非洛地平片在人體內藥動學與藥效學的相關性研究

李文艷，楊佳，姚佳晨，錢忠直，畢開順

（1.上海市浦東新區(qū)公利醫(yī)院藥劑科，上海市 200135；2.沈陽藥科大學藥物分析教研室，沈陽市 110016；3.國家藥典委員會，北京市 100061）

非洛地平（Felodipine）是第2代二氫吡啶類鈣離子拮抗藥，通過抑制小動脈平滑肌細胞外鈣的內流，增加冠狀竇血流量，降低全身及冠狀動脈血管阻力，使血壓下降，具有長效、不良反應少等優(yōu)點[1～3]，臨床上用于輕、中度高血壓的治療。現(xiàn)筆者采用液-質聯(lián)用法對非洛地平的血藥濃度進行測定并研究其藥動學，另監(jiān)測受試者在服藥后規(guī)定時間的動脈血壓和心率（HR）等藥效指標，研究非洛地平的體內藥動學及藥效學過程的相關性。

1 材料

1.1 儀器

2010EV LC-MS聯(lián)用儀（日本島津公司）；CAY-1型液體快速混合器（北京長安儀器廠）；WM-2H型無油壓縮機（天津醫(yī)療儀器廠）；TGL-16C離心機、TDL-40B離心機（上海安亭科學儀器廠）；SK250H超聲儀（上海科導超聲儀器有限公司）；TG-328A分析天平（上海天平儀器廠）；歐姆龍上臂式血壓計（日本歐姆龍株式會社）。

1.2 試藥

非洛地平片（北京協(xié)和藥廠，規(guī)格：每片10 mg，批號：H19980034，有效期：20100331）；非洛地平對照品（中國藥品生物制品檢定所，純度：99.7%，有效期：2011年8月）；內標：尼莫地平對照品（中國藥品生物制品檢定所，純度：99.8%，有效期：2011年5月）；甲醇為色譜純，乙醚、正己烷、氫氧化鈉為分析純，水為雙重蒸餾水。

2 方法

2.1 色譜及質譜條件

色譜柱：Kromasil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），保護柱（大連中匯達公司）；流動相：甲醇-0.1%甲酸（84∶16）；流速：0.8 mL·min－1；柱溫：30 ℃ 。離子源：電噴霧離子化（ESI）源；電噴霧離子化（CDL）溫度：250℃；加熱塊溫度：200℃；霧化氣（N2）流速：1.5 L·min－1；檢測電壓：1.6 kV；正離子方式檢測；掃描方式：選擇離子監(jiān)測（SIM）；用于定量分析的離子分別為m/z 406（非洛地平）和m/z 441（尼莫地平）。在選定的色譜條件下，血漿中非洛地平峰形良好，與內源性雜質分離完全。非洛地平和內標尼莫地平的保留時間分別為6.4、4.4 min。LC-MS色譜圖見圖1。

圖1 LC-MS色譜圖A.空白血漿；B.空白血漿+5 μg·L－1非洛地平對照品+內標；C.受試者服藥4 h后血漿樣品+內標；1.非洛地平；2.尼莫地平Fig 1 LC-MS chromatogramA.blank plasma；B.blank plasma+5 μg·L－1felodipine control+internal standard；C.plasma sample of 4 h after medication；1.filodipine；2.nimodipine

2.2 試驗溶液的制備

準確稱取非洛地平對照品適量，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，制備成相當于非洛地平濃度為200 mg·L－1的貯備液。另準確稱取尼莫地平對照品適量，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，制備成相當于尼莫地平濃度為50 mg·L－1的貯備液，再稀釋成濃度為20 μg·L－1的內標溶液。

2.3 血漿樣品處理

取血漿500 μL，置于10 mL具塞試管中，依次加入內標溶液50 μL、1.0 mol·L－1NaOH溶液100 μL、乙醚-正己烷（4∶1）2.5 mL，渦旋混合3 min，4000 r·min－1離心5 min，取上清液置于另一試管中，空氣吹干，殘留物加甲醇100 μL溶解，超聲（58 kHz，250 W）1 min，渦旋1 min，12000 r·min－1離心3 min，取上清液20 μL進樣分析。

