(yàn)利用高效液相色譜法對(duì)芍藥苷進(jìn)行了含量測(cè)定,為益胃顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)[1,2,3]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津 Lc-10A高效液相色譜儀(LC-10A輸液泵,聯(lián)用 SPD-10AV可調(diào)波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器),n2000色譜化學(xué)工作站。

1.2 試藥 益胃顆粒(由第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥品制劑科制備,批號(hào) 071102,080201,080602);陰性對(duì)照品(本院自制);芍藥苷對(duì)照品(由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供,批號(hào):110625-200514);甲醇為色譜醇,水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 分析柱:KromasilC18(150mm× 4.6mm,5 μ m);流動(dòng)相∶甲醇 -水 (45∶ 75);檢測(cè)波長(zhǎng) 230nm;流速:1m L/min;室溫 ;進(jìn)樣量:10 μ l。在上述色譜條件下,分離度與柱效均良好,見(jiàn)圖 1。

圖1 HPLC色譜圖

2.2 溶液配制 2.2.1 對(duì)照品溶液的制備: 精密稱取芍藥苷對(duì)照品 4.10mg,用少量甲醇溶解后,以甲醇定容成每 1mL各含 41 μ g的對(duì)照品溶液,閉光保存。

2.2.2 樣品溶液的制備:取本品 1袋內(nèi)容物,研細(xì),精密稱取 2.0 g,置 50 mL容量瓶中,加 75%乙醇約 40mL,超聲波振蕩提取 40min,放冷,加 75%乙醇置至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μ m)濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

2.2.3 陰性對(duì)照品溶液:精密稱取陰性樣品顆粒 2.0g,照供試品溶液的制備方法制備。

2.3 本方法專一性考察 分別將對(duì)照品溶液,陰性對(duì)照品溶液和樣品溶液 10 μL注入高效液相色譜儀,在 230nm處測(cè)定吸收峰面積,其對(duì)照品、陰性溶液及樣品的 HPLC圖譜見(jiàn)圖 1

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液4 μL,6 μL,8 μL,10 μ L,12 μL,在上述色譜條件下分別進(jìn)樣,測(cè)定峰面積,以峰面積積分值(A)為縱坐標(biāo),以進(jìn)樣量(μ g)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,計(jì)算芍藥苷回歸方程:Y=151 369X+ 2980,r=0.999 8,在 0.164 μ g-0.656 μ g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣 5次,每次 20 μ l,測(cè)定峰面積,結(jié)果 RSD值為 1.18%(n=5),表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取攪勻的同批號(hào)樣品5份,照樣品測(cè)試方法進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果 RSD值分別為1.25%,結(jié)果表明本測(cè)定方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液分別在配制后 0,2,4,8,12,24h各進(jìn)樣 20 μ l,記錄色譜圖。 計(jì)算RSD為 1.21%(n=6),說(shuō)明該供試品溶液在 24h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.8 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取益胃顆粒樣品 2.0g,置 50 mL容量瓶中,加 75%乙醇約 40mL,超聲波振蕩提取 40min,放冷,加 75%乙醇置刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μ m)濾過(guò),取續(xù)濾液。在相同色譜條件下,進(jìn)樣 10 μ l測(cè)定峰面積,計(jì)算含量取已知含量的樣品溶液分別精密加入對(duì)照品溶液適量,攪勻后,按樣品測(cè)定方法測(cè)定含量 ,計(jì)算回收率,見(jiàn)表 1。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果(n=6)

2.9 樣品含量測(cè)定 精密稱取 3批益胃顆粒樣品 2.0g,置 50 mL容量瓶中,加 75%乙醇約 40m L,超聲波振蕩提取 40min,放冷,加 75%乙醇置刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μ m)濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。在相同色譜條件下各進(jìn)樣 10 μL測(cè)定峰面積,計(jì)算含量,結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討 論

3.1 本試驗(yàn)建立了測(cè)定益胃顆粒中芍藥苷的HPLC法,在提取條件考察過(guò)程中,我們先后考察了多種溶劑和提取手段對(duì)本品的提取效果,經(jīng)實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)不同的提取方法和不同的提取溶媒對(duì)芍藥苷的提取效率均不相同。本次實(shí)驗(yàn)所采用的方法簡(jiǎn)便,快速,專屬性好,結(jié)果準(zhǔn)確。應(yīng)用此發(fā)法測(cè)得 3批樣品結(jié)果表明該方法可用于該制劑的質(zhì)量控制。

3.2 選擇檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí),以流動(dòng)相為溶劑稀釋對(duì)照品,采用紫外分光光度法在 200～ 400掃描吸收光譜,結(jié)果表明芍藥苷在 230nm處有最大吸收,與文獻(xiàn)一致,故選定 230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.3 選擇提取方法及提取溶劑時(shí),先后對(duì)比了超聲波提取法以及加熱回流提取法結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用 75%乙醇超聲波提取法對(duì)芍藥苷的提取效率比較高,而回流法由于采用的溫度比較高易使芍藥苷在提取過(guò)程中有部分損失。故針對(duì)本制劑最終選擇 75%乙醇超聲波提取的方法。

3.4 本次實(shí)驗(yàn)過(guò)程當(dāng)中筆者多次比較了∶乙腈-0.1%磷酸 (14∶ 86)、甲醇-水 (30∶ 70)等多種流動(dòng)相 ,反復(fù)對(duì)比各項(xiàng)系統(tǒng)參數(shù),結(jié)果發(fā)現(xiàn):甲醇-水(46∶72)對(duì)于樣品中芍藥苷和其它雜質(zhì)的分離度最好,故此選擇此流動(dòng)相。

[1] 中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì)編.中國(guó)藥典(2005版第一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:109.

[2] 王玉安,李豫秦.HPLC法測(cè)定尿塞通片中芍藥苷的含量 [J].陜西中醫(yī),2005,26(8):839-840.

[3] 王新立,張?jiān)饺A.HPLC法測(cè)定精制冠心顆粒中芍藥苷的含量 [J].陜西中醫(yī),2007,13(7),55-56.