滴眼劑中幾種常用抑菌劑的兔眼刺激性實驗

梁光江，王延東，葉成添，唐細蘭

（中山大學中山眼科中心，廣州市 510060）

滴眼劑是指由藥物與適宜輔料制成的無菌水性或油性澄明溶液、混懸液或乳狀液，供滴眼用的液體制劑，也可以將藥物以粉末、顆粒、塊或片狀形式包裝，另備溶劑，在臨用前配成澄明溶液或混懸液[1]。為了保證滴眼劑的無菌性和防止滴眼劑發生微生物污染，可以往滴眼劑中添加抑菌劑或將滴眼劑制成不含抑菌劑的單劑量包裝滴眼劑。雖然近年來，不含抑菌劑的單劑量包裝滴眼劑被越來越多的廠家所開發，但是基于藥物經濟學的考慮，多劑量、添加抑菌劑的可重復使用的滴眼劑仍然在滴眼劑中占據重大地位。但是，近年來有關滴眼劑中抑菌劑的刺激性反應及對眼組織損害的報道[2]開始不斷增多。有報道[3]指，對動物眼給予含抑菌劑的滴眼劑后，有角膜上皮細胞的微小突起消失的異常情況出現。另有國外學者進行了一項針對長期使用抗青光眼眼用制劑的患者的實驗[4]，實驗分為使用含抑菌劑和不含抑菌劑2組，結果表明，使用含抑菌劑的患者，其眼睛發生疼痛、不適、流淚等眼部刺激性反應的機率明顯比使用不含抑菌劑的患者高。本實驗即通過觀察常用幾種抑菌劑單次給藥、多次給藥對兔眼的刺激性反應，研究其刺激性，為滴眼劑的制劑處方設計中選擇合適的抑菌劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 動物

成年新西蘭大白兔，體質量2～3 kg，♀♂兼用，形體健康，無病理體征，經檢查兩眼均屬正常，結膜無充血，角膜透明無上皮脫落及損傷，符合動物實驗要求。由廣東省醫用動物實驗中心提供，實驗動物使用許可證：SYXK（粵）2005-0058。

1.2 試藥

試藥0.03%羥苯乙酯、0.002%硫柳汞、0.01%氯己定（洗必泰）、2%硼酸、0.5%三氯叔丁醇、0.01%苯扎氯銨、0.01%苯扎溴銨、0.9%生理鹽水，均由中山大學中山眼科中心制劑室制備，規格：每支10 mL。

1.3 儀器

SL-7F型裂隙燈顯微鏡（日本Topcon公司）。

1.4 單次給藥刺激性實驗

采用同體自身對照，每組選用家兔5只，實驗前24 h內在裂隙燈顯微鏡下對每只家兔作雙眼檢查（包括使用熒光素鈉檢查），并記錄角膜、虹膜及結膜情況。因為滴眼液的使用劑量都是1次2滴約0.1 mL左右，所以將試藥0.1 mL滴入左側眼結膜囊內，右側用0.9%生理鹽水作對照，輕合眼瞼10 s，在給藥后的1、2、4、24、48、72 h觀察眼部情況，并按表1進行眼刺激反應評分。

1.5 多次給藥刺激性實驗

采用同體自身對照，每組選用家兔5只，給藥方法及劑量與單次給藥相同，每天滴眼4次，每次間隔3 h，連續使用14 d，并在每日給藥前以及最后一次給藥后的1、2、4、24、48、72 h觀察眼部情況，并按表1進行眼刺激反應評分。

1.6 評分標準

參照《化學藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術指導原則》[5]課題研究組評分標準進行評分。在實驗中，按表1的要求將每個觀察時間點每只家兔的眼角膜、虹膜、結膜和分泌物的刺激反應分值相加得總積分，再將同組的積分總和除以觀察時間點數，即可得到其眼刺激性反應的平均分值。并按表2判斷其刺激程度。

2 結果

表1 眼刺激反應主分值標準Tab 1 Score standard of eyes stimulation response

表2 眼刺激性評價標準Tab 2 Evaluation standard of eyes stimulation response

2.1 單次給藥刺激性實驗

各抑菌劑單次給藥后眼刺激性結果見表3。

表3 各抑菌劑單次給藥后眼刺激性結果Tab 3 Results of eyes stimulation response with single dose of bacterial inhibitors

由表3可見，單次給藥后，0.9%生理鹽水對照組眼刺激反應平均分值均為0；0.002%硫柳汞在給藥組中眼刺激反應平均分值最低，為0.20，其次為0.01%苯扎氯銨0.32、0.01%苯扎溴銨0.36、0.01%氯己定0.60、0.5%三氯叔丁醇1.20，0.03%羥苯乙酯和2%硼酸眼刺激反應平均分值最高，分別為3.88和6.32。根據眼刺激性評價標準，除了2%硼酸和0.03%羥苯乙酯屬于輕度刺激性外，其余均屬于無刺激性。

2.2 多次給藥刺激性實驗

各抑菌劑多次給藥后眼刺激性結果見表4。

表4 各抑菌劑多次給藥后眼刺激性結果Tab 4 Results of eyes stimulation response with multiple dose of bacterial inhibitors

