毛細(xì)管GC法測定青蒿琥酯中有機(jī)溶劑的殘留量

孫紅英，趙愛麗，林振廣

（山東省醫(yī)藥工業(yè)研究所，濟(jì)南市 250100）

青蒿琥酯（artesunate），化學(xué)名為二氫青蒿素-10-a-丁二酸單酯，是青蒿素的衍生物。2006年，青蒿琥酯被世界衛(wèi)生組織定為瘧疾重癥搶救的首選藥物；1987年，獲得中國一類新藥1號證書。由于本品極微溶于水，因此在制備工藝中使用甲醇和乙酸乙酯等有機(jī)溶劑，但在國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中，沒有對其殘留溶劑進(jìn)行控制[1]。為保證用藥安全，筆者以N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，建立了毛細(xì)管氣相色譜（GC）法測定青蒿琥酯中2種有機(jī)溶劑的殘留量，方法快速、靈敏、簡單、準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

6890型GC儀、7694E型自動(dòng)頂空進(jìn)樣器（美國Agilent公司）。

青蒿琥酯標(biāo)準(zhǔn)品（山東省醫(yī)藥工業(yè)研究所合成室提供，批號：070822、070824、070826）；甲醇、乙酸乙酯為色譜純，N，N-二甲基甲酰胺為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：HP-5毛細(xì)管柱（以直徑為0.25～0.18 mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作為固定相)；柱溫：40℃，保持5 min，再以30℃·min-1的速度升至160℃；氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為250℃；載氣：高純N2；流速：30 mL·min-1；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；分流比：20∶1。采用頂空進(jìn)樣法測定，頂空進(jìn)樣條件：加熱溫度100℃，加熱時(shí)間45 min，進(jìn)樣量2 mL。在此色譜條件下，各溶劑分離良好，空白溶液無干擾。色譜見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 空白溶液的制備：精密量取N，N-二甲基甲酰胺2 mL，置頂空進(jìn)樣瓶中，作為空白溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備：稱取甲醇300 mg、乙酸乙酯500 mg，置有適量N，N-二甲基甲酰胺的100 mL量瓶中，充分振搖溶解，加N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取貯備液5 mL，置50 mL量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備：精密稱取青蒿琥酯0.2 g，置頂空進(jìn)樣瓶中，分別加N，N-二甲基甲酰胺2 mL，作為供試品溶液。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備[2]

分別精密量取對照品貯備液0.10、0.25、0.50、1.00、1.50、2.0 mL，置10 mL量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻。取上述各溶液2 mL，置頂空進(jìn)樣瓶中，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣。分別以甲醇、乙酸乙酯濃度（C）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（A）為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得甲醇的回歸方程為A＝204.9C－0.1（r＝0.9998），乙酸乙酯的回歸方程為A＝699.9C－0.7（r＝0.9997）。結(jié)果表明，甲醇、乙醇乙酯進(jìn)樣濃度分別在0.03～0.605、0.05～1.002 mg·mL-1范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

取對照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果，甲醇為、乙酸乙酯的RSD分別為1.2%、1.7%，表明儀器精密度符合要求。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液（批號：070822），按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、6、8 h進(jìn)樣，測定峰面積。結(jié)果，RSD＝1.15%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取供試品（批號070822）6份，按“2.9”項(xiàng)下方法操作，測定供試品中乙酸乙酯的殘留量平均為0.04%，均未檢出甲醇，RSD＝0.96%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取樣品（批號：070822)0.2 g，共10份，其中一份加入2 mL N，N-二甲基甲酰胺，作為空白溶液。分別配制低（80%）、中（100%）、高（120%）3種濃度的對照品溶液，分別取2 mL，加入盛有樣品的頂空進(jìn)樣瓶中；以“2.2.2”項(xiàng)下的對照品溶液作為對照，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣。結(jié)果，甲醇的平均回收率為98.7%，RSD＝0.73%；乙酸乙酯的平均回收率為99.1%，RSD＝1.2%。兩溶劑的平均回收率均在98.0%以上，符合要求[3]。甲醇、乙酸乙酯加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果分別見表1、表2。

2.8 最低檢出限測定

將對照品溶液逐級稀釋，分別取2 mL，置頂空進(jìn)樣瓶中，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，直至信噪比為3∶1，此時(shí)的濃度即為最低檢測限。結(jié)果，甲醇和乙酸乙酯的最低檢出濃度分別為1.02、0.88 μg·mL-1。

表1 甲醇的回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test of methanol（n＝9）

表2 乙酸乙酯的回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 2 Results of recovery test of ethyl acetate（n＝9）

2.9 樣品測定

精密量取對照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測定。結(jié)果，以外標(biāo)法計(jì)算出3批樣品的乙酸乙酯殘留量分別為0.14%、0.09%和0.13%，3批樣品中均未檢出甲醇。

3 討論

因青蒿琥酯極微溶于水，所以選N，N-二甲基甲酰胺為溶劑。國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中沒有對青蒿琥酯殘留溶劑的測定，為了保證用藥的安全性，根據(jù)2005年版《中國藥典》（二部)[4]的要求，將青蒿琥酯中甲醇和乙酸乙酯的限度定為0.3%和0.5%。經(jīng)過驗(yàn)證，該方法線性、精密度、回收率、最小檢測限等系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果均較好，能夠準(zhǔn)確、迅速地檢測出青蒿琥酯中殘留的甲醇和乙酸乙酯。

[1]國家藥典委員會編.國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].WS-127（X-103）-2005（1）.

[2]李福榮，史衛(wèi)鋒，夏作理.HPLC-MS法測定白花丹參中丹酚酸B的含量[J].中國藥房，2007，18（21)：1637.

[3]毛桂福，郭 濤.RP-HPLC法測定降壓一號片中3組分的含量[J].中國藥房，2007，18（22)：1738.

[4]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：309.