2.4 標準曲線的制備

取空白血漿500 μL，加入非洛地平對照品貯備液適量，制備成相當于非洛地平濃度為 0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 μg·L－1的模擬血漿樣品，按“2.3”項下方法操作，進樣分析，記錄色譜。以待測物濃度（C）為橫坐標，待測物與內標的峰面積比值（A）為縱坐標，用加權（W＝1/X2）最小二乘法進行回歸，得回歸方程為：A＝0.1940C+0.02935（r＝0.9948）。結果表明，非洛地平血藥濃度在0.2～20.0 μg·L－1范圍內線性關系良好，定量下限為0.2 μg·L－1。

2.5 回收率及精密度試驗

分別制備0.5、2.0、10.0 μg·L－13種濃度的模擬血漿樣品各6份，按“2.3”項下方法操作；另除不加系列對照品溶液和內標溶液外，其他按“2.3”項下方法操作，殘留物以相應濃度的系列對照品溶液溶解，進樣分析，以2種處理方法的峰面積比值計算提取回收率。3種濃度下平均提取回收率分別為81.9%、82.7%、88.9%，RSD分別為14.4%、11.5%、14.9%。另分別于同日內連續(xù)測定5次及5 d內每日測定1次，計算日內和日間精密度，結果日內、日間RSD均小于14.3%，符合人體藥動學研究的要求。

2.6 藥動學研究

2.6.1 受試者選擇：10名男性健康受試者，年齡（22±3）歲，體質量（70±5）kg，身高170～175 cm。全面體格檢查結果良好，血、尿常規(guī)，肝、腎功能及心電、心率、血壓均在正常范圍內。試驗前14天及試驗期間未服用其它任何藥物。試驗期間禁煙酒。所有受試者在入組前均簽署知情同意書，該知情同意書和試驗方案經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院倫理委員會討論批準通過。

2.6.2 試驗方案及血樣采集：10名受試者禁食12 h后于次日早晨8∶00時空腹用溫開水200 mL單劑量吞服非洛地平片10 mg，并于服藥后4 h統(tǒng)一進餐。于服藥前0 h及服藥后0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10、12、24、48 h時各抽取靜脈血5 mL，分離血漿，于－20℃冰箱保存，供血藥濃度測定用。

2.6.3 數(shù)據(jù)處理：用DAS2.0藥動學模塊程序處理藥-時數(shù)據(jù)。

2.7 藥效學研究

2.7.1 藥效指標的選擇：選擇收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）、HR和平均動脈壓（MAP）作為藥效測定的指標。

2.7.2 藥效測定：藥效數(shù)據(jù)分別于服藥前0 h及服藥后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、8.0、10、12、24、48 h時測定，即每次采血的同時測定受試者臥位SBP、DBP、HR和MAP，取其平均值作為藥效結果。

3 結果

3.1 藥動學結果

10名健康受試者單劑量口服非洛地平片10 mg后，平均血藥濃度測定結果見表1。用DAS2.0藥動學模塊程序處理藥-時數(shù)據(jù)，顯示其符合二室模型，平均藥動學參數(shù)見表2。

表1 非洛地平不同時間點的平均血藥濃度測定結果（n＝10，±s）Tab 1 Mean plasma concentrations of filodipine in 10 healthy volunteers at different time point（sn＝10，±s ）

表1 非洛地平不同時間點的平均血藥濃度測定結果（n＝10，±s）Tab 1 Mean plasma concentrations of filodipine in 10 healthy volunteers at different time point（sn＝10，±s ）

C/μg?L-1 00.69±0.241.46±0.731.86±0.802.66±0.684.14±1.555.06±1.525.84±1.234.07±0.872.64±0.781.87±0.791.36±0.730.84±0.470.26±0.07時間/h 00.511.522.5346810122448

