黃鶴通絡膠囊對大鼠 Pulsinelli法腦缺血再灌注模型的影響

劉福昌 張曉雙 程 陜西省寶雞職業技術學院中醫藥學系 (寶雞 721013)

黃鶴通絡膠囊由姜黃、仙鶴草、丹參、葛根等組成,具有活血化瘀、醒腦通絡等功能,臨床主要用于腦卒中的治療。為了闡明其藥理作用及其機制,我們觀察了黃鶴通絡膠囊對大鼠Pulsinelli法腦缺血再灌注模型的影響。

1 實驗材料 1.1 實驗動物 SD品系大鼠,雄性,250～ 300g,由第四軍醫大學實驗動物中心提供,合格證號 scxk(軍 )2007-007。

1.2 藥品及試劑 黃鶴通絡膠囊,0.45g/粒,內容物呈棕色粉末狀 ,1g內容物約相當于生藥 5.1g,批號:20060823,用蒸餾水將其配成所需濃度的混懸液備用;曲克蘆丁片,由山西津華暉星制藥有限公司生產,批號:060901;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)試劑盒,由南京建成生物工程研究所出品 ,批號分別為 20061027、20061101;紅四氮唑,上海科豐化學試劑有限公司出品,批號:050812。

1.3 主要儀器 SW-CJ-2FD型雙人單面凈化工作臺,蘇州凈化設備有限公司出品;UV1102紫外分光光度計,上海天美科學儀器有限公司生產;702型超低溫冰箱,美國熱電公司生產;HDW-600型高頻電灼治療儀,成都航天產業開發有限責任公司生產。

2 實驗方法 取 SD品系大鼠,雄性,體重 280～ 320g。除假手術組外,其余大鼠采用 Pulsinelli法 (四血管阻塞法)建立大鼠全腦缺血再灌注損傷模型[1～3]。以 10%水合氯醛 0.35mL/100g腹腔注射麻醉,背位固定。在超凈工作臺下,按無菌操作于大鼠背部正中枕骨后第 1、2頸椎位置切口,鈍性分離,暴露第 1頸椎的橫突翼,并找到左、右橫突孔,用電凝器灼斷雙側椎動脈,縫合傷口。然后,再仰位固定大鼠,鈍性分離左右兩側頸總動脈,用動脈夾夾閉雙側頸總動脈阻斷血流,10min后同時開啟兩動脈夾進行腦再灌流。術中及術后麻醉清醒前用烤燈維持動物體溫(37.0±0.5)℃ ,實驗室溫度保持在(24～ 25)℃。第2d,按動物體征狀況[4]均衡后隨機分為 5組,即模型組,曲克蘆丁組(150mg/kg)、黃鶴通絡膠囊大、中、小劑量組(8g生藥 /kg、4g生藥 /kg和 2g生藥 /kg)。假手術組除不阻塞四血管和腦再灌流外,其他操作與模型組相同。各組動物灌胃給藥,模型組和假手術組給予等容積的蒸餾水。各組動物每天給藥 1次,連續 7天,給藥容積 20mL/kg。對于有進食困難的動物,每天早晚灌胃濃牛奶各 1次。末次給藥后 1h,斷頭處死大鼠,迅速取出全腦,稱重,計算腦指數(g/100g體重 )。除嗅球、小腦和低位腦干外,將腦置于-80℃,冠狀切成 6片 1～ 1.5mm厚腦片。取同一位置的 1個腦片,先取適量照 SOD和 M DA試劑盒說明測定腦組織 SOD和 M DA,剩余部分用 10%福爾馬林固定,常規取材、脫水、浸蠟、包埋、切片、HE染色,光鏡下進行病理學檢查。其他 5片腦組織迅速置于 2%紅四氮唑(TTC染色)磷酸緩沖溶液中,37℃避光溫孵染色 30min,其間每隔 7～ 8min翻動 1次,染色后正常腦組織呈紅色,梗塞組織呈白色。溫孵完畢后用 SONY800萬相素數碼相機拍照腦片 ,輸入計算機,采用 image-pro plus圖像處理軟件計算梗塞面積,求出每鼠 5片腦片總梗塞面積與腦片總面積之比。為了消除誤差,將圖像中的所有白色區域均記入梗塞面積。

3 結 果 3.1 對腦組織 SOD和 M DA的影響 測定腦組織 SOD和 M DA,用t值法進行數據處理,比較組間差異。結果見表 1。

表1 對腦組織 SOD和 MDA的影響

結果表明,黃鶴通絡膠囊 4g生藥 /kg和 8g生藥 /kg能明顯升高腦缺血再灌注大鼠腦組織 SOD活性;黃鶴通絡膠囊 8g生藥 /kg能降低腦缺血再灌注大鼠腦組織 MDA含量,與模型組比較,差異有顯著性意義 (P＜0.05或 P＜0.01),提示黃鶴通絡膠囊具有提高腦缺血再灌注大鼠腦組織的抗氧化作用。