由表4可見，多次給藥后，0.9%生理鹽水對照組眼刺激反應平均分值均為0；在給藥組中，0.002%硫柳汞眼刺激反應平均分值最低，為0.49，其次為0.01%苯扎氯銨0.79、0.01%苯扎溴銨0.84、0.01%氯己定3.83、0.5%三氯叔丁醇3.91，0.03%羥苯乙酯和2%硼酸眼刺激反應平均分值最高，分別為6.51和10.84。根據眼刺激性評價標準，2%硼酸屬于中度刺激性，0.03%羥苯乙酯、0.01%氯己定和0.5%三氯叔丁醇屬于輕度刺激性，0.002%硫柳汞、0.01%苯扎氯銨、0.01%苯扎溴銨應該屬于無刺激性。

3 討論

抑菌劑的濃度，筆者選用了滴眼劑在制備過程中比較常用的濃度。通過單次給藥、多次給藥的實驗結果不難看出，滴眼劑中常用幾種抑菌劑對眼睛的刺激性由小到大排列依次為硫柳汞、苯扎氯銨、苯扎溴銨、氯己定、三氯叔丁醇、羥苯乙酯、硼酸。多次給藥后，因為用藥次數增多，所以眼刺激反應平均分值明顯高于單次給藥組。這也和我院眼用制劑使用抑菌劑的實際情況基本相符。

硫柳汞屬于一種有機汞，長期以來一直被廣泛用做生物制品及藥物制劑包括許多疫苗的防腐劑。它能抑制細菌的巰基酶系統，使細菌蛋白凝固，具有強烈的殺菌、抑菌作用，水中易溶（1∶1），作用強，在酸性溶液中有殺菌作用，在中性和堿性溶液中均有抑菌作用[6]。由于其使用濃度低，常用濃度為0.001%～0.002%，而且其水溶液pH值為6～8，與人正常淚液的pH值十分相近，因此一般對眼睛沒有刺激性。

苯扎氯銨、苯扎溴銨同為季銨鹽類殺菌劑，可使菌體蛋白或蛋白脂類凝固，阻止細胞的代謝，殺菌力強，因此廣泛用于表面消毒、防腐和去垢等。它們都極易溶于水，用作防腐劑時一般都使用低濃度溶液（常用濃度為0.01%），在本實驗中單次給藥、多次給藥后的刺激性都比較小，僅次于硫柳汞，文獻報道[7]其對皮膚和黏膜的刺激性也比較小，是一種優良的皮膚、黏膜用和眼用制劑防腐劑。

氯己定常用其醋酸鹽，具有相當強的廣譜抑菌、殺菌作用，是一種毒性、腐蝕性和刺激性都低的安全消毒劑[8]。在所有的抑菌劑中抑菌效力最為突出，盡管其極難溶于水，但是使用濃度非常低，即使稀釋到微量也有很強的抑菌作用。本實驗結果表明，其單次給藥時無刺激性，而長期使用則具有輕度刺激性。

三氯叔丁醇在堿性溶液中不穩定，在酸性溶液中較穩定，加熱能促進其分解。另有報道[7]，三氯叔丁醇眼用可引起眼部刺激。在本實驗中，其刺激性與氯己定相當，也是單次給藥時無刺激性，長期使用時才具有輕度刺激性。

羥苯乙酯主要作用于細胞膜及競爭輔酶。在酸性環境中抑菌作用最好，但是其水溶性差，一般需要加熱溶解，但是加熱會令其酚基離解，pH值升高。在本實驗中，發現其刺激性偏大，單次給藥和多次給藥均具有輕度刺激性。

硼酸具有酸化、弱殺菌作用，但是由于其2%溶液pH值為4～6，且偏高滲、有收斂作用，故對眼睛刺激性較大，與本實驗結果一致，單次給藥時其已具有輕度刺激性，而多次長期使用則有中度刺激性。

總的來說，常用幾種抑菌劑的眼刺激性差異的原因主要是與各自的理化性質有關，如水溶性、pH值、使用濃度等。硫柳汞、苯扎氯銨、苯扎溴銨以其高效、穩定、低毒、低刺激性的特點，成為滴眼劑抑菌劑首選。而刺激性相對大的氯己定、三氯叔丁醇、羥苯乙酯則為次要選擇。硼酸因其刺激性較大，現已很少單獨作為抑菌劑來應用。

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學工業出版社，2005：附錄ⅠG.

[2]寧黎麗.眼用制劑研發過程中應關注抑菌劑的合理使用和質量控制[J].中國藥學雜志，2007，42（23）：1836.

[3]Sasaki H，Tei C，Yamamura K，et al.Effect of preservatives on systemic delivery of insulin by ocular instillation in rabbits[J].J Pharm Pharmacol，1994，46（11）：871.

[4]Pisella PJ，Pouliquen P，Baudouin C.Prevalence of ocular symptoms and signs with preserved and preservative free glaucom medication[J].Br J Ophthalmol，2002，86（4）：418.

[5]國家食品藥品監督管理局.關于發布化學藥物穩定性研究等16個技術指導原則的通知[EB/OL].http：//www.sda.gov.cn/WS01/CL0055/10368.html.2005-3-18.2009-2-9.

[6]莊 越.實用藥物制劑技術[M].北京：人民衛生出版社，1998：346.

[7]侯惠民.藥用輔料應用技術[M].北京：中國醫藥科技出版社，2001：358、362～363.

[8]顧德鴻.醫用消毒學[M].北京：北京科學技術出版社，1991：266.