3.2 藥效學結果

10名健康受試者單劑量口服非洛地平片10 mg前、后的平均藥效學結果見表3。

3.3 血藥濃度與藥效相關性

以不同時間血藥濃度平均值（Y），分別對ΔSBP（X1）、ΔDBP（X2）、ΔHR（X3）、ΔMAP（X4）的平均值進行回歸分析，得回歸方程分別為：Y＝－3.284+0.7007X1（r1＝0.614，P＜0.01）；Y＝－4.354+1.368X2（r2＝0.9856，P＜0.01）；Y＝9.305+1.3252X3（r3＝0.9077，P＜0.01）；Y＝0.9336+0.4044X4（r4＝0.5686，P＜0.01）。其中ΔSBP＝SBPt－SBP0，即服藥后不同時間測得的SBP平均值減去服藥前測得的SBP平均值的絕對值。其它藥效指標類推。

表2 10名健康受試者口服非洛地平片10 mg后的平均藥動學參數(shù)（n＝10，±s）Tab 2 Mean pharmacokinetic parameters of filodipine in 10 healthy volunteers after oral administration of 10 mg filodipine table（tn＝10，±s ）

表2 10名健康受試者口服非洛地平片10 mg后的平均藥動學參數(shù)（n＝10，±s）Tab 2 Mean pharmacokinetic parameters of filodipine in 10 healthy volunteers after oral administration of 10 mg filodipine table（tn＝10，±s ）

±s 3.88±0.355.94±1.4561.73±15.5467.62±16.090.73±0.3315.43±4.15參數(shù)tmax/h Cmax/μg·L－1 AUC0～48/μg·h·L－1 AUC0～∞/μg·h·L－1 Ka/h－1 t1/2/h x

表3 10名健康受試者口服非洛地平片10 mg前、后的平均藥效學結果（n＝10，±s）Tab 3 Mean pharmacodynamic indexes in 10 healthy volunteers after oral administration of 10 mg filodipine table（tn＝10，±s ）

表3 10名健康受試者口服非洛地平片10 mg前、后的平均藥效學結果（n＝10，±s）Tab 3 Mean pharmacodynamic indexes in 10 healthy volunteers after oral administration of 10 mg filodipine table（tn＝10，±s ）

時間/h 00.511.522.5藥效346810122448 SBP/mmHg 109±6110±11109±10108±8112±6112±7113±9108±9106±8107±11114±7111±11114±7113±8 DBP/mmHg 81±786±1376±777±1176±774±776±872±1067±1372±974±1278±981±1181±10 HR/次·min-1 80±1274±880±1379±1182±1375±672±774±976±975±577±675±971±874±5 MAP/mmHg 90±494±587±1287±888±687±486±487±880±684±1387±1089±692±892±10

服藥后的藥效指標與未服藥時的相應指標進行統(tǒng)計分析，結果發(fā)現(xiàn)用藥2、2.5、3、4、8 h的DBP均有明顯下降（0.01＜P＜0.05），用藥6 h的DBP有顯著下降（P＜0.01）。

4 討論

本文以獲得的試驗數(shù)據(jù)進行藥效學/藥動學關聯(lián)模型研究[4，5]，研究中發(fā)現(xiàn)非洛地平的藥動學符合二室模型；藥效學不符合典型的S形Emax模型[6]，藥動學和藥效學不符合直接連接和間接連接的藥效學/藥動學關聯(lián)模型[7]，說明模型機制不適于非洛地平藥物的血藥濃度與效應研究。

本文對非洛地平在不同時間的血藥濃度與SBP、DBP、HR、MAP進行相關回歸分析，相關系數(shù)分別為0.6146、0.9856、0.9077、0.5686，因而藥效與血藥濃度的相關性依次為DBP＞HR＞SBP＞MAP，提示臨床醫(yī)師應用非洛地平時是否得到滿意療效，應首先分析DBP的變化情況，并考察HR的變化。

本研究發(fā)現(xiàn)服用非洛地平2～8 h時間范圍內，DBP下降明顯（P＜0.05或P＜0.01），從而可以初步確定非洛地平的有效血藥濃度約為2.64～5.84 μg?L－1。本研究結果可指導臨床應用非洛地平的血藥濃度監(jiān)測和療效觀察分析。

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