3.2 對腦指數和腦梗塞的影響 稱量腦重,計算腦指數(g/100g體重)結果見表 2。TTC染色后拍照腦片,輸入計算機,用 image-pro plus圖像處理軟件計算梗塞面積 ,求出每鼠 5片腦片總梗塞面積與腦片總面積之比。用 t值法進行數據處理,比較組間差異,結果見表 2。

表2 對腦指數和腦梗塞的影響

黃鶴通絡膠囊 2g生藥 /kg、4g生藥 /kg和 8g生藥 /kg對腦缺血再灌注大鼠腦指數影響較小,但均能減小腦梗塞面積,降低腦梗塞面積與腦總面積比值與模型組比較差異有顯著性意義(P ＜0.01)。

3.3 對腦組織病理學檢查的影響 腦組織病理學檢查顯示,假手術組神經元結構正常,模型組血管明顯擴張,水腫現象明顯,神經元結構紊亂,尼氏體減少,其中 1例腦膜血管擴張,有大量炎細胞浸潤。黃鶴通絡膠囊 2g生藥 /kg、4g生藥 /kg和8g生藥 /kg血管擴張較輕,水腫明顯改善,神經元損傷減輕,其中 4g生藥 /kg和 8g生藥 /kg作用較顯著。

4 討 論 腦卒中是以腦循環血流量下降為特征的中樞神經系統疾病,是現今世界范圍主要的致死、致殘疾病之一。腦卒中屬祖國醫學“中風病”范疇。可分為多種不同證型,如肝陽暴亢,風火上擾;風痰瘀血,痹阻脈絡;氣虛血瘀,脈絡瘀阻;痰濁上擾 ,蒙蔽清竅;瘀血內阻,神明失用等。在傳統認識的基礎之上,結合臨床實踐,有學者認為:不少正經、奇經皆上注于頭,因而腦內氣血豐盈、絡脈宏富,而中風病位在腦,故中風病自始至終都存在著“病絡”的狀況[5]。近來研究發現,腦血流中斷和再灌注使腦細胞產生損傷是一個快速的級聯反應,包括許多環節,如能量障礙、細胞酸中毒、興奮性氨基酸釋放增加、細胞內鈣失穩態、自由基生成、凋亡基因激活等。這些環節互為因果,彼此重疊,并相互聯系,形成惡性循環,最終導致細胞凋亡或壞死。更提出了“毒損腦絡”的中風病機理論[6]。

黃鶴通絡膠囊由姜黃、仙鶴草、丹參、葛根等組成,具有活血化瘀、醒腦通絡等功能,臨床主要用于腦卒中的治療。本實驗表明,黃鶴通絡膠囊 4g生藥 /kg和 8g生藥 /kg能明顯升高SOD活性,8g生藥 /kg能降低 M DA含量 0.05或 0.01)。黃鶴通絡膠囊 2g生藥 /kg、4g生藥 /kg和 8g生藥 /kg對腦缺血再灌注大鼠腦指數影響較小,但均能減小腦梗塞面積,降低腦梗塞面積與腦總面積比值(P＜0.01)。腦組織病理學檢查顯示,假手術組神經元結構正常,模型組血管明顯擴張,水腫現象明顯,神經元結構紊亂,尼氏體減少,其中 1例腦膜血管擴張,有大量炎細胞浸潤。黃鶴通絡膠囊大、中劑量組動物腦血管擴張較輕,水腫改善,神經元損傷減輕。,提示黃鶴通絡膠囊具有提高腦缺血再灌注大鼠腦組織的抗氧化作用,抑制四血管阻塞引起的大鼠全腦缺血再灌注損傷,減小腦梗塞面積和腦組織病理損害,對腦卒中產生治療作用。

[1] 徐叔云 ,卞如濂,陳 修.藥理實驗方法學 [M].第三版.北京:人民衛生出版社,2002:1061.

[2] 陳 奇.中藥藥效研究思路與方法[M].北京:人民衛生出版社,2005:213.

[3] 陳偉峰,韓繼媛,田兆興,等.復方麝香注射液在大鼠急性缺血再灌注損傷中對 BDN F和 NGF的影響 [J].廣西中醫學院學報,2005,8(3):8-10.

[4] 龐 濤,許 鐵,縱雪梅,等.鹽酸戊乙奎醚對腦缺血再灌注損傷大鼠腦梗死體積和行為學的影響 [J].徐州醫學院學報,2006,26(5):391-394.

[5] 王永炎.中風絡病證治述要[J].北京中醫藥大學學報,2004,27(5):1-3.

[6] 常富業 ,王永炎.毒損絡脈診釋 [J].北京中醫藥大學學報,2006,29(11):729-731.